микробиология колок. Санитарная микробиология. Определение, задачи. Объекты санитарномикробиологического исследования. Связь санитарной микробиологии с инфекционной микробиологией, гигиеной, эпидемиологией
 Скачать 161.27 Kb.
|
|
Санитарная микробиология мяса. Экзогенный и эндогенный пути обсеменения мяса животных микроорганизмами. Мясо и мясные продукты как фактор передачи инфекционных заболеваний. Контаминация продуктов животного происхождения может быть эндогенной (ОПМ – если животное больно или носитель – сальмонеллез, туберкулез, стафилококковые инфекции…), УПМ – транслокация МО из кишечника при транспортировке на мясокомбинат голодных животных (в холоде, при длительном ожидании). Чаще экзогенное – при убое, при разделке туш, из оборудования мясокомбината, одежды и рук рабочих, при транспортировке. Вторичное загрязнение мясных, рыбных и молочных продуктов, полуфабрикатов патогенными микроорганизмами может происходить:
После хранения в замороженном состоянии при размораживании происходит разрыв клеток – увлажнение – быстрое размножение гнилостной флоры – аэробной и анаэробной: протей, E. coli, B. subtilis, Clostridium Плановый контроль проводит ветеринарная санитарная служба Исследования для выявления: бацилл сибирской язвы, сальмонелл, эшерихий, протеев, кокков, листерий, пастерелл, клостридий и их токсинов.
22.6. Санитарно-микробиологический анализ мясных изделий 22.6.1. Определение общего количества микробов в 1 г продукта Метод не распространяется на сырокопченые колбасы. Сущность метода заключается в способности мезофильных аэробов и факультативных анаэробов расти на питательном агаре при температуре 37±0,5°С с образованием колоний, видимых при увеличении х5. Питательный агар (рецепты 87—89) расплавляют на водяной бане и охлаждают до температуры 45°С. Из каждой пробы делают не менее двух посевов, различных по объему, взятых с таким расчетом, чтобы на чашках выросло от 30 до 300 колоний. При этом на одну чашку Петри проводят посев 0,1 г, а на другую — 0,01 г продукта. Для посева 0,1 г продукта готовят первое десятикратное разведение испытуемой взвеси: стерильной пипеткой с широким концом отбирают 5 см3 испытуемой взвеси, переносят ее в пробирку с 5 см3 стерильного изотонического раствора натрия хлорида или пептонной воды; 1 см3 полученного раствора содержит 0,1 г испытуемого продукта. Другой стерильной пипеткой тщательно перемешивают содержимое пробирки продуванием, отбирают 1 см3 и переносят в стерильную чашку Петри, слегка приоткрывая крышку. Для посева 0,01 г продукта готовят следующее разведение: стерильной пипеткой тщательно перемешивают содержимое пробирки, отбирают 1 см3 и переносят в пробирку с 9 см3 стерильного изотонического раствора натрия хлорида. 1 см3 испытуемого раствора вторичного разведения содержит 0,01 г испытуемого продукта. 1 см3 этого раствора переносят в стерильную чашку Петри, как описано выше. Анализируемую взвесь, внесенную в чашки Петри, заливают 12—15 см3 расплавленного и охлажденного питательного агара при фламбировании краев пробирки или бутылки. Быстро смешивают с мясопептонным питательным агаром, осторожно наклоняя или вращая чашку по поверхности стола. Необходимо избегать образования пузырьков воздуха, попадания среды на края и крышку чашки. Для того чтобы помешать развитию на поверхности агара спорообразующих микробов и бактерий группы протея в Н-форме, допускается наслоение расплавленного и охлажденного до температуры 45—50°С голодного агара (рецепт 94) толщиной 3—4 мм. После застывания агара чашки Петри переворачивают и помещают в термостат с температурой 37ºС на 48 ч. Через 48 ч подсчитывают общее количество колоний бактерий, выросших на чашках. Колонии, выросшие как на поверхности, так и в глубине агара, подсчитывают при помощи лупы с пятикратным увеличением или специальным прибором с лупой. Для определения общего количества микробов в 1 г продукта подсчитанное количество колоний умножают на степень разведения анализируемого продукта. За окончательный результат количества бактерий в 1 г анализируемого продукта принимают среднее арифметическое результатов подсчета колоний в двух чашках с разной массой продукта. 22.6.2. Определение бактерий группы кишечной палочки в 1 г продукта Сущность метода заключается в способности бактерий группы кишечной палочки (БГКП) расщеплять глюкозу и лактозу. При этом в средах "ХБ" (рецепт 158), Хейфеца (рецепт 157) и КОДА (рецепт 159) образуются кислые продукты, меняющие цвет индикаторов, а в среде Кесслера (рецепт 119) в поплавке образуется газ вследствие расщепления глюкозы. Цель определения этой группы бактерий — проверка соблюдения режима варки колбас или санитарно-гигиенических условий в процессе производства сырокопченых колбасных изделий. При микробиологическом контроле колбасных изделий в производственных лабораториях можно ограничиваться обнаружением БГКП без их биохимической дифференциации. В пробирки, содержащие по 5 см3 среды "ХБ", среды Хейфеца двойной концентрации или среды КОДА, вносят по 5 см3 испытуемой взвеси стерильной пипеткой с широким концом. Допускается применение среды Кесслера (рецепт 119) по 10 см3. Пробирки со средами "ХБ", Кесслера, Хейфеца и КОДА помещают в термостат с температурой 37°С на 18—20 ч. Посевы смывов, отобранных тампонами с поверхности изделий без оболочки, выдерживают при температуре 43°С (для обнаружения повторного бактериального загрязнения). При росте БГКП среды "ХБ" и КОДА окрашиваются в желтый цвет, среда Хейфеца приобретает также желтый цвет, который может меняться до салатно-зеленого, на среде Кесслера в поплавке образуется газ. Для окончательного заключения о присутствии в продукте БГКП проводят высев со среды Кесслера (забродившие пробирки) или Хейфеца (изменение цвета среды) в чашки Петри со средой Эндо, или Плоскирева (рецепт ПО), или Левина (рецепт 111). Чашки Петри помещают в термостат с температурой 37°С. Через 18—20 ч посевы просматривают. На среде Эндо БГКП образуют темно-красные колонии с металлическим блеском или розово-красные без блеска, на среде Плоскирева — кирпично-красные с глянцевой поверхностью, на среде Левина — темно-фиолетовые или фиолетово-черные блестящие колонии. Из подозреваемых колоний готовят мазки, которые окрашивают по Граму. Специфическое изменение сред "ХБ" и КОДА не требует дальнейшего подтверждения. При заведомо высокой обсеменности анализируемый продукт массой не более 0,25 г помещают в пустую пробирку, в которую закладывают комочек стерильной фильтровальной бумаги размером 5x5 см, и стерильной стеклянной палочкой или фламбированной проволокой проталкивают материал до дна (не уплотняя), в пробирку наливают среду "ХБ", КОДА или Хейфеца (нормальной концентрации), заполняя ее на 3/4 высоты пробирки. Пробирки помещают в термостат с температурой 37°С на 8—10 ч. При росте БГКП на среде "ХБ" и КОДА среда изменяет свой цвет с фиолетово-пурпурного или зеленого на желтый. При росте БГКП на среде Хейфеца среда изменяет свой цвет с красно-фиолетового на желтый, который затем может меняться до салатно-зеленого. Пробы, отобранные с поверхности изделий без оболочки тампонами, анализируют аналогично. Обнаружение грамотрицательных палочек, специфически изменяющих цвет жидких дифференциально-диагностических сред и образующих характерные колонии на элективных средах с лактозой, указывает на наличие БГКП. 22.6.3. Определение протея Сущность метода заключается в определении бактерий типичной морфологии и характера роста на питательных средах, способности гидролизовать мочевину и образовывать сероводород. Для подтверждения наличия протея в Н-форме 0,5 см3 анализируемой взвеси вносят в конденсационную воду свежеско-шенного мясопептонного агара (рецепт 92), разлитого в широкие пробирки, не касаясь поверхности среды (метод Шукевича). Вертикально поставленные пробирки помещают в термостат с температурой 37°С. Через 18—24 ч посевы просматривают. Обращают внимание на образование ползучего вуалеобразного налета с голубым оттенком; на скошенном мясопеп-тонном агаре культура поднимается из конденсационной жидкости вверх по поверхности среды. При появлении характерного роста микробов рода протея микроскопируют окрашенные по Граму мазки и изучают подвижность микробов в раздавленной или висячей капле. Для обнаружения нероящихся О-форм можно проводить посев на поверхность агара Плоскирева. О-форма протея растет на этой среде в виде прозрачных колоний, слегка подщелачивающих среду, окрашивая ее в желтый цвет. При пересеве в среду Крумвиде—Олькеницкого в модификации Ковальчука (рецепт 117) появляются ярко-красное окрашивание среды (вследствие расщепления мочевины) и черный осадок с возможным разрывом агарового столбика (вследствие образования сероводорода). Обнаружение полиморфных грамотрицательных палочек, образующих характерный рост на средах в Н-форме (подвижные) и О-форме (неподвижные), ферментирующих глюкозу и мочевину, не ферментирующих лактозу и маннит, указывает на наличие бактерий из рода протея. 22.6.4. Определение коагулазоположительных стафилококков Сущность метода заключается в определении морфологии, характера роста на питательных средах и в способности отдельных стафилококков ферментировать лецитиназу и коагулировать цитратную плазму крови кролика под воздействием фермента коагулазы. Из разведения анализируемой взвеси продукта (1:10) в изотоническом растворе натрия хлорида или пептонной воде проводят посевы на молочно-солевой агар, содержащий 6,5% хлористого натрия (рецепт 80), для выявления пигмента или на желточно-солевой агар, содержащий 6,5% хлористого натрия (рецепт 81), для выявления лецитиназной активности. Взвесь наносят на поверхность агаровой среды в количестве 0,2 см3 и равномерно растирают по всей поверхности. Посевы термостатируют в течение 24 ч при температуре 37°С и 24 ч выдерживают при комнатной температуре. На поверхности питательной среды колонии стафилококка имеют вид плоских или слегка выпуклых блестящих колоний с ровным краем. При этом на молочно-солевом агаре лучше выявляется пигмент (эмалево-белый или золотистый), а на желточно-солевом агаре колонии стафилококков могут образовывать "радужный венчик", что является одним из признаков их патогенности. Из подозрительных колоний готовят препараты, которые окрашивают по Граму и ставят реакцию плазмокоагуляции (см. гл. 9). При наличии стафилококков в препарате обнаруживаются грамположительные мелкие кокки, располагающиеся неправильными гроздьями. Реакция плазмокоагуляции дает положительный результат. При расчете на 1 г продукта количество подсчитанных колоний умножают на степень разведения и на количество посевного материала.
Как правило кулинарные изделия полностью готовы к употреблению в пищу, но некоторые требуют дополнительной термической обработки. Кулинарные изделия:
Кулинарная продукция, подвергшаяся термообработке исследуется 2 раза в месяц, все остальные, кроме замороженной – 3 раза в месяц, замороженная – по эпидпоказаниям. Определение: МАФАнМ, БГКП, S. Aureus, сальмонеллы, Proteus, для вакуумной продукции – сульфитредуцирующие клостридии.
1 фаза – бактерицидная (около 1 часа после надоя). Можно продлить до 24-48 часов при охлаждении молока. 2 фаза – фаза смешанной микрофлоры – обильно размножаются все попавшие микроорганизмы (до 12 часов) 3 фаза – фаза молочно-кислых стрептококков (12-48 часов) и молочно-кислых палочек (через 48 часов), 4 фаза – дрожжево-плесневая, 5 фаза – фаза гнилостной флоры. Контаминация продуктов животного происхождения может быть эндогенной (ОПМ – если животное больно или носитель – сальмонеллез, туберкулез, стафилококковые инфекции…), УПМ – транслокация МО из кишечника при транспортировке на мясокомбинат голодных животных (в холоде, при длительном ожидании). Чаще экзогенное – при убое, при разделке туш, из оборудования мясокомбината, одежды и рук рабочих, при транспортировке. Вторичное загрязнение мясных, рыбных и молочных продуктов, полуфабрикатов патогенными микроорганизмами может происходить:
Отбор молока.
Микробиологический анализ проводится не более чем через 4 часа с момента отбора проб. Пробы должны храниться и транспортироваться в условиях, обеспечивающих температуру не выше 6°, не допуская подмораживания. Основные показатели. МАФАнМ, БГКП, патогенные микроорганизмы, в т.ч. сальмонеллы.
В производстве кисломолочных продуктов (простокваши, масла, творога) чаще всего используется молочнокислый стрептококк и сливочный стрептококк. Молочнокислый стрептококк – грамположительные кокки. Располагающиеся попарно, он сбраживает лактозу, глюкозу, галактозу с образованием кислоты и газа. Клетки сливочного стрептококка располагаются в виде цепочек, они придают продукту сметанообразную консистенцию. Иногда в кисломолочные продукты добавляют ароматообразующие стрептококки: Str. Citrovorus, Str. Diacetilactis. Большинство молочнокислых стрептококков растет на МПА, образуя при поверхностном посеве очень мелкие круглые выпуклые колонии, а при глубинном посеве – колонии в виде чечевичных зерен. Помимо стрептококков. В приготовлении кисломолочных продуктов принимают участие и молочнокислые палочки. Некоторые кисломолочные продукты (простокваша, ацидофильное молоко) готовят на чистой культуре молочнокислых палочек (крупные бесспоровые грамположительные). Они, как правило, не растут на МПА. Кефир получают с помощью так называемого кефирного грибка. Основа грабка состоит из плотного войлокообразного сплетения нитей (палочка стромы), среди которых находятся скопления микроорганизмов, формирующих кефир: молочнокислых стрептококков, молочнокислых палочек и дрожжеподобных грибков. Определение ОМЧ не производится. Пробиотики – МО, участвующие в процессе переваривания пищи, в обеспечении иммунной защиты кишечника; способствуют выработке витамина В12 для регулировки жирового и углеводного обмена; витамина В9 для иммунной и кровеносной систем. К пробиотическим культурам в главной степени относят лакто- и бифидобактерии, составляющие до 90% микрофлоры кишечника. В некоторых случаях можно отнести к ним и дрожжи.
См общее.
Перед анализом необходимое количество продукта отбирают в стерильную колбу с ватной пробкой, помещают в водяную баню с температурой 30-35° и, встряхивая колбу, освобождают продукт от двуокиси углерода и нейтрализуют до рН 7,0+/- 0,3.
Рыба – скоропортящийся продукт (быстрее чем мясо). При задержке переработки быстро размножается микрофлора. Особенно опасно заражение рыбных продуктов C. botulinum (из кишечника рыб, с илом, землей). Чаше в копченой, вяленой рыбе. |