Соединения свинца

• Название: Соединения свинца
• Дата: 02.06.2022
• Размер: 2.4 Mb.
• Имя файла: Otvety_na_perechen_yadov_shpargalka.doc
• Тип: Исследование; #566047
• страница: 15 из 18

ВЭЖХ -анализ

Условия хроматографирования:

• 
  хроматограф жидкостный
  

• 
  хроматографическая колонка (6282 мм), заполненная обращено-фазным сорбентом Сепарон
  
• 
  подвижная фаза - элюент - смесь 0,05М водного раствора двузамещенного фосфата аммония и метанола (60:40)
  

• 
  скорость потока элюирования - 100 мкл/мин
  
• 
  детектирование - при длине волны 240 нм.
  

Подготовка пробы: кровь/моча + стандарт + вода + ацетатный буфер  перемешивание  центрифугирование  упаривание органики  анализ

Приготовление стандартных образцов.

Для приготовления эталонных растворов используется чистые субстанции барбитала, фенофарфитала, циклобарбитала, барбамила и этаминала натрия. Эти растворы служат для идентификации указанных веществ, определения их хроматографических параметров, а также для приготовления контрольных растворов при проведении количественных анализов.

Градуировка хроматографа проводится по фенобарбиталу, барбамилу и этаминалу натрия.

Качественный анализ.

Идентификация проводится следующим образом:

• 
  сопоставляют время удерживания и коэффициент емкости определяемого компонента и образца сравнения - фенобарбитала;
  
• 
  сравнивают УФ-спектры предполагаемого компонента и образца сравнения;
  
• 
  оценивают совпадение значений времени удерживания определяемого
  компонента и образца сравнения при добавлении контрольного раствора в
  раствор экстракта из биопробы (причем концентрация образца сравнения
  должна быть близка к концентрации определяемого компонента);
  
• 
  сопоставляют УФ-спектры определяемого компонента и образца сравнения при двух длинах волн, и оценивается их спектральное отношение.
  

Концентрация определяемого вещества (Ci) в растворе экстракта из биопробы определяется по формуле

где

C_k - концентрация "добавки" в растворе подвижной фазы;

V_k - объем добавленного контрольного раствора;

Vi- объем раствора экстракта с определяемым веществом;

hi - высота сигнала определяемого вещества в растворе экстракта из биопробы;

hi+k - высота сиrnала определяемого вещества после добавки в раствор экстракта

контрольного раствора.

Метод внешнего стандарта

В соответствии с методом внешнего стандарта и с учетом линейности зависимости выходного сигнала от массы вещества последовательно, с анализом раствора экстракта биопробы, проводят анализ контрольного раствора идентифицированного вещества. концентрация контрольного раствора (Ck) должна быть близка к концентрации определяемого вещества в растворе экстракта. Анализы контрольного раствора и экстракта биопробы должны проводитьсяв одном масштабе регистрации. Концентрация определяемого вещества в растворе экстракта (Ci) рассчитывается по формуле

Ci = Ck*hi/Hk, где Ck - концентрация контрольного раствора;

hi- высота сигнала определяемого наркотического вещества в

растворе экстракта биопробы; hk - высота пика вещества контрольного раствора.

Метод внутреннего стандарта

В соответствии с методом внутреннего стандарта в биообьект до операции пробоподготовки добавляется известное количество вещества, принятого за стандарт. В анализе барбитуратов в количестве внутренних стандартов рекомендуется использовать одно изследующих веществ: апробарбитал, метилфенобарбитал, фенилubдантоин и другне вещества, которые в данных условиях xpoмaтoграфического разделения должны

полностью отделяться от других компонентов образца, должны элюироваться близко к пику анализируемого соединения, не реагировать с другими компонентами, т.е. удовлетворять требованиям, предъявляемым к внутреннему стандарту. Можно использовать одновременно два и более внутренних стандарта. Концентрация определяемогo вещесгва (CI) рассчитывается по формуле

Ci = Cbc * Hi /Hbc *1/Fi/bc, где Свс - концентрация внутреннего стандарта;

hi - высота пика (или площадь) определяемого вещества; h_вс - высота пика (или площадь) стандарта; Fi/вc - относительный калибровочный фактор.

Относительный калибровочный фактор компонента Fi/вc вычисляется по формуле

Fi/bc = Hi * Cbc/Ci * Hbc, где hl- высота пика (или площадь) компонента известной концентрации (калибровочный раствор); CI - концентрация калибровочного раствора определяемого компонента; h_вс - высота пика (или площадь) внутреннего стандарта;

Сbc - концентрация внутреннего стандарта

УФ-спектрофотометрия.

Спектрофотометрическое определение основано на способности фенобарбитала к лактим-лактамной (амидоимидольной) таутомерии. При pH=2,0 барбитурат находится в растворе в лактамной форме, не обладающей специфической абсорбцией в пределах 200-300 нм. При pH=10,0 образуется монолактимная форма, в гетероциклическом ядре возникает двойная связь, наблюдается поглощение при 240 нм. При pH=13 и выше в растворе присутствует дилактимная форма с двумя двойными связями в кольце. Абсорбция наблюдается при 255-260 нм.

Для определения рекомендованы методы прямого и дифференциального спектрофотометрирования.

Прямая СФМ: проводится при pH=10 и 240 нм.

Дифференциальные методы:

• 
  при pH=2,0-10,0 и 239 нм - если исследуются внутренние органы трупа;
  
• 
  при pH=10,0-13,0 и 260 нм - если исследуется кровь и моча. Дифференциальные методы дают более надежные результаты, т.к. исключают влияние посторонних веществ, экстрагируемых хлороформом из кислого раствора вместе с фенобарбиталом.
  

УФ-спектральные характеристики фенобарбитала: при pH = 9,2 наблюдается поглощение при 239 нм (ε_а = 452); при pH = 13,0 поглощение при 254 нм (ε_а = 342).

Для расчета содержания барбитурата пользуются калибровочным графиком или значениями показателя удельного поглощения.

В сочетании с хроматографией метод УФ-спектрофотометрии является достаточно специфичным, быстрым и чувствительным. Определяются микрограммовые количества фенобарбитала.

Фенобарбитал

Депрессант центральной нервной системы. Кристаллическое вещество с температурой плавления 245°. Вещество кислого характера, pK_a=7,3. Плохо растворимо в воде, хорошо растворимо в этаноле и в водных растворах щелочей. УФ-спектр имеет два максимума поглощения при щелочных значениях pH (при pH=9,2 λ_нм=239; при pH=13,0 λ_нм=254). ИК-спектр имеет следующие характеристические частоты: 1684, 1712, 1770, 1310.

Соединение быстро всасывается после орального введения, экскретируется в неизменном виде до 30%. Препарат пролонгированного действия (10-18 часов), период полувыведения 3 дня. Фенобарбитал используется как снотворное и противосудорожное средство. Фенобарбитал дает длительный сон, мало изменяется в организме и выводится в значительной степени почками в неизменном состоянии.

В относительно больших дозах фенобарбитал способен вызывать смертельное отравление. (0,6 – 1 г.). ВРД 0,2, ВСД 0,5.

В организме человека фенобарбитал подвергается, в основном, в печени ряду превращений:

1. 
   Окислению одного из радикалов
   
2. 
   Окислению до кислот и кетонов
   
3. 
   Десульфированию
   
4. 
   Демитилированию
   
5. 
   Гидролизу
   

Метод Валова

100 г измельченного биологического материала + 180 мл воды и 20 мл 10 %-го раствора гидроксида натрия 30 мин при частом перемешивании центрифугируют 30 мин надосадочная жидкость + 120 мл 10 %-го раствора вольфрамата натрия и 1 н. раствор серной кислоты (до рН=2) нагревают на кипящей водяной бане 20 мин центрифугирование центрифугат процеживают через ватный тампон собирают в делительную воронку + диэтиловый эфирэфирный слой + 50 мл 10%-го гидроксида натрия водный слой отделяют + 25 %-ным раствор серной кислоты до рН=2 + диэтиловый эфир эфирная вытяжка

Подтверждающие исследования

Цветные реакции:

• с аммиачным раствором нитрата или ацетата кобальта. При наличии барбитуратов появляется розово-фиолетовое окрашивание.

• мурексидная проба. Через некоторое время по краям сухого остатка появляется розовое и красное окрашивание, которое становится интенсивней при смачивании остатка 25% раствором гидрата окиси аммония.

Микрокристаллоскопические реакции:

• 
  перекристаллизация: на предметное стекло помещают сухой остаток. Через 24 часа наблюдают форму осадка – сферолиты, в виде «ежиков».
  
• 
  с железоиодидным комплексом. Раствор хлорида окисного железа + концентрированная соляная кислота + калия иодид. Через 10 минут наблюдают образование сростков кристаллов.
  

Бензонал



Кристаллическое вещество с температурой плавления 137°. Вещество кислого характера, pK_a=7,3. Бензонал трудно растворяется в воде и этиловом спирте, легче — в диэтиловом эфире, хлороформе и диметилформамиде. Экстрагируется органическими растворителями из кислых водных растворов.

Бензонал в основном применяется для лечения судорожных форм эпилепсии. Иногда он применяется для лечения больных, страдающих припадками, не сопровождающимися судорогами. ВРД 0,3, ВСД 0,6.

Метаболитами бензонала являются бензойная кислота и фенобарбитал, который, в свою очередь, подвергается метаболизму. Бензонал и его метаболиты в основном выделяются с мочой.

Выделение бензонала из биологического материала.

100 г измельченного биологического материала + 10 мл р-ра соляной кислоты + 50 г сульфата аммония перемешивают + 200 мл смеси равных объемов этилового спирта и хлороформа настаивают 2 ч при перемешиваниивытяжку сливают и фильтруют через плотный бумажный фильтр промывают смесью этилового спирта и хлороформа (1 : 1) водную фазу, насыщенную сульфатом аммония, отделяют и не исследуют. Слой органических ра­створителей выпаривают досуха + 200 мл горячей воды перемешивают и фильтруют + три порции хлороформахлороформные вытяжки + фосфатный раствор (рН = 7,4)  хлороформный слой фильтруют через бумажный фильтр хлороформную вытяжку используют для идентификации и коли­чественного определения бензонала. Поскольку бензонал частично разлагается в организме на фенобарбитал и бензойную кислоту, наличие последней опреде­ляют в водной фазе. С этой целью водную фазу подкисляют раствором соляной кислоты (1 : 1) до рН = 2 и взбал­тывают с 10 мл хлороформа. От водной фазы отделяют хлоро­формную вытяжку, которую исследуют на наличие бензойной кислоты.

Подтверждающие исследования

1. 
   Бензонал с изопропиламином и солями кобальта дает фио­летовую окраску
   
2. 
   С солями кобальта и щелочами бензонал дает сине-фиоле­товую окраску
   
3. 
   Бензонал можно обнаружить по форме кристаллов, кото­рые образуются после прибавления к нему метилового спирта и концентрированной соляной кислоты. Через несколько минут в поле зрения под микроскопом появляются ромбической формы кри­сталлы или сростки из них.
   
4. 
   Обнаружение методом хроматографии.
   

НФ: силикагель

ПФ: хлороформ:н-бутанол:25% раствор аммиака

Д: 0,02 %-м хлороформным раствором дифенилкарбазида, затем раствором сульфата ртути.

Пятна бензонала на пластинке имеют Rf =* 0,40...0,45. 10. При наличии барбамила пятна на хроматограмме приобретают сине-фиолетовую или красно-фиолетовую окраску.

Гексенал



Хорошо растворяется в воде, этиловом спирте и хлорофор­ме, слабо — в диэтиловом эфире. Гексенал экстрагируется орга­ническими растворителями из кислых водных растворов.

Гексенал проявляет сно­творное действие, а в больших дозах он имеет наркотические свойства. Его применяют для наркоза в сочетании с оксидом азота (I), фторотаиом и с некоторыми другими веществами. Гек­сенал и сам может применяться для кратковременного наркоза (продолжительностью 15—20 мин).

Гексенал относится к барбитуратам короткого периода действия. В организме он подвергается метаболизму не­сколькими путями:

• 
  Гидроксилирование циклогексильной группы  окисление с образованием 3'-кетогексабарбитала  N-деметилирование.
  
• 
  N-деметилирования при атоме азота в третьем положении норгексабарбитал.
  
• 
  Определенное количество гексена­ла, поступившего в организм, метаболизируется путем разрыва цикла барбитуровой кислоты.
  

Подтверждающие исследования

1. 
   От прибавления солей кобальта и изопропиламина к гексеналу появляется фиолетовая окраска.
   
2. 
   Гексенал с солями кобальта и щелочью дает розовую или красную окраску.
   
3. 
   От прибавления концентрированной серной кислоты к гексеналу образуется осадок, состоящий из сростков игольчатых кристаллов.
   
4. 
   Гексенал с подкисленным спиртовым раствором иодида ка­лия образует кристаллический осадок.
   

5. Обнаружение гексенала по УФ-спектрам. Гексенал в ходе
химико-токсикологического анализа выделяется из биологического материала в виде гексобарбитала, который можно обнару­жить по спектрам поглощения

В ИК-области спектра гексенал (диск с бромидом калия) имеет основные пики при 1712, 1660, 1390, 1358 см^-1,

Тиопентал-натрий



Легко растворим в воде, практически нерастворим в бензоле и эфире. Средство для внутривенного наркоза.

Анализ см. «Общая информация»

ПРОИЗВОДНЫЕ 1,4-БЕНЗОДИАЗЕПИНА

Общие свойства веществ.

Распределение производных 1,4-бенздиазепина по органам происходит в три стадии:

• 
  1-ая характеризуется падением концентрации в крови и накоплением в паренхиматозных органах;
  
• 
  на 2-ой стадии идет накопление соединений во всех органах. Предел накопления соединений в тканях определяется кажущимся объемом распределения (Vр);
  
• 
  3-я стадия, самая продолжительная по времени – характеризуется накоплением соединений в органах выделения (печени, почках), с одновременным уменьшением в остальных тканях органов.
  

Наибольшее содержание 1,4-бенздиазепинов в ЖКТ, тканях печени, почек.

Ультрафиолетовые спектры

В электронных спектрах производных 1,4-бенздиазепина имеется 3 полосы поглощения с λ_max в областях:

1. 
   200-215 нм
   
2. 
   220-240 нм
   
3. 
   290-330 нм
   

Две первые полосы соответствуют возбуждению ароматических хромофоров. Третью длинноволновую полосу относят к азометиновой связи, сопряженной с бензогруппой.

По характеру поглощения в УФ-области 1,4-бенздиазепины относятся к соединениям, абсорбция которых изменяется от величины значений рН:

• 
  в кислой среде – за счет протонирования атома азота 1 (у хлордиазепоксида) и 4 (1,2-дигидропроизводных 1,4-бенздиазепина – нитразепам, оксазепам, диазепам);
  
• 
  в щелочной среде в молекуле 1,2-дигидропроизводных 1,4-бенздиазепина наблюдается изменение хромофорной системы (увеличение сопряжения за счет лактим-лактамной таутомерии азометиновой связи в положения 1,2 - нитразепам, оксазепам).
  

Кислотный гидролиз хлордиазепоксида (I), протекающий в мягких условиях, приводит к образованию 4-окси-1,2-дигидро-3Н-1,4-бенздиазепин-2-онов (II). В более жестких условиях эти соединения гидролизуются до 2-аминобензофенонов (III), альфа-аминокислот (IV) и аминов (V).

Метаболизм

Окисление

1.1. N-деметилирование

1. 
   В молекуле диазепама у атома азота в 1 положении
   
2. 
   В метиламинной группе хлордиазепоксида
   

Пробоподготовка.

Изолирование из тканей и органов трупа.

Анализ производных 1.4-бензодиазепина по нативным соединениям.

Возможно использование любых общих методов пробоподготовки.

• 
  М-д изолирования нейтральным ацетоном
  

Биоматериал + н-ацетон  ацетоновое извлечение + 0,5н HCL + н-гексан  очищенная ацетоно-водная вытяжка ацетоно-водная фаза + NaOH + эфир  эфирное извлечение  ТСХ, элюирование  исследование не бензодиазепины.

• 
  М-д Васильевой
  

Биоматериал + вода, подкисленная органической кислотой  водная вытяжка  водная фаза + NH4OH + хлороформ  органическая фаза  выпаривание  исследование на бензодиазепины

• 
  М-д Стаса-Отто
  

Биоматериал + 96% этанол + органическая кислота  спиртовой экстракт  упаривание + 100% спирт  отделение осадка  очищенный экстракт  упаривание  остаток + горячая вода  фильтрование  водная фаза + NaOH + хлороформ  органическая фаза  исследование на бензодиазепины

ТСХ-скрининг

1. 
   Общая система
   

НФ: силуфол

ПФ: хлороформ:этилацетат

Д:

• 
  Р-в Драгендорфа
  
• 
  Р-р FeCl3 + HCl + HNO3
  

2. 
   Частная система
   

НФ: силуфол

ПФ: хлороформ:этилацетат:метанол

Д:

• 
  Р-в Драгендорфа
  
• 
  Р-р FeCl3 + HCl + HNO3
  

Обнаружение:

а) реактив Драгендорфа в разбавленной уксусной кислоте образует оранжевые и желто-оранжевые комплексные соли;

б) реактив FPN (хлорид железа (III) в смеси хлорной и азотной кислот) окисляет бензодиазепины с образованием окрашенных продуктов желтого цвета;

в) реактив Марки образует окрашенные продукты желтого цвета;

г) подкисленный йодплатинат образует темноокрашенные пятна.

Количественное определение