Микробиология. практикум микробиология ворд. Практикум министерство науки и высшего образования российской федерации
 Скачать 3.98 Mb.
|
Лабораторная работа № 9Санитарная микробиологияОсновные теоретические положенияСанитарная микробиология – раздел медицинской микробио- логии, который занимается изучением микрофлоры различных объектов окружающей среды и их влиянием на организм челове- ка, а также прямой и косвенной оценкой загрязненности окружаю- щее среды микробиологическими объектами. Данная наука стоит на границе медицинской микробиологии, эпидемиологии, гигие- ны, пищевой микробиологии.  Важно! Так как в данной работе могут быть получены культу- ры патогенных бактерий, после посева пробирки и чашки Петри закрываются и изолируются парафильмом. Никакая дальней- шая работа с культурами не ведется, после считывания визу- альных результатов культуры автоклавируются.Объекты исследования санитарной микробиологии: Различные поверхности – пол, потолок, стены; рабочая по- верхность, поверхность кожи и т. д. Вода питьевая, техническая, водопроводная и т. д. Почва. Пищевые продукты. Слизистые оболочки людей (в особенности медицинского персонала). Санитарная микробиология базируется на ряде принципов. Принцип взятия проб. Они должны быть отобраны в стериль- ных условиях и быстро доставлены в лабораторию. Условия, в кото- рых они транспортируются, не должны быть ни благоприятными для размножения микроорганизмов, ни приводящими к их гибели. Для таких целей существуют специальные консервирующие (транс- портные) среды. Принцип повторности анализов. Дело в том, что микроорга- низмы (как патогенные, так и санитарно-показательные) распро- странены в окружающей среде неравномерно. В связи с этим не- обходимо отбирать несколько проб из одного места и серию проб из разных мест исследуемого объекта. Кроме этого, состав микроор- ганизмов может изменяться со временем, поэтому из одного и того же объекта нужно отбирать пробы в различное время. Принципстандартности. Вся санитарная микробиология по- строена на стандартных методиках, прописанных во множестве нормативных документов (ГОСТ, СанПиН, МУК). Все процедуры требуется проводить, неукоснительно следуя нормам и правилам для корректного анализа, а также для возможности корректного сравнения результатов с известными показателями. Принцип комплексности. Нельзя судить о загрязненности объек- та только по результатам одного теста. Необходимо проводить не- сколько разнообразных исследований как для качественного, так и для количественного анализа исследуемого объекта. Все методы санитарной микробиологии можно подразделить на прямые, при которых находят непосредственно патогенные мик- роорганизмы или их токсины, и косвенные, при которых находят санитарно-показательные микроорганизмы, служащие индикатора- ми микробиологического загрязнения среды. В силу того, что па- тогенные микроорганизмы приспособлены к проживанию внутри организма-хозяина и слабо приспособлены (большинство) к усло- виям внешней среды, прямые методы исследования не могут дать полноценный ответ. Для удобства работы в санитарной микробиологии выделяют группу санитарно-показательныхмикроорганизмов(СПМ). В нее включаются условно-патогенные микроорганизмы, входящие в со- став нормальной микрофлоры и в норме выделяющиеся во внеш- нюю среду различными способами. Сами по себе эти микроорганиз- мы для людей с нормальной иммунной системой опасности не пред- ставляют. Однако, в отличие от патогенных микроорганизмов, они способны дольше сохраняться во внешней среде и служить инди- каторами микробиологического загрязнения объекта. То есть чем больше находят СПМ в среде, тем вероятнее ее загрязнение пато- генными микроорганизмами. К СПМ первой группы относят бактерии группы кишечной па- лочки (БГКП, колиморфные бактерии) – Escherichia, Citrobacter, Enterobacterи другие представители семейства Enterobacteriaceae. Наличие бактерий этой группы свидетельствует о фекальном за- грязнении исследуемого объекта. Кроме этого, наличие грамполо- жительных клеток бактерий рода Enterococcusсвидетельствует о недавнем фекальном загрязнении, так как эти бактерии во внеш- ней среде погибают достаточно быстро. К СПМ второй группы относят стафилококки, зеленящие стреп- тококки (альфа-гемолиз), гемолизирующие стрептококки (бета-ге- молиз) и несколько других. Все эти микроорганизмы выделяются во внешнюю среду из верхних дыхательных путей и носоглотки че- ловека. Наличие бактерий данной группы является показателем воздушно-капельного загрязнения исследуемого объекта. К третьей группе СПМ относят протей (Proteus), термофилы, нитрификаторы. Все эти микроорганизмы не являются составляю- щей микрофлоры человека, но учитывать их наличие и количество во внешней среде необходимо, так как они являются показателями загрязнения разлагающимися органическими субстратами. Существует множество косвенныхметодовоценкизагрязненияокружающейсредымикроорганизмами. ОМЧ [КОЕ/мл, КОЕ/г, КОЕ/м3] – общее микробное число – это количество «всех» микроорганизмов в 1 мл жидкости или 1 г твердого вещества. Высчитывают это число простым подсчетом выросших колоний на мясопептонном агаре (МПА). Естественно, в подобных условиях растут не все микроорганизмы, в среде реаль- но содержащиеся, а лишь аэробные либо факультативно-анаэроб- ные мезофильные бактерии, способные расти на МПА. Но именно подобные бактерии и представляют интерес для санитарной микро- биологии. Титр – это наименьший объем/масса исследуемого образца, в котором содержится хотя бы одна клетка СПМ. Индекс– количество СПМ в 1 л (воздуха/жидкостей) или в 1 г твердого образца. Это показатель, обратный титру. Для определения СПМ существуют специализированные диф- ференциально-диагностические среды (д.-д.). Подобные среды со- держат в себе индикатор, меняющий цвет среды при изменении pH (что происходит вследствие метаболизма определенных бактерий). Кроме того, дифференциальными признаками могут выступать газообразование или образование сероводорода. Для выделения каж- дой конкретной группы микроорганизмов существует огромное количество дифференциально-диагностических сред. В качестве примера будет рассмотрен агар Клиглера–д.-д. среда для иденти- фикации энтеробактерий по их способности ферментировать (сбра- живать) глюкозу, лактозу, а также по их способности образовывать газ и сероводород. Рост различных микроорганизмов и их призна- ки указаны в табл. 4. Таблица взята из инструкции к готовой ком- мерческой среде. Цель работы: освоить основные методы санитарной микро- биологии, принципы их работы, изучить основные показатели микробиологической загрязненности окружающей среды. Т а б л и ц а 4 Рост различных бактерий на агаре Клиглера*
* Ж – желтый цвет, К – красный цвет. Оборудование и реактивыГотовые стерилизованные дифференциально-диагностичес- кие питательные среды: МПА, агар Эндо, стафилококковый (соле- вой) агар, агар Кесслера, агар Клиглера, среда Сабуро. Стерильные зонды для отбора проб. Стерильные емкости для отбора воды. Термостат. Ход работыСанитарно-бактериологическое исследование воздуха. Чашки Петри с МПА открыть и оставить на час, желательно на уровне сидящего или стоящего человека. Под воздействием гра- витации бактерии и частицы, их содержащие, оседают на поверх- ности питательной среды. Чашки закрыть и поставить в термостат на 37 °С на сутки. По ис- течении суток можно также поставить чашки на вторые сутки в термостат с температурой 25 °С. Подсчитать количество выросших колоний. Если их менее 250, воздух считается чистым, при количестве колоний от 250 до 500 – умеренно загрязненным, и при количестве колоний более 500 – загрязненным. Для сравнительного анализа можно одновременно исследовать воздух в различных помещениях. Санитарно-бактериологическое исследование воды. Произвести отбор материала в стерильные емкости с прикреп- ленной стерильной запасной крышкой. Взять пробы водопровод- ной воды после предварительной стерилизации поверхности крана и десятиминутного пропуска воды. Воду из открытых водоемов бе- рут с глубины 10–15 см от поверхности и 10–15 см от дна. Определить ОМЧ воды посевом в две чашки Петри с МПА двух объемов воды (например, 0,1 и 0,01 мл) в зависимости от ее предполагаемой загрязненности. Посев следует производить в рас- плавленную и остуженную до 45–50 °С среду. После посева среду необходимо тщательно перемешать. Среды поместить в термо- стат (37 °С) на сутки, после чего подсчитать количество появивших- ся колоний и определить ОМЧ воды. Питьевая воды является чис- той при ОМЧ меньше 100. Санитарно-бактериологическое исследование смывов. Произвести отбор проб с помощью стерильных одноразовых зондов или самодельных увлажненных стерильных тампонов. Для изучения подойдет любая поверхность – руки, телефоны, руч- ки дверей, унитазы, рабочие поверхности и т. д. Сразу после забора материала его следует засевать на питатель- ные среды. В данном случае можно пользоваться как чашками Пет- ри, так и скошенным агаром. Выбор сред для исследования также ничем не ограничен – МПА, солевой агар для выявления бактерий рода Staphylococcus; агар Эндо, агар Клиглера, цитратный агар Сим- монса и многие другие для выявления и идентификации энтеробак- терий; среда Сабуро с теллуритом калия для выявления грибов. Засеянные чашки Петри и пробирки инкубировать в термоста- те в течение суток при температуре 37 °С. После этого выросшие ко- лонии идентифицировать в зависимости от конкретной среды. Оформление отчета. В отчет необходимо включить теоретические аспекты сани- тарной микробиологии, методику отбора проб, методику анализа и полученные результаты. Вопросы для самоподготовкиЧто такое санитарно-показательные микроорганизмы и какими свой- ствами они обладают? Для чего в современном обществе нужна санитарная микробиоло- гия? Какие принципы лежат в основе забора проб при исследованиях в рамках санитарной микробиологии? |