Вторая личность. Раку можно противостоять. Противостоять
 Скачать 7.23 Mb.
|
|
| идентичные условия работа велась нес монослоем, ас суспензией клеток, помещенных в конические пробирки и бюретки. Для инкубации клеток использовались питательные среды для трихомонад с добавлением агар-агара и дрожжевого экстракта. И с следования на клеточном уровне В современной науке наибольшее признание получили генетические исследования. Но для бесполых организмов наиболее эффективный и мощный метод генетических I исследований - метод гибридизации - оказался невозможным. Вместо него используется анализ фенотипов. В данных экспериментах использовались два основных метода фенотипического анализа 1) метод индукции физическими и химическими воздействиями, как наиболее эффективный источник наследственных вариаций исследуемых клеток) метод сравнительных морфофизиологических исследований при одинаковых условиях культивирования опухолевых клеток и трихомонад, имеющих независимое происхождение. Трихомонады - бесполые животные-клетки, в них сочетаются клетка и организм, особь и вид. Атак как для агамно (бесполо) размножающихся простейших вид, прежде всего, выражается морфофизиологическими признаками, то при проведении эксперимента ставилась следующая задача воздействием физическими и химическими факторами (летальными для нормальных клеток) выявить наследственные вариации опухолевых клеток, то есть сделать узнаваемыми путем перевода их в амебовидные и жгутиковые формы; Сравнительный анализ морфофизиологических характеристик опухолевых клеток и трихомонад показала) опухолевые клетки и трихомонады не гибнут при минусовой температуре и перепадах температур более 30°С; б) при обработке трипсином все исследуемые клетки не переварились — это свидетельствует о том, что они - живые микроорганизмы (ДН ортроп утверждал Трипсин не проникает в живую клетку, не атакует ее поверхность, так как предполагается небелковая природа поверхности кле ток»); в) в процессе культивирования в виде суспензий в питательной среде для трихомонад и особенно после облучения клеточных культур наблюдалось их морфологическое изменение исходные опухолевые клетки и цистоподобны е трихомонады имели размеры 3-6 микрон, нос переходом в другие формы протоплазма их разуплотнялась, и они достигли величины 25-35 микрону амебовидных и 15-18 микрону жгутиковых г) способы размножения опухолевых клеток и три хо монад были идентичными, но отличались от размножения нормальных клеток, для которых характерен только митоз, начинающийся с распределения пар хромосом над ве равноценные части и деления ядра над ве половинки. В эксперименте наблюдалось (см. таблицу Способы размножения опухолевых клеток и паразитических ж гутиконосцев Таблица 2 Опухолеаые клвтчи Паразите/ чсс*и£ жгут инонооаь! Наименование О пух о ли iiСпособьi размножения Л а бора тор — нь/е штаммы Способы размножения Линия Ра-1 (гелобен) Tyi, AJocnSa (чяло&он) а л Ф Ф в <=€ в в о оо Асцитная перебитая опухоль ( мышь, МоспЗа (челаЗен) f - J в Рае молвимой железы, u h a v - циро6анный Х-облуие ниен ( Проса со Ч) 8 Туз, Моспбо ( челоЗек) & А # < 5 Линия HeLa S3 (челобен) +-<#> ЯУ Т уч , Санхт- Петербург (челоЗек) — Ш» Оо Св во - продольное деление цис топ од об н ы х клеток над ве особи простая пере шнуровка, без заметной разницы между материнской и дочерней особями- почкование отделение от материнской клетки одной или нескольких особей гораздо меньшей величины, нередко они держались на тонких пуповинах- ш изо гони я : образование- х ядерных ц и топ од об н ы х клеток, окруженных общей мембраной Легко сказать родилась три хо монад на яте ори я возбудителя рака. Это было как осенен иене о жида н но е прозрение. Мне предстояло отстоять эту теорию, доказать ее право нас у щ ест во ван и е . И это было сделано в ведущих институтах Санкт- Петербурга Обычно при культивировании опухолевых клеток онкологи создают им условия, как для нормальных, и получают монослои ромбических или полигональных клеток, над которыми нередко плавают круглые клетки одиночные ив виде колоний. Эти среды обычно содержат только витамины, минеральные вещества и аминокислоты. Яна з ы в а ю это вегетарианской пищей Исходя из того, что опухолевые клетки это одноклеточные животные, то есть три хо монады, я поместила их в « жирную среду длят р их ом она д , содержащую печеночный экстракт, пе п тон, дрожжевой экстракт, минеральные вещества, стероидный гормон фолликулин, мальтозу и I другие факторы роста длят р их ом она д , хотя дм н . профессор МА Башмаков аза веду ю щ а яла борат ори ей микробиологии НИИ акушерства и гинекологии, в которой I проводились эти эксперименты, меня предупреждала Опухолевые клетки погибнут. Однако этот способ культивирования содействовал выявлению наследственных вариаций так называемых опухолевых клеток, которые нас а м ом деле оказались цис топ од об ной формой трихом онад . В процессе пасс и ров ан и я некоторые из клеток постепенно переходили вуз на в а ем ы е амебовидные и жгутиковые формы, присущие три хо монадам. Как видно из таблицы переход этот сопровождался изменением морфологии и размеров клеток в следующей последовательности- в начальной стадии происходило разуплотнение цис топодобных округлых и овальных безъядерных клеток, имевших размеры 3-6 микрон, при этом площадь плотных участков уменьшалась, а размеры клеток увеличивались за счет разуплотнения протоплазмы- затем в некоторых клетках появились зерна хроматина- в процессе дальнейшего культивирования с пересе вами, при которых добавлялась свежая питательная среда, формировались небольшие продолговатые ядра, часто смещенные от центра клетки- под воздействием трипсина, который не разрушил опухолевые клетки, но переварил на их рецепторах белковые антитела, заставившие в свое время перейти трихомо- над в клеточную форму, а также после радиационного облучения появились крупные амебовидные клетки размером до микрон. Даже при большом полиморфизме видно определенное сходство между исследуемыми клетками. Опухолевые клетки и трихомонады были ядерными, безъядерными, с зернами хроматина при наличии и отсутствии ядра, с ядром и ядрышком, с двумя ядрами и даже в виде четырех округлых клеток, окруженных общей мембраной и готовой к шизогонии, - распаду на четыре дочерние клетки- в процессе дальнейшего культивирования наблюдался переход отдельных клеток в жгутиковую форму, размеры клеток уменьшались до 15 -18 микрон за счет сгущения цитоплазмы и образования органоидов. Клетки зафиксированы на разных стадиях развития вегетативной формы, они также отличались большим разнообразием форм- при длительной задержке с пересевами клеток, в результате чего происходило накопление в среде токсических веществ обмена, вначале наблюдалось образование гигантских клеток, затем гибель амебовидных форм опухолевых клеток и трихомонад путем грануляции и разрушения их -------------------------------------- — Таблица ПО След о л л тельность морфологически изменений КУЛЬТУР ОПУХ О Л Еве КЛЕТОК И ПАРАХ И Т И ЧЕСКИ Х ЖГУТИК ОНО С Ц Е Опухолевые плетки iiАсцит НАЯ Солидно» МУЗ синие штаммы Опухоль HK1UJU крысы Не t o S i P a - i F П орознтн чес кн е мгут иконо сч ы от гелобека (Москба) от глла- 6** о Со дек Т Пстегбцрг) и сходные клетки помещенные пи пот екьнун> 9 ока у ( L j u e m a u A H Q Я C T Q A U M ) 0Щр ' Л м . » * Ро ф Р азу плот не ни е протоплоуны клеток б процессе культибироЗони» % ® о <£> в О О = ю а По я б лени е зерен хроматина культи З и р & * н <пж клетка* © 0 О бра за Зон и е прод о и о З ото и г ядер смещенных от центра ° % ъ & 2 я * » £ Х Э # 1 < 3 ? Ф ■5С> О о ^ Э < 2 * П ере ход клеток Оме о о вид н ц юс та д и юза Пр е ? од m е&о&иА ныл клеток жгутик об уме ш с ц ч = Г )ере*ар 6 цис то и р ну юс то д и ю при неблагоприятных услобихх oib- дин? О э услоболт W ± на мелкие круглые частицы типа зерен при одновременном сохранении округлых цистоподобных форм, но по размерам меньших тех клеток, с которыми начинали экспери мент. Таким образом, уже первые эксперименты, проведенные на клеточном уровне, показали идентичность опухолевых клеток и трихомонад. Здесь было показано не только их морфологическое сходство, но и одинаковость размножения и гибели. В се это является прямым доказательством того, что трихомонады и опухолевые клетки имеют одну природу Другими словами, так называемые опухолевые клетки - это не узнанные онкологами трихомонады , перешедшие в цистоподобную форму под влиянием иммунитета человека, сопутствующей микрофлоры и других факторов. И с следования наг е нет и чес кому ровне Бесполое размножение простейших предполагает не только клеточный полиморфизм, но и полигеномность. Видообразование бесполых организмов в основном основывается на генетической адаптации к меняющимся условиям. Методы молекулярной гибридизации близких видов ж гутиконосцев показали большие различия в последовательностях оснований ДНК. Что касается опухолевых клеток, известно, что они имеют разные наборы хромосом даже водной опухоли. А это навело меня на мысль и о полиморфизме геном ов, состоящих из различньрс наборов хромосом. У нормальных клеток человека, обязательно имеющих по пары хромосом, есть общий, то есть характеризованный геном, по которому можно определить и вид клеток и отличить его от характеризованных геном ов клеток других представителей животного мира. Казалось бы , и у трансформированных клеток должна быть такая же картина, поскольку они считаются человеческими клетками но исследования показали обр атн ое. Для начала вспомним, что такое ген, ДНК, хромосома и геном. Вся наследственная информация о человеке записана в генах. Ген - это единица структурной и функциональной наследственности, представляющая собой отрезок молекулы дезоксирибонуклеиновой кислоты (ДНК. Ген - часть хромосомы, каждый ген занимает строго определенное место в соответствующей хромосоме. Ген сложен (он содержит 1000-1500 нуклеотидов, что соответствует 0,0003-0,0005 мм, но как единица наследственной информации остается функционально неделимым. Хромосомы, материальным субстратом которых является хроматин, - это главные структурно-функциональные элементы клеточного ядра, содержащие в линейном порядке гены и обеспечивающие хранение, воспроизводство генетической информации, а также начальные этапы ее реализации в признаки. В клетках тканей многоклеточных организмов хромосомы парны, так как происходят от двух родительских. Этим они отличаются от половых клеток, содержащих по одинарному набору хромосом. В интерфа зе, то есть в период между делением, клетки хромосомы максимально деконденсированы, индивидуально неразличимы и занимают весь объем ядра, образуя хроматин. Спаренность хромосом позволяет при делении клеток митозом передавать вместе с одним из двух наборов хромосом всю наследственную информацию от родительской клетки дочерней, то есть воспроизводить себе подобную . Атак как этот набор хромосом , то есть геном, в нормальных клетках постоянен, следовательно, нормальные клетки имеют характерный для них геном - характеризованный геном. П о-другому обстоит дело у опухолевых клеток и трихомонад, которые делятся обычно не митозом для них характерны разнообразные способы размножения проми тоз (упрощенный митоз, почкование, ш изогония, когда из одной клетки образуется несколько дочерних. Естественно когда от материнской клетки отшнуриваются несколько разновеличинных клеток, то сними уходит и разное количество хроматина, из которого впоследствии может сформироваться и различное количество хромосом. И эти наборы хромосом, то есть геномы, будут отличаться друг от друга. Отсюда можно сделать теоретический вывод опухолевые клетки и трихомонады не имеют характеризованного генома, что является косвенным подтверждением их сходства между собой и отличия от нормальных клеток. Для того чтобы это теоретическое утверждение подтвердить экспериментально, в НИИ эпидемиологии и микробиологии им. Пастера были проведены исследования Для получения характеризованных геномов опухолевых клеток и трихомонад был использован метод полимеразной цепной реакции. Анализ фотоснимков амплифицирован- ных последовательностей в геномах исследуемых клеток показал мажорный полиморфизм, как внутриштаммоиый, таки межштаммовый. Другими словами, между собой отличались не только трихомонады и опухолевые клетки отобранные от разных людей и животных, но и пробы, взятые из одних и тех же пробирок с клеточными культурами Наряду с этим отмечено сходство отдельных участков ге номов карциномы шейки матки HeLa и вагинальной три хомонады от одной из женщина также участков генома опухоли молочной железы крысы и вагинальной трихомо нады от другой женщины. И только водном случае из трех проб вагинальных трихомонад от одной из женщин в двух пробах была получена идентичная последовательность генов. Отсюда вывод в отличие от нормальных клеток три хомонады и опухолевые клетки не имеют характеризованного генома - в этом проявляется их сходство между собой и отличие от нормальных клеток. Более того, этот эксперимент показал, что генетические методы для опухолевых клеток неприемлемы. Атак как онкология в настоящее время в основном опирается на них, это и послужило одной из причин, почему она не узнала в опухолевых клетках трихомонады, ноне смогла объяснить и полигеномность и полихромосомность опухолевых клеток. Исследования на молекулярном уровне Для идентификации опухолевых клеток и трихомонад определенный интерес представляет также сравнение нуклеотидного состава клеток - типов ДНК. Известно, что свободноживущие жгутиконосцы, например, одножгути ковая эвглена зеленая (Фитофлагеллата), как более древние организмы, имеют ДНК в основном ГЦ-типа, а ДНК нормальных клеток человека - АТ-типа. Если опухолевые клетки трансформировались из нормальных, то их ДНК должен иметь АТ-тип, а жгутиконосец трихомонада — ГЦ тип. В эксперименте исследовались опухолевые клетки овариальной тератокарциномы человека Ра-1, рака молочной железы крысы и вагинальная трихомонада женщины. Определение нуклеотидного состава исследуемых клеток проводилось на спектрофлуоримезре «Hitachi-850». Сравнительный анализ результатов эксперимента показал что содержание ДНК ГЦ-типа у трихомонад колеблется в пределах 38-64%, а в опухолевых клетках - в пределах 28- 52%. Коэффициент сходства опухолевых клеток и трихо монад по содержанию ДНК ГЦ-типа составил 74%. А в пробах клеточных культур, содержащих равную концентрацию и достаточное количество клеток, не образующих колоний, то есть обладающих лучшей проницаемостью для реактивов, процентное содержание ДНК ГЦ- типа было практически одинаковым у трихомонад - 38% и 43% и у опухолевых клеток - 38% . Отсюда вывод хотя сравнение типов ДНК является косвенным доказательством, но оно достаточно убедительно показывает опухолевая клетка роднее трихомонаде, чем нормальной клетке. Асам факт большего содержания ДНК АТ-типа, чем ДНК ГЦ-типа, у паразитов объясняется ассимилированием человеческих аминокислот и условиями жизни, одинаковыми с нормальными клетками. Цитологическому сравнительному анализу были подвергнуты фиксированные и окрашенные препараты опухолевых клеток рака молочной железы крысы, асцитной опухоли мыши и вагинальной трихомонады человека. Анализ показал, что в ядрах опухолевых клеток и цис топодобных трихомонад хромосомы в полном их значении как в ядрах нормальных клеток, отсутствуют. Чаще обнаруживался хроматин в цитоплазме ядерных и протоплазме безъядерных клеток в виде глыбок и мелких зерен, видных при увеличении микроскопа в 1000 раз. Этот эксперимент стал еще одним косвенным доказательством идентичности опухолевых клеток и трихомонад. 108 Итак, проведенные эксперименты на опухолевых клетках и трихомонадах человека и животных прямо и косвенно доказали достоверность трихомонадной природы рака, возбудителем которого является паразитический жгутиконосец трихомонада (Флаге ллата). РО КО В А Я ТРИАДА bРbак, инфаркт, СПИД — роковые болезни X X столетия. Вернее, таковыми стали к концу нашего века а до этого государства потрясали эпидемии чумы, холеры , тифа и черной оспы. Неспособность им противостоять воспринималась людьми как наказание за грехи. Самоотверженность ученых, создававших и проверявших на себе лекарства и вакцины, и верность своему долгу врачей и медицинских сестер обеспечили победу над эпидемиями. Заболевание неизлечимым раком в то время составляло всего 3% от числа заболевших. От сердечно-сосудисты х заболеваний страдало несколько больше. А о возможности заболеть СПИДом даже не предполагали. И медики решили с болезнями покончено! Н е последнюю роль в победах медиков над эпидемиями сыграл тот факт, что медицина в то время была частью биологии. Зная историю происхождения многоклеточных биологи понимали, что не только человек живет в окружающем его мире, ни и богатый микромир способен обитать в нем . А опыт борьбы с эпидемиями убедил если появилась болезнь, необходимо выявить ее возбудителя и помочь больному избавиться от него. Но вскоре после революции наша медицина выделилась из биологии и зажила самостоятельной жизнью. Тенденция к сепаратизму этим не ограничилась. Произошло дробление ив самой медицине. Сама, разделившись, она расчленила и организм человека на составляющие и перестала воспринимать заболевания отдельных органов как местные проявления болезни всего организма. Поэтому медики и насчитали до 30 000 болезней, но только 5000 из них способны излечить. Среди неизлечимых заболеваний рак, инфаркт, СПИД и многие другие стали новой чумой нашего столетия. |