микробиология колок. Санитарная микробиология. Определение, задачи. Объекты санитарномикробиологического исследования. Связь санитарной микробиологии с инфекционной микробиологией, гигиеной, эпидемиологией
 Скачать 161.27 Kb.
|
Санитарная микробиология – наука, изучающая микрофлору окружающей среды и вызываемые ею процессы, которые могут оказать влияние на здоровье человека. Санитарная микробиология – отдельное направление медицинской микробиологии, изучает те же объекты, но подходы к их исследованию – другие.
Задачи СМ:
Отличия СМ от клинической (диагностической) микробиологии:
Цель санитарно-микробиологического исследования:
Этапы санитарно-микробиологического исследования:
Нормативно-методические документы: санитарные правила и нормы - СанПиН, Государственный отраслевой стандарт — ГОСТ, Методические указания — МУ, Методические указания по методам контроля — МУК, инструкции.
Принципы санитарно-микробиологических исследований
Поэтому при проведении санитарно-микробиологических исследований следует помнить о следующих основных принципах. 1. Правильный забор проб.
2. Серийность проводимых анализов.
3. Повторность отбора проб.
4.Применение только стандартных и унифицированных методов исследования.
5. Использование комплекса тестов.
6. Проведение оценки объектов по совокупности полученных результатов.
Методы санитарной микробиологии:
Этапы и варианты бактериологического метода: Этапы бактериологического метода: 1.Забор образца для исследования 2.Подготовка образца (гомогенизация, десорбция) 3.Приготовление разведений исследуемого образца 4.Выращивание микроорганизмов на питательных средах после посева приготовленных разведений 5.Идентификация выделенных микроорганизмов и их количественный учет 6.Заключение
Глубинный метод посева в плотные среды. Жидкий продукт или разведение навески вносят параллельно в две чашки Петри и заливают не позднее чем через 15 мин расплавленной и охлажденной до температуры 45±0,5ºС питательной средой. Высота слоя питательной среды должна быть 4—5 мм. Среду немедленно равномерно перемешивают с посевным материалом круговыми движениями чашки так, чтобы среда не вытекла из чашки и не загрязнила крышку. После застывания среды чашки с посевами вверх дном помещают в термостат. Поверхностный метод посева на плотные среды. Среду наливают в чашку Петри и после застывания подсушивают. Для удаления влаги с поверхности среды чашки открывают, переворачивают вверх дном и выдерживают в течение 30 мин при 48-50ºС. На подсушенную среду наносят жидкий продукт или разведение навески и равномерно растирают по поверхности шпателем — изогнутой стеклянной палочкой. Засеянную поверхность подсушивают, выдерживая чашки в горизонтальном положении в течение 15 мин. Метод посева в жидкие среды. В колбу или пробирки с питательной средой вносят навеску продукта или разведения навески. При определении количества микроорганизмов питательные среды засевают продуктом и(или) разведениями навесок так, чтобы последовательно выдерживалась заданная кратность количества посевного материала. Метод мембранных фильтров. Мембранные фильтры применяют для анализа легко фильтруемых жидких продуктов или продуктов, дающих растворы с высоким осмотическим давлением. При фильтрации раствора с высоким осмотическим давлением раствор предварительно разводят дистиллированной или пептонной водой в соотношении, позволяющем легко профильтровать разведенные растворы. Жидкий продукт, содержащий небольшое число взвешенных частиц, фильтруют в два этапа. Для освобождения от частиц его фильтруют через фильтр со средним диаметром пор 4 мкм, а затем — через фильтр, диаметр и размеры пор которого выбраны в соответствии с группой или видом выявляемых микроорганизмов. Оба фильтра культивируют в аналогичных условиях. После осаждения микроорганизмов на фильтре из растворов с высоким осмотическим давлением или из растворов, содержащих антимикробные вещества, его промывают дистиллированной водой или пептонно-солевым раствором. Фильтрацию заканчивают в момент исчезновения влаги на поверхности фильтра. Немедленно после окончания фильтрации фильтр переносят на плотные или в жидкие питательные среды. На плотную среду фильтр накладывают нижней стороной так, чтобы она полностью соприкасалась с поверхностью среды. Посевы термостатируют в условиях, благоприятных для роста определяемых микроорганизмов.
Практическая санитарная микробиология использует 2 основных метода оценки санитарно-эпидемического состояния внешней среды. 1. Методы прямого обнаружения возбудителя
Посев на питательные среды. Трудность выделения патогенных микроорганизмов обусловливают следующиефакторы:
2. Методы косвенной индикации возможного присутствия возбудителя во внешней среде Используют 2 критерия, по которым можно косвенно судить о возможном присутствии возбудителя во внешней среде:
1. ОМЧ определяют путём подсчёта всех микроорганизмов в 1 г или 1 мл субстрата; используя этот критерий, обычно исходят из предположения, что чем больше объект загрязнён органическими веществами, тем выше ОМЧ и тем вероятнее присутствие патогенов. Однако это не всегда так, т.к. ОМЧ может быть большим за счёт сапрофитов, а патогены могут отсутствовать, либо преобладание сапрофитов значительно укорачивает сроки выживания патогенов во внешней среде. Поэтому более адекватно расценивать ОМЧ как показатель интенсивности загрязнения внешней среды органическими веществами. 2. Санитарно-показательными называют микроорганизмы, по которым можно косвенно судить о возможном присутствии патогенов во внешней среде. То есть при их определении исходят из предположения, что чем больше объект загрязнён выделениями человека и животных, тем больше будет санитарно-показательных микроорганизмов и тем вероятнее присутствие патогенов.
Используют 2 критерия, по которым можно косвенно судить о возможном присутствии возбудителя во внешней среде:
1. ОМЧ определяют путём подсчёта всех микроорганизмов в 1 г или 1 мл субстрата; используя этот критерий, обычно исходят из предположения, что чем больше объект загрязнён органическими веществами, тем выше ОМЧ и тем вероятнее присутствие патогенов. Однако это не всегда так, т.к. ОМЧ может быть большим за счёт сапрофитов, а патогены могут отсутствовать, либо преобладание сапрофитов значительно укорачивает сроки выживания патогенов во внешней среде. Поэтому более адекватно расценивать ОМЧ как показатель интенсивности загрязнения внешней среды органическими веществами. 2. Санитарно-показательными называют микроорганизмы, по которым можно косвенно судить о возможном присутствии патогенов во внешней среде. То есть при их определении исходят из предположения, что чем больше объект загрязнён выделениями человека и животных, тем больше будет санитарно-показательных микроорганизмов и тем вероятнее присутствие патогенов. Как дополнительный показатель в настоящее время также используют индекс наиболее вероятного числа (НВЧ), имеющий доверительные границы, в пределах которых может колебаться истинное количество искомого микроба с 95% вероятностью. Для определения НВЧ исследования проводят 3, 5 и 10 раз; показатель определяют по специальным таблицам Хоскенса-Муре. Определение МАФАнМ (в масле): По 1 мл разведений масла (1:100 и 1:1000) в стерильные пустые чашки Петри, расплавленный и остуженный до 45° МПА (15-20 мл). После инкубации посевов разведений масла на чашках Петри при температуре 30° в течение 72 часов считаются колонии только в посевах тех разведений, где выросло от 15 до 300 колоний. Количество микроорганизмов в 1 мл рассчитывается по формуле: К=АВ/С, где К – КОЕ (количество микробов в 1 мл), А – количество колоний на чашке, В – объем масла, в котором хотим определить количество микроорганизмов (1 мл), С – объем посева.
Метод основан на выявлении в биоматериале из внешней среды или препарата чистой культуры последовательности нуклеиновых кислот. Молекулярная гибридизация: Процесс, в котором одноцепочечная ПК исследуемого организма (мишень) при взаимодействии с комплементарным фрагментом ПК, включающей метку (зонд) образует двухцепочечный комплекс. Назначение метода – выявление степени сходства различных ДНК. Применяется для идентификации микроорганизмов, особенно тех, которые трудно и медленно растут (микоплазмы, хламидии, вирусы). Материалы для исследования – объекты окружающей среды (вода, почва). Методы гибридизации – в растворе, на фильтре, на стекле. Зонд – это двухцепочечные ил одноцепочечные фрагменты ДНК меченые затонной, флюорисцентной или ферментной меткой. Полимеразная цепная реакция (ПЦР): Это способ быстрого получения множественных копий специфической последовательности ДНК бактерий, грибов, вирусов до количества, достаточного для идентификации другими методами. Назначение – индикация микроорганизмов в объектах внешней среды, пищевых продуктов, материале от больных; идентификация микроорганизмов; генетическое типирование; выявление генов вирулентности. Основные компоненты – исследуемая проба ДНК; смесь ДНТФ (дезоксинуклеотидтрифосфат); достраивание с помощью ДНК-полимеразы; праймеры – синтетические фрагменты ДНК; специфический буфер; минеральное масло; мембрана.
Микроорганизмы широко распространены в окружающей среде. Большинство из них – сапрофиты, но имеются и патогенные. Пути неблагоприятного воздействия микроорганизмов окружающей среды на человека:
Патогенные микроорганизмы составляют очень небольшую часть мира микробов (1:30 тыс.). Основной их резервуар и источник – человек и теплокровные животные. Все патогенные микроорганизмы окружающей среды можно разделить на три группы:
Сохранение патогенных МО в окружающей среде. Условия выживания МО определяются рядом факторов (температура, рН, наличие органических, химических веществ, лучистой энергии, дезинфектантов, степенью микробного загрязнения, наличие бактериофагов и др.). Для патогенных МО естественная среда обитания – живой организм, в котором они размножаются, накапливаются и из которого выделяются. Внешняя среда служит местом временного сохранения патогенных микроорганизмов, в которой под влиянием различных факторов они в различные сроки погибают. В процессе эволюции некоторые МО приспособились обитать во внешней среде и длительно в ней выживают, формируя споры. В некоторых условиях патогенные МО могут размножаться во внешней среде. По длительности выживания во внешней среде патогенные МО можно разделить на 3 группы:
Деление МО на эти группы условно, сроки выживания зависят от условий и сильно колеблются. |