Микробиология. практикум микробиология ворд. Практикум министерство науки и высшего образования российской федерации
![]()
|
Лабораторная работа № 7Получение чистых культур микроорганизмовОсновные теоретические положенияСледующим этапом является получение чистых культур. С тех- нической точки зрения, существует множество способов выделе- ния чистой культуры, их используют в зависимости от свойств самих выделяемых бактерий. Но в основе всех методов лежит единый принцип – получение чистой культуры из одной изолированной колонии. Все клетки колонии на твердых питательных средах представляют собой клоны – потомство одной единственной клет- ки, поэтому подобные колонии очень удобно использовать. Если планируется выделение чистой культуры из жидкой пита- тельной среды, то лучше воспользоваться методом Дригальского (рис 10). Для этого нужны стерильный шпатель Дригальского, три (обычно) чашки Петри со средой и непосредственно источник микроорганизмов. Техника посева следующая: В стерильных условиях приготовить три чашки Петри с твер- дой средой (расплавить, разлить, остудить). Самплером со стерильным наконечником или стерильной пипеткой внести небольшой объем накопительной культуры или любого другого источника микроорганизмов. Аккуратно, стараясь не повредить агар, стерильным шпате- лем Дригальского распределить суспензию по всей поверхности среды. Этим же шпателем так же аккуратно и равномерно протереть поверхность твердой среды во второй чашке Петри, затем в третьей. Подписать чашки Петри, перевернуть вверх крышками, что- бы конденсат не мешал росту изолированных колоний, и помес- тить в термостат на необходимую температуру. Спустя некоторое время (в зависимости от конкретного слу- чая) на твердой среде вырастут изолированные колонии. Чаще всего это происходит на третьей чашке Петри. В стерильных условиях производится пересев данной колонии на скошенный агар для проверки чистоты выделенной культуры. ![]() 1 3 Рис. 10. Выделение чистой культуры по методу Дригальского: 1– шпатель Дригальского; 2 – техника распределения клеток; 3– результат посева Другой способ выделения чистой культуры – метод истощаю- щего штриха с использованием обычной микробиологической пет- ли. Техникапосева: В стерильных условиях приготовить одну чашку Петри с твер- дой средой (расплавить, разлить, остудить). В асептических условиях отобрать исследуемую культуру петлей и в несколько параллельных штрихов в одном направлении распределить отобранный материал. Прокалить петлю в пламени докрасна и остудить. Провести серию однонаправленных штрихов стерильной петлей в другом направлении (рис. 11). Снова прокалить петлю, остудить и провести серию штри- хов, также поменяв направление. Повторить цикл. Подписать чашку Петри, перевернуть крышкой вверх и по- ставить в термостат. Спустя некоторое время в области четвертой группы штрихов появятся изолированные колонии, а в остальных областях, скорее всего, сплошной «газон». ![]() Рис. 11. Выделение чистой культуры методом истощающего штриха Нередко приходится пересевать подобными методами коло- нии микроорганизмов несколько раз с целью выделить чистую куль- туру. Два вышеописанных способа наиболее технологически прос- ты и подходят лишь для аэробов. Чистые культуры микроаэрофи- лов и факультативных аэробов получаются методом глубинного посева, когда разведения накопительной культуры или другого по- севного материала вносятся вглубь столбика агаризованной пита- тельной среды. Сложнее обстоит дело с анаэробными бактериями; для выделения чистых культур анаэробных микроорганизмов су- ществуют особые техники. Кроме этого, существуют и методы получения чистых культур с помощью специальных приборов – микроманипуляторов и мик- роселекторов или же с помощью капельного метода. Цели работы: понять принципы и освоить различные спосо- бы получения чистых культур микроорганизмов. Оборудование и реактивыКолбы с приготовленными на лабораторной работе № 5 средами. Накопительные культуры, поставленные на лабораторной работе № 6. Стерильные шпатели. Предметные и покровные стекла. Микроскопы. Микробиологические петли. Вата и фильтровальная бумага. Спиртовки, зажигалки. Ход работыВнести в рабочую тетрадь подробное внешнее описание по- лученной накопительной культуры – мутность, цвет, запах, цвет ин- дикаторов (если есть), форма колоний (если есть). Подготовить препарат «раздавленная капля» с полученной культурой, отметить в тетради морфотипы и подвижность клеток. Приготовить в асептических условиях чашки Петри с агари- зованной средой (по бригадам). Для этого расплавить среду в колбе и в ламинарном боксе разлить ее на три чашки Петри. Одним из вышеописанных способов в асептических услови- ях провести рассев полученной накопительной культуры на твер- дую питательную среду. Оформить отчет по лабораторной работе в рабочей тетра- ди. Внести в него описание обоих способов получения чистых куль- тур и указать принцип, лежащий в их основе. Вопросы для самоподготовкиНа каких принципах построено выделение чистых культур микро- организмов? Для чего требуется выделять чистые культуры? Какими способами необходимо подтвердить чистоту выделенной культуры? |