Гельминтозы. В. М. Борзунов, В. К. Веревщиков, Г. И. Донцов, Л. И. Зверева, П. Л. Кузнецов Протозойные инвазии и гельминтозы человека
 Скачать 411.95 Kb.
|
При определении этих цестод по строению отошедших головок их с шейкой осторожно кладут в каплю глицерина между предметными стеклами (или покрывают покровным стеклом) и, не передавливая, рассматривают под микроскопом при малом увеличении.Для установления вида обнаруженного паразита необходимо знать биолгическое строение половозрелых форм, фрагментов и их размеры. Микроскопические методы подразделяются на простые, сложные и специальные. К простым относятся методы нативного мазка, нативный мазок раствором Люголя, методы толстого мазка под целлофаном по Като, закручивания (по Шульману) и перианального соскоба. Сложные методы являются более эффективными и основаны на концентрации яиц в препаратах. Они включают в себя предварительную обработку фекалий жидкими реактивами, в результате чего яйца гельминтов или выпадают в осадок, или всплывают на поверхность жидкости. К сложным методам относятся методы обогащения: а) флотационные (когда удельный вес яиц меньше удельного веса солевого раствора и яйца всплывают в поверхностную пленку); б) седиментационные (когда удльный вес яиц больше удельного веса солевых растворов и яйца оседают в осадок). Специальными методами обнаружения яиц и личинок гельминтов, цист и вегетативных форм простейших являются методы соскоба, флотации, седиментации, ларвоскопии, протозооскопии, исследование желчи и методы окраски мазков кала, мокроты и др. Простые методы исследования фекалий Нативный мазок. Небольшую частицу испражнений берут деревянной палочкой из различных участков доставленной порции, хорошо растирают на предметном стекле в капле 50%-ного раствора глицерина и делают на 2-3 предметных стеклах тонкий мазок. Просматривают под микроскопом не менее 3 препаратов. Недостаток метода: просматривается малое количество материала, поэтому как самостоятельный метод не применяется. Метод закручивания (Шульмана). 2,0-3,0 г испражнений кладут в стаканчик, тщательно размешивают стеклянной палочкой с 5-кратным объемом физиологического раствора или дистиллированной воды, производя быстрые движения в течение 2-3 мин, и быстро вынимают палочку из смеси. Каплю смеси на конце палочки переносят на предметное стекло и микроскопируют. Принцип центробежной силы вызывает скопление яиц и личинок на палочке. Метод толстого мазка по Като с целлофаном. Химические реактивы:100%-ный глицерин, 6%-ный раствор фенола (100 мл воды + 6 г фенола), 3%-ный раствор малахитовой зелени (2,5 мл дистиллированной воды + 75 мл малахитовой зелени). Приготовление рабочего раствора: 100 мл 6%-ного раствора фенола + 100 мл чистого глицерина + 1,2 мл 3%-ного раствора малахитовой зелени. Приготовление целлофановых полосок: нарезаются полоски из целлофана, размер которых соответствует предметному стеклу. Целлофан должен быть гидрофильный (пригоден целлофан, который горит; если плавится, то непригоден). В рабочем растворе можно обработать до 5 тыс. полосок. Срок экспозиции целлофановых полосок до готовности к употреблению в рабочем растворе не менее 24 час. Ход исследования. На предметное стекло наносят 50 мг фекалий (с крупную горошину), растирают индивидуальной палочкой (стеклянной, деревянной), накрывают целлофановой полоской и сверху притирают резиновой пробкой до получения равномерного толстого мазка. Препарат высушивают при комнатной температуре в течение часа или в термостате при 40°С в течение 20-30 мин и микроскопируют (время выдержки можно увеличить при комнатной температуре до 5-6 час и более). По эффективности данный метод приближается к методу флотации, но выявляет инвазию интенсивную и средней интенсивности. Применяется как самостоятельный метод диагностики и рекомендуется для массового обследования населения. В клинико-диагностических лабораториях применяется как унифицированный метод диагностики гельминтов при отсутствии в направлениях врачей конкретных диагнозов. Методы перианального соскоба и нативного мазка с раствором Люголя описаны в разделе специальных методов. Сложные методы обогащения фекалий В основу методов обогащения положена разность удельного веса яиц гельминтов и применяемого солевого раствора. При применении метода флотации могут быть использованы следующие солевые растворы: 1. Раствор нитрата свинца PbNO3 (азотнокислого свинца) с плотностью 1,5. Готовится из расчета 650 г вещества на 1 л воды. Соль растворяют порциями в горячей воде в эмалированной посуде, подогревая на плите и постоянно помешивая до полного растворения. Фильтровать раствор не обязательно. Раствор готовят в день исследования, так как со временем он дает осадок, и плотность его начинает падать уже через 24 ч. Если раствор приготовлен в большом количестве, то в последующие дни перед исследованием его подогревают, размешивая осадок. Приготовление раствора производится в вытяжном шкафу, так как нитрат свинца – соль тяжелого металла. 2. Раствор нитрата аммония NH4NO3 (гранулированной или обычной аммиачной селитры) с плотностью 1,3 готовят так же, как и предыдущий, но из расчета 1500 г вещества на 1 л горячей воды. 3.Раствор нитрата натрия NaNO3 или азотнокислого натрия с плотностью 1,38-1,4 готовят из расчета 1000 г вещества на 1 литр горячей воды. 4. Раствор тиосульфата натрия Na2S2O3×5H2O (гипосульфита натрия) с плотностью 1,4 готовят из расчета 1750 г вещества на 1 л горячей воды. 5. Раствор сульфата натрия Na2SO4 (английской соли) с плотностью 1,26-1,28 готовят из расчета 920 г вещества на 1 л горячей воды. 6. Раствор хлорида цинка ZnCl2 (хлористого цинка) с плотностью 1,82 готовят из расчета 2000 г вещества на 1 л горячей воды. Остывший раствор не кристаллизуется. 7. Насыщенный раствор хлорида натрия NaCl (поваренная соль) с плотностью 1,18-1,2. На ! л воды добавляют 400-420 г соли порциями в эмалированное ведро с кипящей водой, постоянно размешивая до полного растворения. При остывании раствора выпадают кристаллы хлорида натрия. Удельный вес флотационных растворов измеряется аэрометром только после полного остывания раствора при комнатной температуре. Методы флотации наиболее эффективны для обнаружения яиц карликового цепня, власоглава, анкилостомид, аскарид, широкого лентеца. Поверхностную пленку можно снимать с помощью проволочной петли или предметного стекла. В насыщенном растворе поваренной соли пленку можно исследовать через 30-40 мин, в растворе аммиачной селитры – через 10-20-30 мин после отстаивания. При снятии пленки проволочной петлей исследуют не менее 8 капель. Предметные стекла снимают с пленки больше яиц, чем проволочные петли. Стекло должно соприкасаться с жидкостью флотационного раствора, которую добавляют в стаканчик пипеткой. После отстаивания стекло снимают, кладут смоченной поверхностью вверх на стекло большего размера и исследуют под микроскопом. Предметные стекла перед использованием обязательно обезжиривают. Методы флотации известны по фамилиям их авторов (Калантарян, Фюллеборна и др.). Принципиально их методики различаются только по удельному весу применяемого флотационного раствора. Для проведения исследований необходимо иметь: предметные стекла, химические стаканчики, проволочные петли, кюветы, чашки Петри, пипетки, груши, стеклянные или деревянные палочки. Ход исследования. 5 г фекалий заливают 10-кратным количеством флотационного раствора (лучше удельным весом 1,38-1,40), тщательно размешивают, снимают сверху не растворяющиеся крупные частицы и оставляют взвесь на 10-15 мин. Затем пленку снимают либо петлей на предметное стекло, либо предметным стеклом. Для разведения испражнений лучше взять стаканчики емкостью 30-50 мл, налить раствор вровень с краями (или недоливать 2-3 мм) и смесь покрыть предметным стеклом, а затем пипеткой добавить флотационный раствор до его соприкосновения с предметным стеклом. Через 10-20 мин стекло быстро снять и оставшуюся на нем пленку микроскопировать без покровного стекла. Методы осаждения-седиментации Методы седиментации применяются для выявления в кале яиц геогельминтов, биогельминтов и как специальные методы исследования на описторхоз. Метод Горячева-Золотухина (упрощенный метод Горячева). Около 1,5 г кала размешивают в химическом стаканчике в 3-4 мл воды. Полученную взвесь фильтруют через два слоя марли в центрифужную пробирку, наслаивая осторожно сверху на имеющиеся в ней 4-5 мл насыщенного раствора поваренной соли. Пробирки ставят в штатив на 15-20 ч. За это время тяжелые яйца трематод оседают. Получают два четко разграниченных слоя. Осадок микроскопируют. Эфир-формалиновый метод. Применяется для диагностики всех кишечных инвазий и как специальный метод на простейшие и яйца описторхов. Оборудование: центрифуга на 3000 об/мин; центрифужные градуированные пробирки, воронки; металлическое ситечко (чайное) или двухслойный бинт; предметные и покровные стекла; деревянные (или стеклянные) палочки; вата, бинт. Химреактивы: 10%-ный раствор формалина (1 часть раствора формалина аптечного и 4 части дистиллированной воды); этиловый эфир (медицинский). В центрифужные пробирки наливают 7 мл 10%-ного раствора формалина и помещают 1 г фекалий (такое количество фекалий, чтобы раствор в пробирке поднялся до 8 мл). Фекалии смешивают с формалином до образования однородной смеси, а затем через металлическое ситечко (или двухслойную марлю, бинт) переливают в другую центрифужную пробирку (если на ситечке остались фекалии, то ситечко надо ополоснуть формалином). Добавить 2 мл эфира в эту центрифужную пробирку, закрыть пробкой и энергично встряхивать в течение 30 сек. Смесь центрифугируют при 3000 об/мин в течение одной минуты (можно в течение двух минут при 1500 об/мин). За счет реакции эфир-формалина происходит коагуляция белков в виде пробки вверху пробирки, а в осадок выпадают яйца гельминтов. Слой коагулянта убирают, сливается надосадочная жидкость, осадок наносится на предметное стекло прямо из пробирки или пастеровской пипеткой, накрывается покровным стеклом и просматривается под микроскопом. Метод эфир-уксусного осаждения. Принцип эфир-уксусного осаждения яиц гельминтов заключается в последовательной обработке проб фекалий 10%-ным водным раствором уксусной кислоты и эфиром. Уксусная кислота лучше других химических соединений эмульгирует пробу фекалий. Она проникает в непереваренные частицы, состоящие преимущественно из клетчатки, которые при большом содержании мешают исследованиям, выпадая в осадок после центрифугирования. Последующее добавление в пробирку эфира и перемешивание приводит к извлечению из содержимого пробирки уксусной кислоты вместе с пропитанными ею каловыми частицами. Так как удельный вес смеси эфира с уксусной кислотой меньше удельного веса воды, пробы кала, обработанные этими веществами, всплывают, а яйца гельминтов, обладающие большим удельным весом, оседают. Количество осадка, полученного после эфир-уксусного осаждения, в 3-4 раза меньше, чем после эфир-формалинового. Это значительно облегчает обнаружение в нем яиц гельминтов и позволяет исследовать осадок целиком при навеске в 0,5-1 г. Токсичность эфир-уксусного метода в 5 раз ниже. Ход исследования. В градуированную центрифужную пробирку наливают 7 мл 10%-ного раствора уксусной кислоты и вносят навеску кала 1 г (т.е. такое количество кала, при котором раствор уксусной кислоты поднимается до 8 мл). Тщательно размешивают стеклянной или деревянной палочкой. Процеживают через воронку с двумя слоями марли в другую центрифужную пробирку. К эмульгату добавляют 2 мл этилового эфира (т.е. до 10 мл). Пробирки закрывают резиновой пробкой (можно от пенициллинового флакона) и встряхивают 15 сек. Убрав пробку, пробирки центрифугируют в течение одной минуты при 3000 об/мин в течение 2 мин. Надосадочную жидкость из пробирки сливают. В некоторых случаях образовавшаяся каловая пробка мешает сливу надосадочной жидкости. В этом случае стеклянной или деревянной палочкой отделяют пробку от стенок пробирки. Осадок пипеткой целиком переносят на предметное стекло и микроскопируют под покровным стеклом при малом увеличении. Осадок, как правило, небольшой, бесцветный. Яйца гельминтов, особенно мелкие яйца трематод, хорошо обнаруживаются. Химико-седиментационный метод. Принцип исследования основывается на осаждении яиц из пробы фекалий в солевом растворе с удельным весом 1,15. Сущность метода заключается в непосредственном центрифугировании пробирки, в которой на раствор азотнокислого натрия (уд. вес 1,16) наслоена пробка кала, эмульгированная в 1%-ном растворе уксусной кислоты. Высокий удельный вес солевого раствора и выделяемые за счет химической реакции пузырьки, пронизывающие слой гомогенизированного кала, препятствуют его осаждению. Яйца гельминтов выпадают в осадок с небольшим количеством клетчатки. Осадок можно очистить от оставшегося детрита, обработав его 10%-ным раствором уксусной кислоты и эфиром. В этом случае остаются только одни яйца гельминтов, что значительно облегчает их выявление. Ход исследования. В градуированную центрифужную пробирку наливают 6 мл раствора азотнокислого натрия с удельным весом 1,15. В другую пробирку наливают 7 мл 1%-ного раствора уксусной кислоты. Вносят пробу фекалий (до метки 7,5 мл при пробе 0,5 г и до 8 мл при пробе в 1,0 г). Тщательно перемешивают пробу стеклянной палочкой. Процеживают через воронку с одним слоем марли, наслаивая на раствор азотнокислого натрия. Пробирку с наслоенным фильтратом центрифугируют при 1500-2000 об/мин в течение 5 мин. Быстрым переворачиванием пробирки сливают надосадочную жидкость. В пробирку с осадком добавляют 3-4 мл 10%-ного раствора уксусной кислоты и 0,5 мл эфира, закрывают резиновой пробкой и встряхивают. Проводят повторное центрифугирование в течение 1 мин. Сливают надосадочную жидкость. Осадок переносят на предметное стекло, накрывают покровным стеклом и микроскопируют. ГЕЛЬМИНТОЛОГИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ ЖЕЛЧИ, ДУОДЕНАЛЬНОГО СОДЕРЖИМОГО, МОКРОТЫ, КРОВИ, МОЧИ И МЫШЦ Обнаружение яиц и личинок гельминтов в дуоденальном содержимом и желчи. Исследование желчи и дуоденального содержимого производится при подозрении на гельминтозы печени и желчного пузыря (описторхоз, клонорхоз, дикроцелиоз) и двенадцатиперстной кишки (стронгилоидоз). Ход исследования. Дуоденальное содержимое и желчь (порции А, В, С) получают обычным путем при помощи зондирования. Для порции В рекомендуется обязательно получать рефлекс желчного пузыря введением через зонд 33% раствора сернокислой магнезии. Из исследуемой жидкости выбирают и просматривают под микроскопом плавающие в ней хлопья, а затем смешивают ее с равным количеством серного эфира. Смесь тщательно взбалтывают и центрифугируют. Надосадочную жидкость сливают, а весь осадок исследуют под микроскопом. При отсутствии гноя и слизи желчь и дуоденальное содержимое центрифугируют, не смешивая с эфиром. Исследование мокроты. В гельминтологической практике исследование мокроты проводится с целью лабораторной диагностики парагонимоза. Иногда при этом выявляются яйца шистосом, личинки аскариды, элементы эхинококкового пузыря. Из мокроты готовят нативный мазок на предметном стекле, который исследуют под микроскопом. При обильном содержании в мокроте гноя ее смешивают с 0,5% раствором едкого натра или едкого калия, встряхивают в течение 5 минут и центрифугируют. Осадок микроскопируют. Исследование крови. Кровь исследуют при подозрении на наличие у больного филяриозов. В связи с тем, что при некоторых видах филяриозов (лоаоз, вухерериоз, вызванный субпериодическим штаммом) личинки (микрофилярии) бывают в периферической крови только днем, а при некоторых (бругиоз, вухерериоз, вызванный периодическим штаммом) – только ночью, соответственно в это время берут кровь для анализа. Техника забора крови, приготовления препаратов (тонкий мазок и толстая капля), их окрашивания (по Романовскому) и исследование аналогичны таковым при лабораторной диагностике малярии. Микрофилярии разных видов отличают по длине, ширине, изгибу тела, наличию или отсутствию чехлика, форме хвостового конца, расположению ядерной субстанции в теле и хвостовом отделе личинок. Исследование мочи. Мочу подвергают паразитологическому исследованию при лабораторной диагностике мочеполового шистосомоза. Иногда в моче могут быть обнаружены элементы пузырной личинки эхинококка, а также яйца гельминтов, попавшие с промежности. Ход исследования. Мочу отстаивают не менее 30 мин, затем верхний слой сливают, оставляя 10-15 мл осадка, которые разливают в центрифужные пробирки, и центрифугируют в течение 1-2 мин. Слив надосадочную жидкость, осадок переносят на предметное стекло и исследуют под микроскопом. ИССЛЕДОВАНИЕ БИОПТАТОВ МЫШЦ Метод трихинеллоскопии. Необходимость в исследовании биоптатов мышц больного возникает при подозрении на трихинеллез. Биопсия проводится по общим правилам. Обычно делают биопсию дельтовидной мышцы. При паталогоанатомическом исследовании можно делать биопсию мышц диафрагмы, пищевода, языка, жевательных и межреберных мышц, сгибателей конечностей, мышц глазного яблока, так как они наиболее интенсивно поражаются личинками трихинелл. В лаборатории биопсированный кусочек мышц разрезают на очень мелкие кусочки (микротомом), которые помещают между двумя стеклами, раздавливая мышечные волокна, и исследуют под микроскопом. В настоящее время для этой цели широко используются специальные микроскопы – трихинеллоскопы. В случае трихинеллеза при трихинеллоскопии по ходу мышечных волокон обнаруживаются резко выделяющиеся овальной формы (похожие на лимон) трихинеллезные капсулы. Средняя величина капсул у человека составляет 0,4 х 0,26 мм. В капсуле, как правило, содержится одна спирально свернутая в 2,5 оборота трихинелла. При высокой интенсивности инвазии в одной капсуле может быть 2 или 3 личинки. Смежные с капсулой мышечные волокна теряют свою поперечную исчерченность и принимают гомогенный вид. Таким же способом исследуют мясо или мясные продукты, явившиеся причиной заражения. Метод переваривания мышц. Метод более эффективен. Ход исследования. Исследуемые мышцы мелко измельчают и заливают искусственным желудочным соком в соотношении 1:15-20. Полученную смесь помещают в термостат при 37°С на 12-16 ч. По истечении этого срока микроскопируют осадок, в котором среди массы остатков переваренных мышечных волокон обнаруживаются личинки трихинелл в свободном состоянии. Искусственный желудочный сок можно приобрести в аптеке или приготовить в лаборатории. Для этого к 1 л дистиллированной воды добавляют 10 мл концентрированной хлористоводородной кислоты; перед использованием к 1 л разведенной кислоты добавляют 30 г пепсина. КОЛИЧЕСТВЕННЫЕ МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ Количественные методы исследования применяются при определении интенсивности инвазии, оценке эффективности различных антигельминтных препаратов, определении качества дегельминтизации, контроле проводимых массовых лечебно-профилактических мероприятий и др. В связи с тем, что количество яиц, выделяемых каждым гельминтом, зависит от его возраста, применения больным лечебных препаратов, качества пищи, общего состояния больного и т.д., результаты, получаемые при количественных методах диагностики гельминтозов, не являются абсолютно достоверными, а позволяют лишь приближенно судить о количестве гельминтов, паразитирующих в кишечнике обследуемого лица. Количественное определение яиц гельминтов проводится двумя методами: методом Столла и методом Красильникова и Волковой (1974). Метод Столла. Для проведения исследования необходимо иметь микроскоп, стеклянную колбу с отметкой 56 и 60 мл, мерный цилиндр, стеклянные бусы, резиновую пробку для колбы, градуированные пипетки, предметные стекла и 0,4% раствор едкого натра. Ход исследования. В колбу мерным цилиндром наливают децинормальный раствор едкого натра (примерно 0,4% концентрации) до метки 56 мл и добавляют испражнения до тех пор, пока уровень жидкости не достигнет отметки 60 мл (т.е. 4 мл испражнений). Смесь тщательно взбалтывают со стеклянными бусами в течение 1 минуты, закрыв сосуд резиновой пробкой (можно перемешать и палочкой). Тотчас после взбалтывания набирают градуированной пипеткой 0,075 мл смеси (в ней содержится 0,005 мл испражнений), переносят на предметное стекло и подсчитывают количество яиц в препарате под микроскопом. Чтобы определить количество яиц в 1 г испражнений, обнаруженное число умножают на 200. Сравнение числа яиц в препарате, обнаруженное у больного до проведения лечения и после него позволяет судить об эффективности дегельминтизации. Метод Столла прост, дает сравнимые результаты при всех гельминтозах, возбудители которых систематически выделяют яйца в кишечник больного. Однако недостатком метода является его относительно низкая чувствительность, особенно при слабой интенсивности инвазии. Метод Красильникова-Волковой. При исследовании этим методом не менее 1 г фекалий смешивают в стеклянной колбочке или большой пробирке с 1% раствором "Лотоса" (или 1,5% раствором "Экстры") в соотношении 1:10. Взвесь тщательно взбалтывают до образования гомогенной суспензии, затем быстро набирают градуированной пипеткой 0,1 мл взвеси (что равняется 0,01 г фекалий) и переносят на предметное стекло. Препарат покрывают покровным стеклом или целлофановой пластинкой (20 х 30 мм), выдержанной не менее одних суток в 50% водном растворе глицерина. Подсчитывают число яиц во всем препарате. Для расчета количества яиц в 1 г фекалий полученное число надо умножить на 100. Этот метод имеет ряд преимуществ перед методом Столла. Во-первых, он более чувствителен и позволяет выявлять гельминтов при слабой степени инвазии. Во-вторых, он очень удобен при массовых обследованиях, так как растворы детергентов, являясь консервантами яиц гельминтов, позволяют проводить исследования и не совсем свежего материала. Однако обязательным условием при этом является сбор фекалий непосредственно в раствор детергента. Для количественного исследования можно применять любой из описанных унифицированных качественных методов, основанных на принципе всплывания яиц. Но в этом случае для анализа должно быть взято одно и то же количество фекалий, один и тот же объем флотационного раствора. Расчет степени инвазии можно произвести, зная количество яиц в 1 г фекалий, по приведенной таблице. Интенсивность инвазии в зависимости от числа яиц гельминтов в 1 г фекалий
СЕРОЛОГИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ Эти методы, основанные на выявлении специфических антител в сыворотке крови, применяются с диагностической и скрининговой целями. К серологическим методам относятся: - реакция кольцепреципитации (РКП) (трихинеллез, цистицеркоз); - реакция кольцепреципитации в пробирках на холоде (трихинеллез, цистицеркоз); - реакция микропреципитации на живых личинках (трихинеллез, аскаридоз); - реакция непрямой гемагглютинации (РНГА) (трихинеллез, эхинококкоз, альвеококкоз, цистицеркоз и др.); - реакция агглютинации латекса (РАЛ) (эхинококкоз, альвеококкоз, трихинеллез, тениаринхоз и др.); - реакция связывания комплемента (РСК) (трихинеллез, эхинококкоз, цистицеркоз); - реакция энзим-меченных антител (РЭМА) (эхинококкоз, онхоцеркоз, шистосомозы, трихинеллез, токсокароз); - иммуноферментный анализ (ИФА) (трихинеллез, описторхоз, токсокароз, токсоплазмоз и др.). Для постановки серологических реакций выпускаются стандартные антигены или же они готовятся самостоятельно (например, из эхинококковых пузырей овец), выпускаются специальные тест-системы для ИФА. Серологические реакции нередко представляют большую ценность, однако имеют меньшее значение при диагностике отдельных паразитозов. При высокой интенсивности циркуляции паразитов серологические реакции могут служить ценным методом скрининга, позволяющим затем проводить целенаправленные паразитологические исследования или исключать наличие паразитов у обследованных. Отсутствие желаемой специфичности большинства серологических реакций объясняется химической сложностью применяемых антигенов. Определенную проблему при постановке этих исследований представляют перекрестные реакции, которые с различной частотой дают паразиты, принадлежащие к основным группам (трематоды, цестоды, нематоды). Следует также учитывать возможность перекрестных реакций при инвазированности паразитами животных. Специальные методы исследования на энтеробиоз, тениаринхоз, тениоз Соскоб с перианальных складок. Для получения соскоба с перианальных складок можно применять деревянный шпатель, целлофановую полоску, целлюлозную бумагу или ленту, глазные палочки со специальным клеевым слоем: а) соскоб деревянным шпателем (шпатель – уплощенная спичка или палочка), смоченным 1% раствором глицерина (или 0,5% раствором питьевой соды), производится легким соскабливанием с поверхности перианальных складок по всей окружности анального отверстия. Полученный соскоб переносят краем покровного стекла с конца шпателя на предметное стекло в каплю 50% раствора глицерина, накрывают этим же покровным стеклом и микроскопируют. Недостатком метода является недостаточная выявляемость яиц и раздражающее действие; б) по методу Торгушина делают смыв ватным тампоном на деревянном или другом шпателе, смоченном 50% раствором глицерина, и готовят мазок на предметном стекле в капле глицерина; в) по методу Кеворковой в центрифужную пробирку наливают около 5 мл кипяченой воды, помещают в него шпатель (палочку) с ватным тампоном. Перед взятием материала тампон слегка отжимают о внутреннюю стенку пробирки, обтирают им перианальные складки и вкладывают шпатель с тампоном в пробирку. Тщательно взбалтывают тампон в пробирке, смыв центрифугируют 3 мин и полученный осадок исследуют под микроскопом; г) соскоб липкой лентой по Грэхэм. Часть липкой ленты (прозрачная полиэтиленовая лента с липким слоем для детского творчества, но лучше использовать операционную пленку ЛПО-1, ЛПО-2) длиной 8-10 см приклеивают липким слоем к перианальным складкам кожи, держа за концы, а затем переносят ее на предметное стекло липким слоем вниз (концы ленты, выходящие за края стекла отрезают), стекла нумеруются, а в журнале записываются данные больного и номер стекла. В лаборатории ленту с одного конца отклеивают на большом протяжении, капают под нее 1-2 капли вазелинового масла или глицерина (для устранения оптических дефектов) и микроскопируют; д) соскоб с помощью стеклянных глазных палочек, поверхность которых покрыта специльным клеевым составом. Глазные палочки устанавливаются в специальный штатив. Забор материала производится путем соприкосновения плоской части лопаточки к коже перианального отверстия. Затем палочка снова укрепляется в штатив для транспортировки. Микроскопия проводится непосредственно на лопаточке с обеих сторон (без предметных и покровных стекол) с предварительным креплением в кассеты при малом увеличении (окуляр х 10, объектив х 8). По окончании работы палочки дезинфицируются кипячением в мыльном растворе, а штатив и кассеты обрабатываются спиртом и промываются мыльно-содовым раствором. Состав клея: клеол – 10 г, касторовое масло – 2,5 г, этиловый эфир – 5 г, этиловый спирт 96% - 2,5 г. Лопаточки обмакиваются в раствор клея, затем высушиваются на воздухе при комнатной температуре. Образовавшаяся на поверхности клейкая пленка сохраняется в течение нескольких дней. Метод удобен при массовом обследовании детского населения на энтеробиоз и взрослого населения на тениидозы. Дополнительно к методу соскоба при тениаринхозе и тениозе применяются также метод опроса и описанный выше макроскопический метод (при выявлении члеников). Специальные методы исследования на стронгилоидоз Применяют эфир-уксусный метод для обнаружения яиц (см. выше) и метод Бермана для обнаружения личинок в испражнениях. Метод Бермана. Исследуют свежий кал, лучше после принятия слабительного. Пробу фекалий 5 г помещают на металлическое сито (сетку внутри выстилают двумя слоями марли) в стеклянную воронку, закрепленную в штативе. На нижний конец воронки надевают резиновую трубку с зажимом (аппарат Бермана). Сетку с испражнениями приподнимают и в воронку наливают нагретую до 40-50°С воду таким образом, чтобы нижняя часть сетки была погружена в воду и кал покрылся водой целиком. Через 2-4 ч зажим на резиновой трубке быстро открывают, и жидкость спускается в центрифужную пробирку. После центрифугирования (1-2 мин) верхнюю часть жидкости быстро сливают, а осадок в количестве 1 мл наносят тонким слоем на предметное стекло и микроскопируют под малым увеличением микроскопа. Метод ИМП и ТМ. В химический стаканчик помещают порцию фекалий величиной с орех, заливают теплым 40°С физраствором, чтобы фекалии покрылись раствором, оставляют на 20 мин. Через 20 мин сливают жидкость в чашку Петри и просматривают под бинокулярным микроскопом МБС. Для диагностики стронгилоидоза, особенно для контроля за эффективностью лечения, рекомендуется сочетать метод Бермана с исследованием дуоденального содержимого. Специальные методы исследования на нематодозы Нематозы Аскаридоз В анамнезе обращается внимание на отношение к огородничеству, садоводству. Употребление в пищу сырых овощей, салатов, приготовленных из этих овощей. Клинические проявления ранней фазы аскаридоза обусловлены аллергическими перестройками организма. Ранняя или миграционная личиночная стадия аскаридоза протекает нередко при наличии лихорадки с температурой тела до 38° и выше, с симптомокомплексом поражения легких, наличием выраженной эозинофилии крови. В большинстве случаев у детей первыми признаками заболевания являются недомогание, слабость, периодические головные боли, потливость, иногда боли в мышцах, суставах. Нередко появляется обильная сыпь типа крапивницы с сильным или умеренным зудом. Диагноз ранней фазы подтверждается рентгенологическими исследованиями на наличие в легких летучих эозинофильных инфильтратов Леффлера. В мазках свежевыделенной мокроты нередко обнаруживаются эозинофильные клетки, эритроциты, кристаллы Шарко-Лейдена и личинки аскарид. При кишечной имагинальной стадии аскаридоза отмечается сочетание проявлений со стороны желудочно-кишечного и астенического синдромов, энтероколитический болевой симптомы. У детей нередко отмечается снижение в весе, порой довольно значительно. Тошнота, повышенная саливация, раздражительность, задержка психомоторного развития, снижение интеллекта. Для лабораторной диагностики кишечной стадии аскаридоза применяются копроовоскопические методы: мазок по Като, унифицированные методы обогащения Фюллеборна, Калантарян и другие флотационные методики. При этом необходимо учитывать, что яйца аскарид могут быть не обнаружены, если в кишечнике паразитируют одни самцы или молодые и, наоборот, старые самки. В таких случаях следует прибегать к даче одной дозы специфического антигельминтика. Трихоцефалез Трихоцефалез – болезнь, вызываемая паразитированием в организме человека власоглавов. В эпиданамнезе, как и при аскаридозе, обращает на себя внимание связь с огородничеством, садоводством, употребление в пищу сырых овощей или в виде салатов. Клинически болезнь характеризуется преимущественно расстройствами кишечника. В зависимости от интенсивности инвазии клинические проявления от легких форм диареи, метеоризма могут приобретать, особенно у детей, более выраженное течение в виде прогрессирующей диареи, тифлита со спастическими болями в животе, дизентериеподобным синдромом, нередко с тяжелым гемоколитом. Власоглавы – факультативные гематофаги, поэтому в гемограмме возможны микроцитарная анемия, непостоянная умеренная эозинофилия. Лабораторная диагностика. Копроовоскопия: мазок по Като, методы обогащения (флотация). Энтеробиоз Контагиозное заболевание в результате паразитирования в организме остриц. В эпиданамнезе выясняется семейное положение, число детей, посещающих дошкольное и школьное учреждение, наличие в настоящее время или в прошлом больных этой инвазией. Клиника энтеробиоза может быть слабо выражена. Но у большинства инвазированных имеются жалобы на зуд в анальной и жжение в перианальной области. Наличие высыпания, нередко пиодермия. У детей, как правило, отмечается общая слабость, раздражительность, плохой сон. В большинстве случаев имеется прогрессирующий энтерит. Лабораторная диагностика. Макроскопически можно обнаружить в кале мелких белых червячков. Чаще на это указывают родители детей. Основным методом является метод соскоба (липкой лентой, тампоном, смыв) с перианальных складок больного. Трихинеллез Возбудители – живородящие паразиты трихинеллы спиральные. Эпиданамнез является важным методом выяснения природы заболевания. Географические данные. Употребление в пищу свинины, медвежатины, мяса дикого кабана, недостаточно термически обработанных пельменей, котлет, пробование сырого фарша, сыроедение. Клиника. Для трихинеллеза характерна следующая тетрада: острая лихорадка, боли в мышцах, нередко очень интенсивные отеки век и лица (одутловатка), высокая эозинофилия крови. Часто у заболевших лиц отмечаются высыпания на коже. При тяжелом течении болезни характерно наличие органных поражений. Лабораторная диагностика. Срочная трихинеллоскопия изъятого оставшегося сырого мяса животных. Постановка реакций с сывороткой крови больного (РНГА, РКП, ИФА). Гименолепидоз Кишечный гельминтоз, вызываемый карликовым цепнем. В эпиданамнезе большинства больных отмечаются неудовлетворительные жилищно-бытовые условия: проживание в неблагоустроенном общежитии, коммунальной квартире. Работа в детских дошкольных, школьных коллективах, контакт с больным гельминтозами (гименолепидоз - контагиозная инвазия). Наиболее часто поражены этим гельминтозом дети в возрасте до 14 лет. Клинически у большинства больных отмечаются изменение аппетита, тошнота, слюнотечение, ноющие, тупые боли в животе. Болевые приступы, как правило, связаны с приемом пищи. Возможен легко выраженный гемоколит. У детей могут быть судорожные эпилептиформные припадки. Нередко наблюдаются аллергические реакции (сыпь, кожный зуд, вазомоторный ринит, приступы астматического бронхита и т.д.). В крови невысокая эозинофилия, умеренно выраженная анемия, чаще при длительно текущей инвазии. Лабораторное подтверждение. Копроовоскопия: нативный мазок по Като, флотационные методы (обогащения). Специальные методы диагностики некоторых тропических гельминтозов Шистосомозы Тропические гельминтозы, вызываемые дигенетическими трематодами, с поражением мочеполовой системы, кишечника, печени, легких, реже других органов. Различают следующие формы шистосомозов: мочеполовой, кишечный, японский, интеркалатный. Заражение во всех случаях перкутанное. Диагностика базируется на клинико-эпидемиологических данных. Географический анамнез – посещение стран Азии, Африки, Центральной и Южной Америки, купание в местных водоемах, участие в рыбной ловле, использование воды из открытых водоемов для питья и других бытовых целей. Лабораторное подтверждение. При мочеполовом шистосомозе – обнаружение яиц паразита в моче после осаждения и центрифугирования. Кроме этого применяется цистоскопия. При всех формах кишечного шистосомоза – обнаружение яиц паразита в кале методом осаждения после разведения и просмотра мазка по Като. Эндоскопия – ректороманоскопия, колоноскопия. При шистосомозах клинические проявления, связанные с внедрением возбудителей в кожу, бывают выражены по-разному и называются "зудом купальщика". При хроническом мочеполовом шистосомозе наблюдается терминальная гематурия, боли в надлобковой области и промежности, явления цистита. В поздней стадии – гидронефроз, пиелонефроз. При кишечном шистосомозе симптомы со стороны кишечника: энтероколитический синдром, коликообразные боли. Гепатоспленомегалия. При японском шистосомозе клиника во многом является схожей с кишечным. При кишечном интеркалатном также аналогичен кишечному шистосомозу. Парагонимоз Заболевание, вызываемое паразитированием у человека в легких легочной трематоды. Важное диагностическое значение имеет географический анамнез: заболевание распространено в Корее, Китае, Японии, Южной Америке, в Российской Федерации встречается в Приморском крае и в Приамурье. Причиной заражения является употребление в пищу на указанных территориях крабов и раков в сыром виде. Клиника характеризуется симптомокомплексом поражения бронхолегочной системы: кашель с мокротой, иногда с наличием прожилок крови, боли за грудиной, пневмония, абсцессы, нередко томографическое исследование легких. Обнаружение яиц парагонимуса в мокроте после обработки 0,5% раствором едкого натра, встряхивания, центрифугирования и просмотра мазка по Като. Нанофиетоз Заболевание, возникающее при паразитировании в кишечнике человека трематоды нанофиетус. Так же, как при парагонимозе, важное диагностическое значение имеет географический анамнез: распространен в Северной Америке, на Дальнем Востоке (Приморский край, Сахалин). Причина заражения – употребление в пищу плохо проваренной или сырой рыбы лососевых пород. Клиника – энтерит, боли в животе, поносы, запоры. Лабораторное подтверждение – обнаружение яиц в фекалиях методом флотации, мазком по Като. Диагностика лямблиоза Лямблиоз – болезнь, вызываемая паразитированием в тонком кишечнике одноклеточных паразитов лямблий или жиардий. Анамнез больного имеет сходство с таковым у больных с кишечными инфекциями. Клиника разнообразна, особенно у детей. Расстройство стула. Энтероколитический синдром. Схваткообразные боли в области живота. Слабость. Понижение аппетита. Нередкими являются высыпания на теле, зуд, выпадение волос, неврологическая симптоматика. В крови умеренная эозинофилия, иногда снижение уровня гемоглобина. Патологическая копрограмма. Лабораторная диагностика. Копроовоскопия нативного мазка. Мазок, окрашенный раствором Люголя На предметное стекло наносят 1-2 капли изотонического раствора в двух местах или можно нанести 2 капли раствора Люголя. Деревянной палочкой набирают фекалии из разных частей пробы и растирают в капле физраствора или сразу в капле Люголя до получения равномерной эмульсии. В каждый препарат, приготовленный на физрастворе, пипеткой вносят по капле раствора Люголя. Накрывают покровным стеклом и микроскопируют (при увеличении 10 х 40, балантидии хорошо видны и при 10 х 8) под покровным стеклом. Цисты хорошо видны, окрашиваются в золотисто-коричневый цвет. Вегетативных форм в этих препаратах обнаружить не удается, т.к. раствор Люголя "убивает" их. Исследование дуоденального содержимого (порция А) Без центрифугирования (нативно). С центрифугированим (центрифугируя не менее 20). Осадок микроскопируют без покровного стекла (увеличение 40 х 10). Метод консервирования фекалий (на цисты простейших) В случае, когда немедленное исследование материала невозможно, применяют его консервацию. Принцип обнаружения простейших кишечника в фекалиях методом консервации основан на том, что консервирующий раствор вызывает фиксацию простейших с длительным сохранением неизмененными основных морфологических признаков всех стадий, особенно цист (амеб, лямблий, балантидий). Чаще используются следующие консерванты: Консервант Сафаралиева: сульфат цинка – 1,65 г; формалин концентрированный – 10 мг; фенол кристал. – 2,5 г; уксусная кислота конц. – 5 мл; метиленовый синий – 0,2 г; вода дистиллированная – 100 мл. Фенол предварительно растапливают на водяной бане. Простейшие окрашиваются в синий цвет. Консервант Турдыева: водяной раствор нитрата натрия 0,2% - 80 мл; раствор Люголя – 8 мл; формалин концентрированный – 10 мл; глицерин – 2 мл; уксусная кислота конц. – 5 капель. Простейшие окрашиваются в золотисто-коричневый цвет. Консервант разливают в пенициллиновые флаконы до половины объема. Исследуемый материал от каждого больного немедленно после взятия переносят во флакон в соотношении 1:3 (одна часть фекалий, 3 части консерванта). Деревянной палочкой перемешивают, закрывают резиновой пробкой и закрепляют липкой лентой. На каждом флаконе должна быть этикетка или порядковый номер. |