Микробиология. практикум микробиология ворд. Практикум министерство науки и высшего образования российской федерации
 Скачать 3.98 Mb.
|
Лабораторная работа № 6Получение накопительных культур микроорганизмовОсновные теоретические положенияЧистая культура – популяция микроорганизмов на питатель- ной среде (жидкой или твердой), представленная клетками одного вида. Это основной тип культур, с которыми имеет дело микробио- логия. Они позволяют изучать морфологические, биохимические, генетические и другие свойства исключительно одного вида мик- роорганизмов, пусть даже понятие «вид» по отношению к бактери- ям является весьма расплывчатым. Чистые культуры – исключи- тельно продукт деятельности человека, в естественных условиях они не встречаются. В любой экологической нише, будь то почва, водоем или какая-либо поверхность, существует несколько, а чаще всего огромное множество видов микроорганизмов. Процесс выде- ления чистых культур достаточно хорошо известен и рутинен для из- вестных видов бактерий. При выделении чистой культуры из ес- тественных условий необходимо пройти стадию накопительной культуры. Накопительнаякультура– популяция нескольких видов мик- роорганизмов, выращенных в определенных элективных (селек- тивных, накопительных) условиях. Элективные условия благопри- ятствуют существованию необходимой группы микроорганизмов и/или препятствуют росту остальных. Под элективными условиями в каждом конкретном случае по- нимается разное. Такими условиями могут быть в первую очередь источник углерода (CO2 для автотрофов, С1-соединения для мети- лотрофов), источник энергии (свет как единственный источник энер- гии для фотосинтетиков) и отношение к молекулярному кислороду (в присутствии кислорода будут развиваться только аэробы). Кро- ме этого, в качестве элективных факторов используются pH (мо- лочнокислые бактерии могут расти и при pH = 4, уробактерии – при pH = 9), температура (для термофилов и спорообразующих бак- терий), концентрации различных веществ в среде. Большое значение для успешного выделения физиологической группы бактерий имеет источник посевного материала. Если сре- да, откуда выделяются бактерии, уже обогащена искомой группой, то это облегчит выделение. В качестве примера можно привести Mn-окисляющие бактерии – они широко распространены в почве, но проще их будет выделить из образцов глубоководных осадков марганца. Эта лабораторная работа – вторая в большом цикле работ по выделению и описанию культуры бактерий. На предыдущем занятии были приготовлены питательные среды и посуда для ра- боты. На этом занятии необходимо выполнить задание под тем же номером, что и на предыдущем. Практически в каждой работе необходимо соблюдать условия стерильности – прокаливать рабо- чий инструмент, обжигать горлышко пробирки или колбы, в кото- рую вносится посевной материал. Цель работы: изучить понятия «накопительная культура» и «чис- тая культура», приобрести навыки выделения накопительных куль- тур из естественных субстратов. Оборудование и реактивыПриготовленные среды (см. лабораторную работу № 5). Посевной материал (почва, сено, картофель, навоз, пиво). Пробирки, колбы, чашки Петри. Микробиологические петли, шпатели Дригальского, капил- ляры, шпатели. Кипящая водяная баня. Ход работыБ р и г а д а 1 В асептических условиях инокулировать (внести посевной материал) небольшим количеством навоза две подготовленные пробирки с жидкой средой. Пробирки плотно закрыть ватными пробками и прогреть на кипящей водяной бане в течение 20 мин. Подписанные пробирки (день и пара практики, номер брига- ды, дата) поставить на 7 дней в термостат (30 °С). Б р и г а д а 2 Расплавить 100 мл среды из одной колбы объемом 250 мл. Разлить среду по трем чашкам Петри, дать ей остыть и застыть. В асептических условиях, используя стеклянный капилляр, смоченный в воде, разложить маленькие комочки почвы по чашке Петри в количестве 25–35 шт. Подписать чашки Петри (день и пара практики, номер бри- гады, дата) и поставить в термостат (30 °С) на 7 дней. Б р и г а д а 3 Поместить 1 г сена в колбу объемом 100–150 мл, залить 30 мл воды, настаивать в течение 30 мин. Аккуратно слить сенной настой, не допуская попадания сена, и разлить в две пробирки, плотно закрыть их ватными пробками. Подержать на кипящей водяной бане в течение 20 мин. Подписать пробирки (день и пара практики, номер бригады, дата) и поставить в термостат (30 °С) на 7 дней. Б р и г а д а 4 Неочищенный картофель нарезать на мелкие ломтики, по- местить их в колбу объемом 100 мл и залить водой наполовину. Добавить CaCO3 на кончике шпателя, плотно закрыть ватной пробкой. Прогреть на кипящей водяной бане в течение 20 мин. Подписать колбу (день и пара практики, номер бригады, дата) и поставить в термостат (30 °С) на 7 дней. Б р и г а д а 5 В асептических условиях добавить по 0,3 г почвы в каждую колбу на 100 мл с 30 мл среды, закрыть ватной пробкой. В асептических условиях смочить лакмусовую бумажку стерильным дистиллятом, подвесить ее между средой и пробкой, не касаясь среды. В асептических условиях смочить фильтровальную бумагу раствором ацетата свинца и подвесить таким же образом, не ка- саясь самой среды. Подписать колбы (день и пара практики, номер бригады, дата) и поставить в термостат (30 °С) на 7 дней. Б р и г а д а 6 В три колбы объемом 50 мл влить 24, 22 и 20 мл непастери- зованного пива. Добавить 1, 3 и 5 мл 5 % столового уксуса соответственно, закрыть ватными пробками. Подписать колбы (день и пара практики, номер бригады, дата) и поставить в термостат (30 °С) на 7 дней. Вопросы для самоподготовкиСвоими словами дайте определение понятию «накопительная культура». Своими словами дайте определение понятию «чистая культура». Какие условия могут выступать в качестве элективных для выде- ления накопительных культур? |