Билет№31
Антибиотики: классификация по источнику
Антибиотики — химиотерапевтические вещества, продуцируемые микроорганизмами, животными клетками, растениями, а также их производные и синтетические продукты, которые обладают избирательной спо собностью угнетать и задерживать рост микроорганизмов, а также подавлять развитие злокачественных новообразований.
Источники антибиотиков. Основными продуцентами природных ан тибиотиков являются микроорганизмы, ко торые, находясь в своей естественной среде (в основном, в почве), синтезируют антибио тики в качестве средства выживания в борьбе за существование. Животные и растительные клетки также могут вырабатывать некото рые вещества с селективным антимикробным действием (например, фитонциды), однако широкого применения в медицине в качестве продуцентов антибиотиков они не получили. Таким образом, основными источниками получения природных и полусинтетических антибиотиков стали:
• Актиномицеты (особенно стрептомицеты) — ветвящиеся бактерии. Они синтезиру ют большинство природных антибиотиков (80 %).
• Плесневые грибы — синтезируют природ ные бета-лактамы (грибы рода Cephalosporiumи Penicillium)Hфузидиевую кислоту.
• Типичные бактерии — например, эубактерии, бациллы, псевдомонады — продуцируют бацитрацин, полимиксины и другие вещества, обладающие антибактериальным действием.
Способы получения. Существует три основных способа получе ния антибиотиков: • биологический синтез (так получают при родные антибиотики — натуральные продук ты ферментации, когда в оптимальных ус ловиях культивируют микробы-продуценты, которые выделяют антибиотики в процессе своей жизнедеятельности);
• биосинтез с последующими химическими модификациями (так создают полусинтетичес кие антибиотики). Сначала путем биосинтеза получают природный антибиотик, а затем его первоначальную молекулу видоизменяют путем химических модификаций, например присо единяют определенные радикалы, в результате чего улучшаются противомикробные и фарма кологические характеристики препарата;
• химический синтез (так получают синте тические аналоги природных антибиотиков, например хлорамфеникол/левомицетин). Это вещества, которые имеют такую же структуру.
Комплемент, его структура, функции, пути актива ции,
Природа и характеристика комплемента. Комплемент является одним из важных фак торов гуморального иммунитета, играющим роль в защите организма от антигенов. Комплемент представляет со бой сложный комплекс белков сыворотки крови, находящийся обычно в неактивном состоянии и активирующийся при соедине нии антигена с антителом или при агрега ции антигена. В состав комплемента входят 20 взаимодействующих между собой белков, девять из которых являются основными ком понентами комплемента; их обозначают циф рами: С1, С2, СЗ, С4... С9. Важную роль играют также факторы В, D и Р (пропердин). Белки комплемента относятся к глобулинам и отличаются между собой по ряду физико-химических свойств. В частности, они сущес твенно различаются по молекулярной массе, а также имеют сложный субъединичный состав: Cl-Clq, Clr, Cls; СЗ-СЗа, СЗЬ; С5-С5а, С5b и т. д. Компоненты комплемента синтези руются в большом количестве (составляют 5—10% от всех белков крови), часть из них образуют фагоциты.
Функции комплемента многообразны: а) участвует в лизисе микробных и других клеток (цитотоксическое действие); б) обладает хемотаксической активностью; в) принимает учас тие в анафилаксии; г) участвует в фагоцитозе. Следовательно, комплемент является компонен том многих иммунологических реакций, направ ленных на освобождение организма от микробов и других чужеродных клеток и антигенов (на пример, опухолевых клеток, трансплантата).
Механизм активации комплемента очень сложен и представляет собой каскад фер ментативных протеолитических реакций, в результате которого образуется активный цитолитический комплекс, разрушающий стен ку бактерии и других клеток. Известны три пути активации комплемента: классический, альтернативный и лектиновый.
По классическому пути комплемент активирует ся комплексом антиген-антитело. Для этого достаточно участия в связывании антигена одной молекулы IgM или двух молекул IgG. Процесс начинается с присоединения к ком плексу АГ+АТ компонента С1, который рас падается на субъединицы Clq, Clr и С Is. Далее в реакции участвуют последовательно активированные «ранние» компоненты комплемента в такой последовательности: С4, С2, СЗ. Эта реакция имеет характер усиливающе гося каскада, т. е. когда одна молекула пре дыдущего компонента активирует несколько молекул последующего. «Ранний» компонент комплемента С3 активирует компонент С5, который обладает свойством прикрепляться к мембране клетки. На компоненте С5 путем последовательного присоединения «поздних» компонентов С6, С7, С8, С9 образуется литический или мембраноатакующий комплекс который нарушает целостность мембраны (образует в ней отверстие), и клетка погибает в результате осмотического лизиса.
Альтернативный путь активации комплемен та проходит без участия антител. Этот путь характерен для защиты от грамотрицательных микробов. Каскадная цепная реакция при аль тернативном пути начинается с взаимодействия антигена (например, полисахарида) с протеи нами В, D и пропердином (Р) с последующей активацией компонента СЗ. Далее реакция идет так же, как и при классическом пути — образу ется мембраноатакующий комплекс.
Лектиновыи путь активации комплемента также происходит без участия антител. Он ини циируется особым маннозосвязывающим белком сыворотки крови, который после взаимодейс твия с остатками маннозы на поверхности мик робных клеток катализирует С4. Дальнейший каскад реакций сходен с классическим путем. В процессе активации комплемента обра зуются продукты протеолиза его компонен тов — субъединицы СЗа и СЗb, С5а и С5b и дру гие, которые обладают высокой биологической активностью. Например, СЗа и С5а принимают участие в анафилактических реакциях, являют ся хемоаттрактантами, СЗb — играет роль в
|
Билет№32
Принципы и методы выделения чистых культур бакте
Чистой культурой называется популяция бактерий од ного вида или одной разновидности, выращенная на питательной среде. Многие виды бактерий подразделяют по одному признаку на биологические варианты — биовары. Биовары, различающие ся по биохимическим свойствам, называют хемоварами, по анти генным свойствам — сероварами, по чувствительности к фагу — фаговарами. Культуры микроорганизмов одного и того же вида, или биовара, выделенные из различных источников или в разное время из одного и того же источника, называют штаммами, которые обычно обозначаются номерами или какими-либо сим волами. Чистые культуры бактерий в диагностических бактерио логических лабораториях получают из изолированных колоний, пересевая их петлей в пробирки с твердыми или, реже, жидкими питательными средами.
Колония представляет собой видимое изолированное скоп ление особей одного вида микроорганизмов, образующееся в результате размножения одной бактериальной клетки на плотной питательной среде (на поверхности или в глубине ее). Колонии бактерий разных видов отличаются друг от друга по своей мор фологии, цвету и другим признакам.
Чистую культуру бактерий получают для проведения диагно стических исследований — идентификации, которая достигается путем определения морфологических, культуральных, биохимиче ских и других признаков микроорганизма.
Морфологические и тинкториальные признаки бактерий изучают при микроскопическом исследовании мазков, окрашенных разными методами, и нативных препаратов.
Культуральные свойства характеризуются питатель ными потребностями, условиями и типом роста бактерий на плот ных и жидких питательных средах. Они устанавливаются по мор фологии колоний и особенностям роста культуры.
Биохимические признаки бактерий определяются на бором конститутивных и индуцибельных ферментов, присущих определенному роду, виду, варианту. В бактериологической прак тике таксономическое значение имеют чаще всего сахаролитические и протеолитические ферменты бактерий, которые определя ют на дифференциально-диагностических средах.
При идентификации бактерий до рода и вида обращают вни мание на пигменты, окрашивающие колонии и культуральную среду в разнообразные цвета. Например, красный пигмент обра зуют Serratia marcescens, золотистый пигмент — Staphylococcus aureus (золотистый стафилококк), сине-зеленый пигмент — Pseu-domonas aeruginosa.
Для установления биовара (хемовара, серовара, фаготипа) проводят дополнительные исследования по выялвениб соответствующего маркера – определению фермента, антигена, чувствительности к Фанам.
Методы выделения чистых культур бакте рий.
Универсальным инструментом для производства посевов явля ется бактериальная петля. Кроме нее, для посева уколом при меняют специальную бактериальную иглу, а для посевов на чашках Петри — металлические или стеклянные шпатели. Для посевов жидких материалов наряду с петлей используют пасте ровские и градуированные пипетки. Первые предварительно из готовляют из стерильных легкоплавких стеклянных трубочек, которые вытягивают на пламени в виде капилляров. Конец ка пилляра сразу же запаивают для сохранения стерильности. У пастеровских и градуированных пипеток широкий конец за крывают ватой, после чего их помещают в специальные пеналы или обертывают бумагой и стерилизуют.
При пересеве бактериальной культуры берут пробирку в левую руку, а правой, обхватив ватную пробку IV и V пальцами, вынимают ее, пронося над пламенем горелки. Удерживая дру гими пальцами той же руки петлю, набирают ею посевной ма териал, после чего закрывают пробирку пробкой. Затем в пробирку со скошенным агаром вносят петлю с посевным материалом, опуская ее до конденсата в нижней ча сти среды, и зигзагообразным движением распределяют мате риал по скошенной поверхности агара. Вынув петлю, обжигают край пробирки и закрывают ее пробкой. Петлю стерилизуют в пламени горелки и ставят в штатив. Пробирки с посевами надг писывают, указывая дату посева и характер посевного мате риала (номер исследования или название культуры).
Посевы «газоном» производят шпателем на питательный агар в чашке Петри. Для этого, приоткрыв левой рукой крышку, пет лей или пипеткой наносят посевной материал на поверхность питательного агара. Затем проводят шпатель через пламя горел ки, остужают его о внутреннюю сторону крышки и растирают материал по всей поверхности среды. После инкубации посева появляется равномерный сплошной рост бактерий.
Показатели качества воды: микробное число, коли-
Общее микробное число— коли чество аэробных и факультативно-анаэробных бак терий в 1 мл воды — определяют у всех видов воды. Исследуемую воду вносят по 1 мл в две стерильные чашки Петри и заливают питательным агаром. Результат вычисляют путем суммирования среднего ариф метического числа бактерий, дрожжевых и плесневых грибов.
ОМЧ не должно превышать 100 микробов в 1 мл. воды.
Коли – индекс – измеряется количеством БГКП, содержащихся в 1 л. исследуемой воды.
Определение колиформных бактерий. Общие колиформные бактерии — это Гр- аспорогенные палочки, не обладающие оксидазной активностью и сбраживающие лактозу с образовани ем кислоты и газа. Их обнаружение свидетельствует о свежем фекальном загрязнении воды.
Общие колиформные бактерии должны отсутствовать в 100 мл. воды.
Определение колифагов. Присутствие колифагов (бактериофа гов, паразитирующих на Е. coli) определяют в воде поверхност ных источников и питьевой воде, в сточных водах. Исследование проводят методом агаровых слоев. При наличии колифагов обра зуются прозрачные бляшки.
Колифаги не должны определяться в 100 мл. воды.
Методы санитарно-бактериологического исследования воды.
В воде регистрируют кишечную палочку, БГКП (колиформные палочки), энте рококк, стафилококки. На основании количественного выявле ния этих
|
Билет№33
2.Анафилактический шок и сывороточная болезнь.
Анафилаксия пред ставляет собой реакцию немедленного типа, возникающую при парентеральном повторном введении антигена в ответ на повреждающее действие комплекса антиген — антитело и характеризу ющуюся стереотипно протекающей клинической и морфологи ческой картиной.
Основную роль в анафилаксии играет цитотропный IgE, име ющий сродство к клеткам, в частности базофилам и тучным клеткам. После первого контакта организма с антигеном обра зуется IgE, который вследствие цитотропности адсорбируется на поверхности названных выше клеток. При повторном попадании в организм этого же антигена IgE связывает антиген с образо ванием на мембране клеток комплекса IgE — антиген. Комплекс повреждает клетки, которые в ответ на это выделяют медиато ры — гистамин и гистаминоподобные вещества (серотонин, кинин). Эти медиаторы связываются рецепторами, имеющимися на поверхности функциональных мышечных, секреторных, сли зистых и других клеток, вызывая их соответствующие реакции. Это ведет к сокращению гладкой мускулатуры бронхов, кишеч ника, мочевого пузыря, повышению проницаемости сосудов и другим функциональным и морфологическим изменениям, ко торые сопровождаются клиническим проявлением. Клинически анафилаксия проявляется в виде одышки, удушья, слабости, беспокойства, судорог, непроизвольного мочеиспускания, дефе кации и др. Анафилактическая реакция протекает в три фазы: в 1-й фазе происходит сама реакция антиген — антитело; во 2-й фазе выделяются медиаторы анафилактической реакции; в 3-й фазе проявляются функциональные изменения.
Анафилактическая реакция возникает спустя несколько ми нут или часов после повторного введения антигена. Протекает в виде анафилактического шока или как местные проявления. Ин тенсивность реакции зависит от дозы антигена, количества об разующихся антител, вида животного и может закончиться выз доровлением или смертью. Анафилаксию легко можно вызвать в эксперименте на животных. Оптимальной моделью для воспро изведения анафилаксии является морская свинка. Анафилаксия может возникать на введение любого антигена любым способом (подкожно, через дыхательные пути, пищеварительный тракт) при условии, что антиген вызывает образование иммуноглобу линов. Доза антигена, вызывающая сенсибилизацию, т. е. повы шенную чувствительность, называется сенсибилизирующей. Она обычно очень мала, так как большие дозы могут вызвать не сенсибилизацию, а развитие иммунной защиты. Доза антигена, введенная уже сенсибилизированному к нему животному и вы зывающая проявление анафилаксии, называется разрешающей. Разрешающая доза должна быть значительно больше, чем сен сибилизирующая.
Состояние сенсибилизации после встречи с антигеном сохра няется месяцами, иногда годами; интенсивность сенсибилизации можно искусственно уменьшить введением малых разрешающих доз антигена, которые связывают и выводят из циркуляции в организме часть антител. Этот принцип был использован для де сенсибилизации (гипосенсибилизации), т.е. предупреждения ана филактического шока при повторных введениях антигена. Впер вые способ десенсибилизации предложил русский ученый А. Без редка (1907), поэтому он называется способом Безредки. Спо соб состоит в том, что человеку, ранее получавшему какой-либо антигенный препарат (вакцину, сыворотку, антибиотики, пре параты крови и др.), при повторном введении (при наличии у него повышенной чувствительности к препарату) вначале вво дят небольшую дозу (0,01; 0,1 мл), а затем, через 1—1'/2 ч, — основную. Таким приемом пользуются во всех клиниках для из бежания развития анафилактического шока; этот прием являет ся обязательным.
Возможен пассивный перенос анафилаксии с антителами.
Сывороточной болезнью называют реакцию, возникающую при разовом парентеральном введении больших доз сывороточных и других белковых препаратов. Обычно реакция возникает спустя 10—15 сут. Механизм сывороточной болезни связан с образова нием антител против введенного чужеродного белка (антигена) и повреждающим действием на клетки комплексов антиген — антитело. Клинически сывороточная болезнь проявляется отеком кожи и слизистых оболочек, повышением температуры тела, при-пуханием суставов, сыпью и зудом кожи; наблюдаются измене ния в крови (увеличение СОЭ, лейкоцитоз и др.). Сроки про явления и тяжесть сывороточной болезни зависят от содержа ния циркулирующих антител и дозы препарата. Это объясняется тем, что ко 2-й неделе после введения белков сыворотки выра батываются антитела к белкам сыворотки и образуется комплекс антиген — антитело. Профилактика сывороточной болезни осу ществляется по способу Безредки.
Возбудители сальмонеллезов. Таксономия.
Острая кишечная зоонозная инфекция, вызываемая сероварами сальмонелл, характери зующаяся поражением ЖКТ.
Морфологические свойства: подвижные, грам «-» палочки, капсулы нет. Хорошо растут на простых питательных и желчесодержащих средах. На плотных – образуют колонии в R-и S-формах, на жидких – помутнение. На лактозособержащих средах образуют бесцветные колонии.
Биохимическая активность: ферментация глк. до кислоты и газа, отсутствие ферментации лактозы, продукция сероводорода, отсутствие индолообразования.
Антигенная структура: соматический О-антиген, жгутиковый Н-антиген, Некоторые – К-антиген. Род Salmonellaсостоит из двух видов — вида S. enterica, в который включены все сальмо неллы, являющиеся возбудителями человека и теплокровных животных, и вида S. bongori, который подразделяется на 10 сероваров. Вид S. entericaразделен на 6 подвидов, ко торые подразделены на серовары. Некоторые серовары сальмонелл, в част ности S. Typhi, имеют полисахаридный Vi-антиген, являющийся разновидностью К-антигена.
Эпидемиология. Возбудителями сальмонеллеза является большая группа саль монелл, входящая в подвид enterica. Наиболее часто возбудителями сальмонеллезов у человека являются серовары S. Typhimurium, S. Dublin, S. Choleraesuis. Основные факторы передачи — мясо, молоко, яйца, вода.
|
Скачать 0.51 Mb.