Справочный материал. Глава 24 – Кровь. Справочный материал по Физиологии. Глава 24 Кровь. Кровь относится к жидкостям внутренней среды организма
 Скачать 1.04 Mb.
|
|
Агглютинины. В плазме крови к агглютиногенам А и В могут содержаться АТ (соответственно - и -агглютинины). Плазма крови группы 0(I) содержит - и -агглютинины; группы A(II) — -агглютинины, B(III) — -агглютинины, плазма крови группы AB(IV) агглютининов не содержит. Таблица 24–7. Содержание в крови разных групп (система AB0) агглютиногенов (Аг) и агглютининов (АТ)
Таким образом, в крови конкретного человека АТ к эритроцитарным Аг системы AB0 одновременно не присутствуют (табл. 24–7). Однако при переливании крови от донора с одной группой к реципиенту с другой группой может возникнуть ситуация, когда в крови реципиента одновременно будут находиться и Аг, и АТ именно к этому Аг, т.е. возникнет ситуация несовместимости. Кроме того, такая несовместимость может возникнуть и по другим системам групп крови. Именно поэтому стало правилом, что переливать можно только одногруппную кровь. Если точнее, то переливают не цельную кровь, а компоненты, так как «показаний к переливанию цельной консервированной донорской крови нет, за исключением случаев острых массивных кровопотерь, когда отсутствуют кровезаменители или свежезамороженная плазма, эритроцитная масса или их взвесь» (из приказа МЗ РФ). И именно поэтому теоретическое представление об «универсальном доноре» с кровью группы 0(I) на практике оставлено. Rh-СИСТЕМА Каждый человек может быть Rh-положительным либо Rh-отрицательным, что определяется его генотипом и экспрессируемыми Аг Rh-системы. Антигены. 6 аллелей 3 генов системы Rh кодируют Аг: c, C, d, D, e, E. С учётом крайне редко встречающихся Аг системы Rh возможны 47 фенотипов этой системы. Антитела системы Rh относятся к классу IgG (не обнаружены АТ только к Аг d). Rh-положительные и Rh-отрицательные лица. Если генотип конкретного человека кодирует хотя бы один из Аг C, D и E, такие лица резус–положительны (на практике резус-положительными считают лиц, имеющих на поверхности эритроцитов Аг D — сильный иммуноген). Таким образом, АТ образуются не только против «сильного» Аг D, но могу образоваться и против «слабых» Аг c, C, e и E. Резус–отрицательны только лица фенотипа cde/cde (rr). Резус-конфликт (несовместимость) возникает при переливании Rh-положительной крови донора Rh-отрицательному реципиенту либо у плода при повторной беременности Rh-отрицательной матери Rh-положительным плодом (первая беременность и/или роды Rh-положительным плодом). В этом случае развивается гемолитическая болезнь новорождённого. Наследование. Индивидуальные комбинации Аг (фенотипы) определяются гаплотипами системы Rh (c/C, d/D, e/E) каждого родителя. Гаплотипы системы Rh в настоящее время обозначают по системе Фишера: гаплотип Cde как R1, cDE — R2, CDE — Rz, cDe — Ro, Cde — r', cdE — r", CdE — Ry, cde — r. Rh-фактор был обнаружен в 1939 (Левин и Стетсон) и 1940 г. (Ландштайнер и Винер). Авторы у кроликов и морских свинок изучали образование АТ к эритроцитам обезьян из рода макак (Macaca rhesus). Оказалось, что сыворотка иммунизированных грызунов не только агглютинировала эритроциты макак, но также эритроциты 85% европейцев (их кровь Rh-положительна, у остальных 15% — Rh-отрицательна). В то же время только около 1%) американских индейцев и коренных жителей азиатского континента Rh-отрицательны. РЕДКИЕ СИСТЕМЫ MNSs-система (номер по классификации ISBT — 002). Генные локусы: M/N и S/s; Аг: M, N, S, s; 37 фенотипов (групп). АТ обычно класса IgM, но при беременности или гемотрансфузии возможна изоиммунизация с образованием АТ класса IgG. P-система (003). Аг P1 имеет разной выраженности экспрессию. АТ — анти-P1 (IgM). Lutheran (Lu)-система (005). Аг: Lua и Lub; 37 фенотипов (групп); АТ класса IgG. Kell-система (названа по фамилии больной Kellacher, 006) 2 локуса: K (Kell) и k (cellano); 4 Аг: K, k, Kpa, Kpb; 18 фенотипов, фенотип Knull [K- k- Kp(a-b-)] ассоциирован с хронической гранулематозной болезнью (врождённый дисфагоцитоз). АТ класса IgG. Lewis-система (007). 2 локуса и 2 растворимых Аг: Le(a), Le(b); 3 фенотипа: Le(a-b-), Le(a+b-), Le(a-b+). АТ (IgM) известны только при фенотипе Le(a-b-). Единственная система, для которой не наблюдали развития гемолитической болезни новорождённого. Duffy-система (названа по фамилии продуцента АТ, 008). 1 локус, 2 Аг Fy(a) и Fy(b), 6 фенотипов, редко встречающийся повсеместно фенотип Fy(a-b-) распространён в регионах с высокой частотой малярии и обеспечивает некоторый иммунитет от инфицирования Plasmodium falciparium (Аг Duffy — рецептор паразита). АТ класса IgG. Kidd (Jk)-система (009). 1 локус, 2 Аг: Jka и Jkb; 4 фенотипа: Jk(a-b-), Jk(a+b-), Jk(a-b+), Jk(a+b+); АT класса IgG. Переливание крови Далее приводятся выдержки из инструкции по применению компонентов крови, утверждённую приказом МЗ РФ № 363 от 25 ноября 2002 г. 1. Общие положения Переливание (трансфузия) компонентов крови (эритроцитсодержащие переносчики газов крови, тромбоцитсодержащие и плазменные корректоры гемостаза и фибринолиза, лейкоцитсодержащие и плазменные средства коррекции иммунитета) — лечебный метод, заключающийся во введении в кровеносное русло реципиента компонентов, заготовленных от донора или самого реципиента (аутодонорство), а также крови и её компонентов, излившейся в полости тела при травмах и операциях (реинфузия). Переливают компоненты, а не цельную кровь, так как «показаний к переливанию цельной консервированной донорской крови нет, за исключением случаев острых массивных кровопотерь, когда отсутствуют кровезаменители или свежезамороженная плазма, эритроцитная масса или взвесь». Цельная консервированная донорская кровь используется при проведении обменного переливания в терапии гемолитической болезни новорождённых. Кровь доноров на станциях переливания крови или в отделениях переливания крови в ближайшие часы после получения должна быть разделена на компоненты. Компоненты крови должны переливаться только той группы системы АВ0 и той резус–принадлежности, которая имеется у реципиента. По жизненным показаниям и при отсутствии одногруппных по системе АВ0 компонентов крови (за исключением детей) допускается переливание резус-отрицательных переносчиков газов крови 0(I) группы реципиенту с любой другой группой крови в количестве до 500 мл. Резус-отрицательная эритроцитная масса или взвесь от доноров группы А(II) или В(III) по жизненным показаниям могут быть перелиты реципиенту с AB(IV)-группой, независимо от его резус–принадлежности. При отсутствии одногруппной плазмы реципиенту может быть перелита плазма группы АВ(IV). Во всех без исключения случаях переливания эритроцитсодержащих компонентов крови абсолютно обязательным является проведение до начала переливания проб на индивидуальную совместимость и в начале трансфузии — биологической пробы. Запрещается переливание компонентов крови, предварительно не исследованных на ВИЧ, гепатиты В и С, сифилис. Врач, производящий трансфузию компонентов крови, обязан, независимо от произведенных ранее исследований и имеющихся записей, лично провести следующие контрольные исследования непосредственно у постели реципиента: Перепроверить группу крови реципиента по системе АВ0, сверить полученный результат с данными в истории болезни. Перепроверить группу крови по системе АВ0 донорского контейнера и сопоставить результат с данными на этикетке контейнера. Сравнить группу крови и резус-принадлежность, обозначенные на контейнере, с результатами исследования, ранее внесёнными в историю болезни и только что полученными. Провести пробы на индивидуальную совместимость по системам АВ0 и резус эритроцитов донора и сыворотки реципиента. Провести биологическую пробу. 3. Техника иммуносерологических исследований 3.1. Определение группы крови АВ0 На пластинку в три точки под обозначениями анти-А, анти-В, анти-АВ помещают по 2 капли (0,1 мл) реагента и рядом по одной капле осадка эритроцитов (0,01-0,02 мл при использовании гемагглютинирующих сывороток; 0,02-0,03 мл при использовании моноклональных АТ — цоликлонов). Сыворотку и эритроциты перемешивают стеклянной палочкой. Пластинку периодически покачивают, наблюдая за ходом реакции в течение 3 мин. при использовании цоликлонов; 5 мин. при использовании гемагглютинирующих сывороток. По истечении 5 мин. в реагирующую смесь можно добавить по 1-2 капли (0,05-0,1 мл) физиологического раствора для снятия возможной неспецифической агрегации эритроцитов. Интерпретацию результатов производят по таблице: Таблица 24–8. Учёт результатов определения группы крови АВ0
Примечание. Знаком (+) обозначена агглютинация, знаком (-) — отсутствие агглютинации. При наличии агглютинации со всеми тремя реагентами необходимо исключить неспецифическую агглютинацию исследуемых эритроцитов. Для этого к капле эритроцитов вместо цоликлонов добавляют каплю физиологического раствора, а вместо гемагглютинирующих сывороток сыворотку группы AB(IV). Кровь можно отнести к группе AB(IV) только при отсутствии агглютинации эритроцитов в физиологическом растворе или сыворотке AB(IV). 3.2. Определение резус–принадлежности 3.2.1. Реакция агглютинации на плоскости с помощью цоликлонов анти-D супер Наносят большую каплю (около 0,1 мл) реагента на пластинку или планшет. Наносят рядом маленькую каплю (0,02–0,03 мл) исследуемых эритроцитов. Тщательно смешивают реагент с эритроцитами стеклянной палочкой. Через 10–20 с мягко покачивают пластинку. Несмотря на то, что чёткая агглютинация наступает в первые 30 с, результаты реакции учитывают через 3 мин после смешивания. При наличии агглютинации исследуемая кровь маркируется как резус положительная, при отсутствии — как резус отрицательная. Для определения резус–принадлежности ускоренным методом на плоскости при комнатной температуре могут быть использованы поликлональные сыворотки анти-D с неполными антителами, приготовленные в комбинации с коллоидами (альбумином, полиглюкином). 3.2.2. Метод конглютинации с 10%-ным желатином Используют реагенты, содержащие неполные поликлональные антитела (сыворотки анти-D) или неполные моноклональные антитела (цоликлоны анти-D). В 2 пробирки вносят по 0,02–0,03 мл осадка эритроцитов, для чего выдавливают из пипетки небольшую каплю эритроцитов и касаются ею дна пробирки. Затем в первую пробирку добавляют 2 капли (0,1 мл) желатина и 2 капли (0,1 мл) реагента, во вторую (контрольную) пробирку добавляют 2 капли (0,1 мл) желатина и 2 капли (0,1 мл) физиологического раствора. Содержимое пробирок перемешивают встряхиванием, после чего их помещают в водяную баню на 15 мин. или термостат на 30 мин. при температуре +46–48 °С. По истечении указанного времени в пробирки добавляют по 5–8 мл физиологического раствора и перемешивают содержимое путем 1–2-кратного переворачивания пробирок. Результат учитывают, просматривая пробирки на свет невооруженным глазом или через лупу. Агглютинация эритроцитов свидетельствует о том, что исследуемый образец крови резус положительный, отсутствие агглютинации — о том, что испытуемая кровь резус отрицательная. В контрольной пробирке агглютинация эритроцитов должна отсутствовать. Для определения резус–принадлежности ускоренным методом в пробирке при комнатной температуре может быть использован универсальный реагент, представляющий собой сыворотку анти-D с неполными антителами, разведенную 33%-ным полиглюкином. 4. Пробы на индивидуальную совместимость крови донора и реципиента Проба на индивидуальную совместимость позволяет убедиться в том, что у реципиента нет антител, направленных против эритроцитов донора, и таким образом предотвратить трансфузию эритроцитов, несовместимых с кровью больного. Проба на совместимость, выполняемая на плоскости при комнатной температуре, имеет целью выявить у реципиента полные групповые агглютинины системы AB0, MNSs, Lewis и др. Проба на совместимость с применением 10%-го желатина, 33%-го полиглюкина, непрямая проба Кумбса предназначена для выявления у реципиента неполных групповых антител. Двухэтапная проба в пробирках с антиглобулином предусматривает выявление и тех, и других антител, в том числе групповых гемолизинов. Наиболее чувствительной и рекомендуемой является двухэтапная проба в пробирках с антиглобулином, затем комбинация двух проб — пробы на плоскости при комнатной температуре и непрямой пробы Кумбса. Вместо непрямой пробы Кумбса может быть применена реакция конглютинации с 10%-ным желатином или реакция конглютинации с 33%-ным полиглюкином. Последняя проба уступает по чувствительности первым двум, однако занимает меньше времени. 4.1. Двухэтапная проба в пробирках с антиглобулином Первый этап. В маркированную пробирку вносят 2 объема (200 мкл) сыворотки реципиента и 1 объем (100 мкл) 2%-ной взвеси трижды отмытых эритроцитов донора, суспендированных в физиологическом растворе или LISS (раствор низкой ионной силы). Содержимое пробирки перемешивают и центрифугируют при 2500 об/мин (около 600 г) в течение 30 сек. Затем оценивают наличие гемолиза в надосадочной жидкости, после чего осадок эритроцитов ресуспендируют, слегка постукивая кончиком пальца по дну пробирки, и определяют наличие агглютинации эритроцитов. При отсутствии выраженного гемолиза и/или агглютинации переходят к выполнению второго этапа пробы с использованием антиглобулиновой сыворотки. Второй этап. Пробирку помещают в термостат при температуре 37 °С на 30 мин, после чего снова оценивают наличие гемолиза и / или агглютинации эритроцитов. Затем эритроциты трижды отмывают физиологическим раствором, добавляют 2 объема (200 мкл) антиглобулиновой сыворотки для пробы Кумбса и перемешивают. Пробирки центрифугируют в течение 30 с, осадок эритроцитов ресуспензируют и оценивают наличие агглютинации. Учет результатов проводят невооруженным глазом или через лупу. Выраженный гемолиз и/или агглютинация эритроцитов указывает на присутствие в сыворотке реципиента групповых гемолизинов и/или агглютининов, направленных против эритроцитов донора, и свидетельствует о несовместимости крови реципиента и донора. Отсутствие гемолиза и/или агглютинации эритроцитов свидетельствует о совместимости крови реципиента и донора. 4.2. Проба на совместимость на плоскости при комнатной температуре На пластинку наносят 2–3 капли сыворотки реципиента и добавляют небольшое количество эритроцитов с таким расчетом, чтобы соотношение эритроцитов и сыворотки было 1:10 (для удобства рекомендуется сначала выпустить через иглу несколько капель эритроцитов из контейнера на край пластинки, затем оттуда стеклянной палочкой перенести маленькую каплю эритроцитов в сыворотку). Далее эритроциты перемешивают с сывороткой, пластинку слегка покачивают в течение 5 мин, наблюдая за ходом реакции. По истечении указанного времени в реагирующую смесь можно добавить 1–2 капли физиологического раствора для снятия возможной неспецифической агрегации эритроцитов. Учет результатов. Наличие агглютинации эритроцитов означает, что кровь донора несовместима с кровью реципиента и не должна быть ему перелита. Если по истечении 5 мин агглютинация эритроцитов отсутствует, то это означает, что кровь донора совместима с кровью реципиента по групповым агглютиногенам. | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||