|
|
Учебно-методическое пособие. Учебнометодическое пособие для самоподготовки и самостоятельной работы студентов лечебного факультета по микробиологии, вирусологии
ЗАНЯТИЕ 30 МИКРОБИОЛОГИЧЕСКАЯ ДИАГНОСТИКА ЧУМЫ, ТУЛЯРЕМИИ, БРУЦЕЛЛЁЗА, СИБИРСКОЙ ЯЗВЫ (ОКОНЧАНИЕ).
МИКРОБИОЛОГИЧЕСКАЯ ДИАГНОСТИКА СПИРОХЕТОЗОВ
Заканчивая тему «Микробиологический диагноз зоонозных инфекций - чумы, туляремии, бруцеллёза, сибирской язвы», обратите особое внимание на специфическую профилактику этих заболеваний, так как она занимает важное место в борьбе с зоонозными инфекциями.
Спирохеты представляют собой особую группу микроорганизмов, имеющих общие морфологические и физиологические свойства и существенные различия. Они вызывают различные заболевания, отличающиеся по клинической картине, механизму передачи, источнику инфекции и другим признакам. К группе спирохетозов относятся: зоонозные заболевания (лептоспироз), инфекции, передающиеся трансмиссионным путём (боррелиозы - болезнь Лайма и возвратные тифы) и широко распространённое венерическое заболевание - сифилис. Наиболее достоверной диагностикой спирохетозов является лабораторная диагностика, к изучению которой вы приступаете.
Цель самоподготовки
После самостоятельного изучения темы Вы должны знать характеристики возбудителей сифилиса, боррелиозов, лептоспироза, схемы микробиологических исследований при этих заболеваниях.
Исходный уровень знаний
Из курса общей микробиологии необходимо вспомнить культуральные свойства и факторы патогенности бактерий, методы постановки серологических реакций.
Цель занятия
1. Усвоить характеристику возбудителя сибирской язвы.
2. Показать особенности методов микробиологической диагностики сибирской язвы.
3. Выработать чёткое понятие о спирохетозах, а именно о биологических свойствах возбудителей, эпидемиологии и патогенезе вызываемых ими заболеваний.
4. Изучить принципы лабораторной диагностики спирохетозов.
5. Научиться правильно подбирать биологические препараты для диагностики, лечения и профилактики заболеваний в соответствии с темой занятия.
План изучения темы
1. Характеристика возбудителей и схемы микробиологической диагностики сибирской язвы, лептоспирозов.
2. Специфическая профилактика чумы, туляремии, бруцеллёза, сибирской язвы, лептоспирозов.
3. Характеристика возбудителей боррелиозов (возвратные тифы, болезнь Лайма). Схемы микробиологической диагностики возвратных тифов; болезни Лайма.
4. Характеристика возбудителя сифилиса. Патогенез сифилиса, микробиологическая диагностика в зависимости от стадии заболевания.
После изучения темы студент должен уметь
1. Оценить результат реакции термопреципитации по Асколи и сделать заключение о выявлении сибиреязвенного антигена в исследуемом материале.
2. Дифференцировать возбудителей сифилиса, лептоспирозов, боррелиозов по морфологическим и тинкториальным признакам в микропрепаратах.
3. Интерпретировать результаты серологических реакций при обследовании на сифилис (реакции микропреципитации, теста ВДРЛ, используемых для профилактического обследования населения; РИБТ, РИФ (прямой и непрямой варианты), ИФА – как диагностические тесты).
4. Классифицировать биологические препараты по теме в соответствии с их назначением.
Дополнительный материал к занятию
Методы диагностики сифилиса
Выявление возбудителя
Для обнаружения возбудителя в материале из сифилидов, полученном из пораженных участков наружных половых органов, заднего прохода, кожи и слизистой оболочки полости рта, а также инфицированных лимфатических узлов, применяют:
1) микроскопию в тёмном поле;
2) реакцию прямой иммунофлюоресценции (для образцов из поражений в полости рта или из других очагов, где возможна контаминация трепонемами-комменсалами);
3) полимеразную цепную реакцию (ПЦР).
Серологические тесты на сифилис подразделяются на:
а) нетрепонемные тесты: реакция микропреципитации с кардиоли-
пиновым антигеном (РМП), тест ВДРЛ (VDRL - Venerеal Disease Research Laboratory), тест быстрых плазменных реагинов (РПР) и их варианты.
б) трепонемные тесты: реакция пассивной гемагглютинации (РПГА), реакция иммунофлюоресценции (РИФ), иммуноферментный анна-
лиз (ИФА), реакция иммобилизации бледных трепонем (РИТ), иммуноблоттинг (Western blot).
в) специфические тесты для определения антител класса IgM к T.pallidum: 19S IgM-РИФ-абс., ИФА и иммуноблоттинг для определения IgM-антител к T. pallidum.
Для скрининговых (отборочных) обследований населения на си-
филис следует использовать:
1) реакцию микропреципитации (РМП) или РПР/ВДРЛ в сочетании с РПГА;
2) ИФА на IgG или суммарные трепонемоспецифические иммуног-
лобулины;
3) РИФ-абс. или IgM-ИФА при подозрении на первичный сифилис.
В случае если какой-либо из скрининговых тестов окажется положи-
тельным, используют любой из специфических подтверждающих трепонемных тестов:
1) РПГА, ИФА, РИФабс (или другой трепонемный тест, например, РПГА, если ИФА используется как скрининговый метод; ИФА, если в ка-
честве скринингового используется РПГА);
2) иммуноблоттинг на IgG к T.pallidum, если подозреваются ложно-
положительные результаты РПГА или РИФ.
Для контроля эффективности лечения используют РМП, РПР или ВДРЛ в количественном варианте.
Техника взятия крови для серологических реакций на сифилис
Кровь для исследования на РСК, РИФ и РИТ берут из локтевой вены натощак шприцем или одной иглой (самотёком). Шприц и игла должны быть после стерилизации промыты изотоническим раствором натрия хло-
рида (нельзя промывать водой, спиртом, кислотами, щелочами). В чистую сухую пробирку забирают 5–7 мл крови. Кровь для исследования экспресс-методом берут из пальца или из локтевой вены.
При необходимости для исследования в отдалённых лабораториях можно вместо крови пересылать сухие сыворотки. Для этого на следующий день после взятия крови сыворотку отделяют от сгустка. Затем набирают 1 мл сыворотки в шприц и выливают её в виде двух отдельных кружков на полоску писчей бумаги, вощаной бумаги или целлофана. На полоске бумаги с высушенной при комнатной температуре сывороткой надписываются фамилия, имя, отчество больного, возраст, дата взятия крови. Бумага свёртывается в виде аптечного пакетика для порошка. Пакетики вкладываются в конверт вместе с сопроводительным списком фамилий и указанием предполагаемого диагноза. Конверт немедленно отправляется почтой или нарочным в ближайшую серологическую лабораторию, занимающуюся серодиагностикой сифилиса. Срок годности сыворотки для южных окраин России не более 5 дней, для остальной части – 10 дней.
О способе взятия капель крови на бумагу
для агглютинации при лептоспирозе
Кровь из пальца в количестве 10-15 капель берут на полоску фильтровальной бумаги, высушивают при комнатной температуре и по почте отправляют в лабораторию. В лаборатории высушенные на бумаге капли крови вырезают, измельчают, заливают физиологическим раствором в отношении 1:10 с последующим разведением до титра. Высушенная кровь сохраняет антитела не менее месяца.
Контрольные вопросы
Возбудитель сибирской язвы: название по-латыни, морфология, расположение, споры, жгутики, капсула, окраска по Граму. Какими способами можно простерилизовать материал, заражённый сибиреязвенной палочкой? На каких средах культивируется, характер роста на плотной среде и в жидкой среде, отношение к желатину? Какие антигены содержит, какой из антигенов участвует в реакции Асколи; факторы вирулентности. Сибирская язва у человека: название по-латыни, источник инфекции, пути проникновения возбудителя в организм, перечислите клинические формы, наблюдается ли бактериемия. Микробиологический диагноз сибирской язвы; перечислите методы исследования, материалы для исследования. Что можно видеть при микроскопии мазка из исследуемого материала, какое значение имеет микроскопический метод? Выделение чистой культуры: ход исследования и результаты, отличие сибиреязвенных бацилл от непатогенных бацилл, какая диагностическая проба ставится на больном? Реакция Асколи: что это за реакция, что обнаруживают с помощью этой реакции, что служит исследуемым материалом; что является диагностическим препаратом, что он содержит, техника постановки. Препараты для специфической профилактики и терапии чумы, туляремии, бруцеллёза; работы отечественных ученых. Общая характеристика спирохет. Классификация спирохет: перечислите (по-латыни) названия родов, видов спирохет и заболевания, которые они вызывают. Возбудители лептоспирозов: название по-латыни рода и вида патогенных лептоспир, варианты лептоспир, циркулирующих в нашей стране; морфология лептоспир, характер движения, отношение к окраске, среды для культивирования, температурный оптимум роста. Источники и пути заражения человека. Микробиологическая диагностика: материалы для исследования, методы исследования в зависимости от сроков заболевания; особенности бактериоскопических, бактериологических исследований, серологическая диагностика. Препараты для диагностики, активной и пассивной профилактики, препараты для лечения. Какие возвратные тифы вы знаете (в зависимости от переносчика и ареала распространения)? Источники и механизм заражения. Возбудитель эпидемического возвратного тифа: морфология и физиология, отношение к окраске. Патогенез лихорадочных приступов: где находятся боррелии во время приступа; почему прекращается приступ; где сохраняется возбудитель в межприступный период; причины возникновения последующих приступов. Возбудители эндемического возвратного тифа: название по-латыни, морфология и физиология, переносчик. Микробиологическая диагностика возвратных тифов: материал для исследования, когда его нужно взять, что обнаруживают и каким способом? Препараты для лечения. Возбудитель болезни Лайма: название по-латыни, морфология и физиология, отношение к окраске. Источники и пути передачи, переносчик. Клинические проявления. Микробиологическая диагностика: материалы для исследования в разные периоды болезни, обнаружение возбудителя, серологическая диагностика. Препараты для лечения. Возбудитель сифилиса: название по-латыни, к какой группе микроорганизмов относится? Морфология, характер движения, отношение к окраске, чем оно объясняется? Отличие бледной трепонемы от сапрофитических трепонем; способы окраски препаратов; морфология трепонем в окрашенных препаратах. Способ биологического окисления, среды для культивирования; «культуральные» и «тканевые» трепонемы, различие между ними; отношение к температуре, высушиванию, дезинфицирующим веществам. Заболевание у человека: источник инфекции, входные ворота, пути заражения. Иммунитет при сифилисе, его особенности, проявления. Методы прямого выявление возбудителя сифилиса: материалы для исследования, способы обнаружения возбудителя. Серодиагностика сифилиса: в какие периоды заболевания проводится; какие серологические реакции применяются для диагностики сифилиса? Какие реакции применяются в качестве скрининговых и подтверждающих тестов? Какие тесты применяются для контроля эффективности лечения? Как забирается и пересылается материал для серодиагностики сифилиса. Препараты для диагностики и лечения сифилиса.
Задания для выполнения в процессе самоподготовки
Напишите по-латыни названия возбудителей сифилиса, лептоспироза, эпидемического и эндемического возвратных тифов, болезни Лайма.
Работа студента на практическом занятии
1. Окончание микробиологической диагностики сибирской язвы. Изучите колонии на чашках с посевом отделяемого сибиреязвенного карбункула, приготовьте мазки, окрасьте, промикроскопируйте. Результаты изучения колоний и микроскопии опишите в журнале.
2. Изучение препаратов для диагностики и специфической профилактики чумы, туляремии, бруцеллеза, сибирской язвы, лептоспирозов. Познакомьтесь с набором препаратов и дайте характеристику каждого из них по известной вам схеме.
3. Ознакомление с микробиологической диагностикой лептоспирозов. Изучите схему микроскопической диагностики лептоспироза, промикроскопируйте культуру лептоспир в микроскопе с тёмным полем зрения.
4. Ознакомление с микробиологической диагностикой возвратных тарифов и болезни Лайма. Изучите схемы диагностики возвратных тифов и болезни Лайма. Промикроскопируйте и зарисуйте мазок из крови больного возвратным тифом, окрашенный по Романовскому-Гимза.
5. Изучение морфологии возбудителя сифилиса. Промикроскопируйте и зарисуйте мазок из отделяемого сифилитической язвы, окрашенный по Романовскому–Гимза.
6. Серологический диагноз сифилиса. Разберите методы, используемые для серологической диагностики сифилиса.
7. Ознакомление с методом пересылки высушенного препарата сыворотки для диагностики сифилиса. Повторите устно методику взятия и высушивания сыворотки для серологических реакций. Познакомьтесь с готовым препаратом для пересылки сыворотки.
|
|
|
Скачать 1.36 Mb.