Микробиология. практикум микробиология ворд. Практикум министерство науки и высшего образования российской федерации

• Название: Практикум министерство науки и высшего образования российской федерации
• Анкор: Микробиология
• Дата: 03.02.2022
• Размер: 3.98 Mb.
• Имя файла: практикум микробиология ворд.docx
• Тип: Практикум; #350290
• страница: 11 из 23

Лабораторная работа № 7

Получение чистых культур микроорганизмов

Основные теоретические положения

Следующим этапом является получение чистых культур. С тех- нической точки зрения, существует множество способов выделе- ния чистой культуры, их используют в зависимости от свойств самих выделяемых бактерий. Но в основе всех методов лежит единый принцип – получение чистой культуры из одной изолированной колонии. Все клетки колонии на твердых питательных средах представляют собой клоны – потомство одной единственной клет- ки, поэтому подобные колонии очень удобно использовать.

Если планируется выделение чистой культуры из жидкой пита- тельной среды, то лучше воспользоваться методом Дригальского (рис 10). Для этого нужны стерильный шпатель Дригальского, три (обычно) чашки Петри со средой и непосредственно источник микроорганизмов. Техника посева следующая:

1. 
   В стерильных условиях приготовить три чашки Петри с твер- дой средой (расплавить, разлить, остудить).
   
2. 
   Самплером со стерильным наконечником или стерильной пипеткой внести небольшой объем накопительной культуры или любого другого источника микроорганизмов.
   
3. 
   Аккуратно, стараясь не повредить агар, стерильным шпате- лем Дригальского распределить суспензию по всей поверхности среды.
   
4. 
   Этим же шпателем так же аккуратно и равномерно протереть поверхность твердой среды во второй чашке Петри, затем в третьей.
   
5. 
   Подписать чашки Петри, перевернуть вверх крышками, что- бы конденсат не мешал росту изолированных колоний, и помес- тить в термостат на необходимую температуру.
   
6. 
   Спустя некоторое время (в зависимости от конкретного слу- чая) на твердой среде вырастут изолированные колонии. Чаще всего это происходит на третьей чашке Петри.
   
7. 
   В стерильных условиях производится пересев данной колонии на скошенный агар для проверки чистоты выделенной культуры.
   

1 3

Рис. 10. Выделение чистой культуры по методу Дригальского:

1– шпатель Дригальского; 2 – техника распределения клеток;

3– результат посева
Другой способ выделения чистой культуры – метод истощаю- щего штриха с использованием обычной микробиологической пет- ли. Техникапосева:

1. 
   В стерильных условиях приготовить одну чашку Петри с твер- дой средой (расплавить, разлить, остудить).
   
2. 
   В асептических условиях отобрать исследуемую культуру петлей и в несколько параллельных штрихов в одном направлении распределить отобранный материал.
   
3. 
   Прокалить петлю в пламени докрасна и остудить.
   
4. 
   Провести серию однонаправленных штрихов стерильной петлей в другом направлении (рис. 11).
   
5. 
   Снова прокалить петлю, остудить и провести серию штри- хов, также поменяв направление.
   
6. 
   Повторить цикл.
   
7. 
   Подписать чашку Петри, перевернуть крышкой вверх и по- ставить в термостат. Спустя некоторое время в области четвертой группы штрихов появятся изолированные колонии, а в остальных областях, скорее всего, сплошной «газон».
   

Рис. 11. Выделение чистой культуры методом истощающего штриха
Нередко приходится пересевать подобными методами коло- нии микроорганизмов несколько раз с целью выделить чистую куль- туру. Два вышеописанных способа наиболее технологически прос- ты и подходят лишь для аэробов. Чистые культуры микроаэрофи- лов и факультативных аэробов получаются методом глубинного посева, когда разведения накопительной культуры или другого по- севного материала вносятся вглубь столбика агаризованной пита- тельной среды. Сложнее обстоит дело с анаэробными бактериями; для выделения чистых культур анаэробных микроорганизмов су- ществуют особые техники.

Кроме этого, существуют и методы получения чистых культур с помощью специальных приборов – микроманипуляторов и мик- роселекторов или же с помощью капельного метода.

Цели работы: понять принципы и освоить различные спосо- бы получения чистых культур микроорганизмов.

Оборудование и реактивы

1. 
   Колбы с приготовленными на лабораторной работе № 5 средами.
   
2. 
   Накопительные культуры, поставленные на лабораторной работе № 6.
   
3. 
   Стерильные шпатели.
   
4. 
   Предметные и покровные стекла.
   
5. 
   Микроскопы.
   
6. 
   Микробиологические петли.
   
7. 
   Вата и фильтровальная бумага.
   
8. 
   Спиртовки, зажигалки.
   

Ход работы

1. 
   Внести в рабочую тетрадь подробное внешнее описание по- лученной накопительной культуры – мутность, цвет, запах, цвет ин- дикаторов (если есть), форма колоний (если есть).
   
2. 
   Подготовить препарат «раздавленная капля» с полученной культурой, отметить в тетради морфотипы и подвижность клеток.
   
3. 
   Приготовить в асептических условиях чашки Петри с агари- зованной средой (по бригадам). Для этого расплавить среду в колбе и в ламинарном боксе разлить ее на три чашки Петри.
   
4. 
   Одним из вышеописанных способов в асептических услови- ях провести рассев полученной накопительной культуры на твер- дую питательную среду.
   
5. 
   Оформить отчет по лабораторной работе в рабочей тетра- ди. Внести в него описание обоих способов получения чистых куль- тур и указать принцип, лежащий в их основе.
   

Вопросы для самоподготовки

1. 
   На каких принципах построено выделение чистых культур микро- организмов?
   
2. 
   Для чего требуется выделять чистые культуры?
   
3. 
   Какими способами необходимо подтвердить чистоту выделенной культуры?