Справочный материал. Глава 24 – Кровь. Справочный материал по Физиологии. Глава 24 Кровь. Кровь относится к жидкостям внутренней среды организма
 Скачать 1.04 Mb.
|
|
4.3. Непрямая проба Кумбса В пробирку вносят одну каплю (0,02 мл) осадка трижды отмытых эритроцитов донора, для чего выдавливают из пипетки небольшую каплю эритроцитов и касаются ею дна пробирки, и добавляют 4 капли (0,2 мл) сыворотки реципиента. Содержимое пробирок перемешивают встряхиванием, после чего их помещают на 45 мин в термостат при температуре +37 °С. По истечении указанного времени эритроциты вновь трижды отмывают и готовят 5%-ную взвесь в физиологическом растворе. Далее 1 каплю (0,05 мл) взвеси эритроцитов на фарфоровую пластинку, добавляют 1 каплю (0,05 мл) антиглобулиновой сыворотки и перемешивают стеклянной палочкой. Пластинку периодически покачивают в течение 5 мин. Учет результатов проводят невооруженным глазом или через лупу. Агглютинация эритроцитов свидетельствует о том, что кровь реципиента и донора несовместимы, отсутствие агглютинации является показателем совместимости крови донора и реципиента. 4.4. Проба на совместимость с применением 10%-го желатина В пробирку вносят 1 небольшую каплю (0,02–0,03 мл) эритроцитов донора, для чего выдавливают из пипетки небольшую каплю эритроцитов и касаются ею дна пробирки, добавляют 2 капли (0,1 мл) желатина и 2 капли (0,1 мл) сыворотки реципиента. Содержимое пробирок перемешивают встряхиванием, после чего их помещают в водяную баню на 15 мин или термостат на 30 мин при температуре +46–48 °С. По истечении указанного времени в пробирки добавляют 5–8 мл физиологического раствора и перемешивают содержимое путем 1–2-кратного переворачивания пробирок. Результат учитывают, просматривая пробирки на свет невооруженным глазом или через лупу. Агглютинация эритроцитов свидетельствует о том, что кровь реципиента и донора несовместимы, отсутствие агглютинации является показателем совместимости крови донора и реципиента. 4.5. Проба на совместимость с применением 33%-го полиглюкина В пробирку вносят 2 капли (0,1 мл) сыворотки реципиента, 1 каплю (0,05 мл) эритроцитов донора и добавляют 1 каплю (0,1 мл) 33%-го полиглюкина. Пробирку наклоняют до горизонтального положения, слегка потряхивая, затем медленно вращают таким образом, чтобы содержимое ее растеклось по стенкам тонким слоем. Такое растекание содержимого пробирки по стенкам делает реакцию более выраженной. Контакт эритроцитов с сывороткой больного при вращении пробирки следует продолжать не менее 3 мин. Через 3–5 мин в пробирку добавляют 2–3 мл физиологического раствора и перемешивают содержимое путем 2–3-кратного перевертывания пробирки, не взбалтывая. Результат учитывают, просматривая пробирки на свет невооруженным глазом или через лупу. Агглютинация эритроцитов свидетельствует о том, что кровь реципиента и донора несовместимы, отсутствие агглютинации является показателем совместимости крови донора и реципиента. 6. Биологическая проба Перед переливанием контейнер с трансфузионной средой (эритроцитная масса или взвесь, плазма свежезамороженная, цельная кровь) извлекают из холодильника и выдерживают при комнатной температуре в течение 30 мин. Допустимо согревание трансфузионных сред в водяной бане при температуре 37 °С под контролем термометра. Биологическую пробу проводят независимо от объема гемотрансфузионной среды и скорости ее введения. При необходимости переливания нескольких доз компонентов крови биологическую пробу проводят перед началом переливания каждой новой дозы. Техника проведения биологической пробы заключается в следующем: однократно переливается 10 мл гемотрансфузионной среды со скоростью 2–3 мл (40–60 капель) в мин, затем переливание прекращают и в течение 3 мин наблюдают за реципиентом, контролируя у него пульс, дыхание, артериальное давление, общее состояние, цвет кожи, измеряют температуру тела. Такую процедуру повторяют ещё дважды. Появление в этот период даже одного из таких клинических симптомов, как озноб, боли в пояснице, чувство жара и стеснения в груди, головной боли, тошноты или рвоты, требует немедленного прекращения трансфузии и отказа от переливания данной трансфузионной среды. Определение группы крови (система АВ0) Дальнейший текст этого раздела взят из «Пропедевтика внутренних болезней» [19] и «Внутренние болезни» [10]. Групповая принадлежность крови определяется по наличию реакции агглютинации при помощи реактивов, содержащих АТ к эритроцитарным агглютиногенам А и В. Реакцию проводят при комнатной температуре. ОПРЕДЕЛЕНИЕ ГРУППЫ КРОВИ СИСТЕМЫ AB0 С ПОМОЩЬЮ СТАНДАРТНЫХ ИЗОГЕМАГГЛЮТИНИЗИРУЮЩИХ СЫВОРОТОК Оснащение Стандартные наборы сывороток системы АВ0 двух серий. Планшет (тарелка) с луночками для определения группы крови с соответствующей маркировкой. Стандартные сыворотки содержат только агглютинины соответствующих групп крови. Так, сыворотка 0(I) группы содержит агглютинины и , А(II) группы — , B(III) группы — , AB(IV) группы — агглютининов не содержит. Стандартные сыворотки имеют стандартную окраску: сыворотка 0(I) группы не окрашена, А(II) группы — синяя, B(III) группы — розовая. Техника 1. Стандартные сыворотки наносят в лунки планшета под соответствующими обозначениями таким образом, чтобы получилось два ряда по три капли (0,1 мл) в следующем порядке: 0(I), А(II), В(III). 2. Рядом с каждой каплей сыворотки наносят по маленькой капле (0,01 мл) исследуемой крови. Сыворотку и кровь в каждой паре капель перемешивают уголком предметного стекла. При этом каждую пару капель перемешивают новым уголком стекла. 3. За ходом реакции наблюдают в течение 5 мин, слегка покачивая пластинку. По мере наступления агглютинации, но не ранее чем через 3 мин, в капли, где видна агглютинация, добавляют по капле изотонического раствора хлорида натрия и продолжают наблюдение до истечения 5 мин. 4. Если агглютинация наступает, реакцию считают положительной, если не наступает — отрицательной. Различные сочетания положительных и отрицательных результатов позволяют судить о групповой принадлежности исследуемой крови (табл. 24 9). Таблица 24–9. Определение группы крови системы AB0 с помощью стандартных изогемагглютинизирующих сывороток
Примечание. + — наличие агглютинации, — — отсутствие агглютинации. Отсутствие агглютинации во всех 3 лунках указывает на то, что исследуемая кровь группы 0(I). Агглютинация в первой и второй лунках и отсутствие агглютинации в третье луночке указывает на то, что исследуемая кровь принадлежит группе А(II). Агглютинация в первой и третьей луночках и отсутствие агглютинации во второй луночке указывает на то, что исследуемая кровь принадлежит группе В(III). Наличие агглютинации во всех трёх луночках указывает на то, что исследуемая кровь четвёртой группы. В этом случае для исключения наличия неспецифической агглютинации проводят контрольное исследование со стандартной сывороткой группа AB(IV), не содержащей групповые агглютинины ( и ), цвет — жёлтый. При наличии агглютинации во всех каплях крови, в том числе и группы AB(IV), групповую принадлежность по системе АВ0 определить невозможно. В таких случаях кровь необходимо направить на станцию переливания крови для серологического исследования. ОПРЕДЕЛЕНИЕ ГРУППЫ КРОВИ ПО СИСТЕМЕ АВ0 С ПОМОЩЬЮ МОНОКЛОНАЛЬНЫХ АТ Для определения групповой принадлежности крови применяют также стандартные реагенты — моноклональные АТ (цоликлоны анти-А и анти-В). Цоликлоны анти-А и анти-В выпускают в лиофилизированной форме в ампулах по 50 доз. Кроме АТ, реагент содержит краситель (розовый — для цоликлонов анти-А, синий — для цоликлонов анти-В). После растворения цоликлоны переносят в прилагаемые к набору флаконы. Определение групп крови цоликлонами анти-А и анти-В имеет ряд преимуществ по сравнению с определением изогемагглютинирующими сыворотками: обеспечиваются более высокие качество агглютинации, достоверность и надёжность результатов, исключается возможность панагглютинации, заметно упрощается процедура определения и сокращаются сроки реакции (наступает уже в первые 1–2 с). Техника На планшет наносят по одной капле (0,1 мл) цоликлонов анти-А и анти-В. Рядом с этими каплями наносят по одной маленькой капле (0,01 мл) исследуемой крови. Стандартные реагенты и капли крови смешивают и наблюдают за реакцией в течение 2,5 мин (табл. 24 10). Таблица 24–10. Определение группы крови системы AB0 с помощью моноклональных АТ
Примечание. + — наличие агглютинации, — — отсутствие агглютинации. Отсутствии агглютинации и с цоликлоном анти-А и с цоликлоном анти-В указывает на то, что исследуемая кровь принадлежит группе 0(I). Наличие агглютинации с цоликлоном анти-А, и отсутствие с цоликлоном анти-В указывает на то, что исследуемая кровь принадлежит группе А(II). Наличие агглютинации с цоликлоном анти-В, и отсутствие с цоликлоном анти-А указывает на то, что исследуемая кровь принадлежит группе В(III). Наличие агглютинации в обеих луночках (как с цоликлоном анти-А, так и с цоликлоном анти-В) указывает на то, что исследуемая кровь принадлежит группе АВ(IV). При подозрении на спонтанную агглютинацию у больных с группой крови AB(IV) проводят контрольное исследование, где вместо цоликлонов анти-А и анти-В используют изотонический раствор хлорида натрия. Реакция агглютинации должна быть отрицательной. Лейкоциты Лейкоциты — ядерные клетки шаровидной формы (см. рис 24–1 и 24–2). В цитоплазме лейкоцитов находятся гранулы. В зависимости от типа гранул, лейкоциты подразделяют на гранулоциты (зернистые) и агранулоциты (незернистые). Гранулоциты (нейтрофилы, эозинофилы, базофилы) содержат специфические (вторичные) и азурофильные (лизосомы) гранулы. Агранулоциты (моноциты, лимфоциты) содержат только азурофильные гранулы. Ядро. Гранулоциты имеют дольчатое ядро разнообразной формы, отсюда их коллективное название — полиморфноядерные лейкоциты. Лимфоциты и моноциты имеют недольчатое ядро, это — мононуклеарные лейкоциты. Подвижность. Лейкоциты используют кровоток как средство пассивного транспорта. Лейкоциты имеют сократительные белки (актин, миозин) и способны к активному перемещению, что позволяет им выходить из кровеносных сосудов, проникая между эндотелиальными клетками (диапедез) и разрушая секретируемыми ими ферментами базальную мембрану эндотелия. Направленную миграцию лейкоцитов (хемокинез, хемотаксис) контролируют различные вещества (в том числе хемоаттрактанты). Функции. Лейкоциты участвуют в защитных реакциях, уничтожая микроорганизмы, захватывая инородные частицы и продукты распада тканей, осуществляя реакции гуморального и клеточного иммунитета. Число лейкоцитов в крови. В 1 л крови взрослого здорового человека содержится 3,8–9,8109 лейкоцитов. Изменяющаяся потребность в отдельных типах лейкоцитов отражается в увеличении (лейкоцитоз) или уменьшении (лейкопения) количества лейкоцитов в единице объёма циркулирующей крови. Например, при острых бактериальных инфекциях в крови увеличивается число нейтрофилов (нейтрофильный лейкоцитоз). При вирусных и хронических инфекциях происходит увеличение числа лимфоцитов (лимфоцитоз), при паразитарных инфекциях наблюдается эозинофилия. Определение количества лейкоцитов В пробирку наливают 0,4 мл раствора Тюрка. Капиллярной пипеткой набирают из свежей капли 0,02 мл крови, осторожно выдувают её в пробирку с реактивом и ополаскивают им пипетку. Смесь хорошо перемешивают. Концом круглой стеклянной палочки отбирают каплю разведённой крови и наносят на край шлифованного стекла камеры Горяева. Подсчёт лейкоцитов ведут в 100 больших квадратах, собранных вместе по четыре. При этом используют малое увеличение микроскопа. Полученное значение умножают на 25, при этом получают количество лейкоцитов в 1 мкл периферической крови. Физиологический лейкоцитоз — состояние, характеризующееся увеличением числа лейкоцитов в единице объёма крови выше нормы (>9109/л). Среди физиологических лейкоцитозов выделяют функциональные и защитно-приспособительные. Функциональный лейкоцитоз обусловлен выполнением организмом определённой функции (например, лейкоцитоз во время беременности, увеличение числа лейкоцитов в крови после приёма пищи или после длительной физической работы). Защитно приспособительный лейкоцитоз развивается при воспалительных процессах, повреждении клеток и тканей (например, после инфарктов или инсультов, травмы мягких тканей), стресс реакции. Патологический лейкоцитоз наблюдается при лейкозах. Эта разновидность лейкоцитоза, развивающаяся за счёт увеличения числа лейкоцитов опухолевой природы, не имеет адаптивного значения для организма. Лейкозные лейкоциты характеризуются нарушением функциональной активности лейкоцитов: снижена их способность синтезировать и высвобождать цитокины и низка их фагоцитарная активность. В связи с этим у пациентов с лейкозами снижена эффективность реакций иммунитета, нередко развиваются аллергические реакции и болезни иммунной аутоагрессии. Механизмы развития лейкоцитозов. Развитие лейкоцитозов является следствием стимуляции лейкопоэза и выхода лейкоцитов из гемопоэтической ткани в периферическую кровь, перераспределения лейкоцитов в сосудистом русле, а также опухолевой активации лейкопоэза при лейкозах и гематосаркомах, гемоконцентрации в результате повторной рвоты, диареи, полиурии. Регенераторный лейкоцитоз (истинный, или абсолютный лейкоцитоз) происходит при повышении уровня и/или активности гуморальных стимуляторов лейкопоэза (например, колониестимулирующих факторов). В результате увеличивается число пролиферирующих клеток лейкопоэтической ткани, сочетающееся, как правило, с дифференцировкой их в зрелые лейкоциты. Именно это наблюдается, например, при воспалительных реакциях и развитии аллергических процессов. Ложный лейкоцитоз (относительный, или перераспределительный лейкоцитоз) наблюдается при перераспределении лейкоцитов в сосудистом русле. Перераспределительный лейкоцитоз носит временный характер и не сопровождается увеличением числа молодых форм лейкоцитов. Перераспределительный лейкоцитоз: характеризуется скоплением большого числа зрелых лейкоцитов в каком либо регионе организма, отсутствием признаков гиперплазии лейкопоэтической ткани, сохранением общего числа лейкоцитов в крови в пределах нормального диапазона. может наблюдаться после значительной физической нагрузки («миогенный лейкоцитоз»), при травматическом, гемотрансфузионном, анафилактическом шоке (увеличивается число лейкоцитов в крови микрососудов лёгких, печени, стенок кишечника). Лейкопения — состояние, характеризующиеся уменьшением количества лейкоцитов в единице объёма крови ниже нормы (<4109/л). Различают первичные (врождённые или наследственные) и вторичные (приобретённые, вследствие радиационного поражения, отравлений, применений ЛС) лейкопении. Значение лейкопении. При выраженной лейкопении происходит снижение сопротивляемости организма (противоинфекционной, а также противоопухолевой). Это обусловлено тем, что лейкоциты участвуют в реализации гуморального и клеточного звеньев иммунитета, а также фагоцитарной реакции. При лейкопениях часто наблюдается бактериальное и вирусное инфицирование организма с развитием ринитов, бронхитов, плевритов, воспаления лёгких, конъюнктивитов и других форм инфекционной патологии. Причины приобретённых лейкопений Ионизирующая радиация Химические вещества (бензол, горчичный газ), инсектициды ЛС (могут привести к нейтропении и даже агранулоцитозу): нестероидные противовоспалительные препараты, антиметаболиты (метотрексат, фторурацил, цитарабин), сульфаниламиды, барбитураты; диакарб, левамизол, тиамазол (мерказолил), хлорамфеникол (левомицетин), изониазид, метициллин, триметоприм, хингамин, алкилирующие вещества (циклофосфамид [циклофосфан]), противоопухолевые антибиотики (доксорубицин). Болезни иммунной аутоагрессии (например, системная красная волчанка), генерализованные инфекции (брюшной тиф, паратиф, грипп, корь, риккетсиозы, гепатиты), кахексия. | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||