микроба. Задание с какой целью доставлен исследуемый материал в лабораторию Ответ
 Скачать 1.63 Mb.
|
|
ЗАДАЧА214 в областную детскую инфекционную больницу направлен Ребенок С. 5 лет для уточнения предварительного диагноза : «полномиелит». Из анамнеза было установлено, что ребенок заболел 10 дней назад. В начале лечения в отделении центральной районной больницы с днагиозом «ОР3? Грипп? Вирусологические исследования для подтверждения диагноза респираторной инфекции в ЦРБ не проводились, поэтому лечение назначалось симптоматическое. Когда появились первые симптомы пареза конечностей, невролог был приглашен на консультацию, и он заподозрил полиомиелит. В ходе беседы с родителями болезни ребенка нейроватолог выяснил, что ребенку не делали прививок от полиомиелита, и что он не посещает детский коллектив. Вопросы 1 объясните как могли развиться параличи у этого ребёнка? 2 какие методы можно использовать для подтверждения диагноза в данном случае? 3 какой вакциной должны были привить ребёнка и в какие сроки? Ответ 1. Вирус попав в организм ребёнка сначала размножается в клетках слизистой оболочки носоглотки, кишечника и отсюда с током крови переносится в спинной мозг. Так как полновирус обладает выраженным нейротропизмом он вызовет дегенеративно-воспалительный процесс в передних рогах спинного мозга и сером веществе подкорки. Следствием этого и являются развитие параличей у ребёнка 2. Учитывая что ребёнок заболел 10 дней назад наиболее целесообразно для подтверждения диагноза использовать серологический метод. Парные сыворотки необходимо исследовать по РСК или нейтрализации с антигеннами полиовируса (1,2,3 типов ), если во второй сыворотке титр антител увеличится по сравнению с первой сывороткой , можно поставить диагноз полиомиелит 3. Ребёнка должны были вакцинировать согласно календарю прививок в первые 3 года жизни. Прививки проводят ежегодно тривакциной, троекратно с трёхмесячными интервалами. Для этой вакцинации используется полиомиелитная пероральная живая вакцина (жвс) Сейбина типов 1,2,3 с целью повышения термоустойчивости к вакцине добавляют раствор химически чистого хлорида магния . Вакцина выпускается в жидком виде и в форме конфет драже. Она может быть изготовлена в виде моновакцины и тривакцины т.е смеси вирусов 3х типов ЗАДАЧА 215 Среди учащихся 1-3 классов средней школы населенного пункта Н. Появились случаи клинически протекающие как вирусный гепатит. Клиническая картина характеризовалась острым началом заболевания, короткими преджелтушным диспептическим периодом, появлением желтушности склер, слизистых оболочек и кожных покровов Улучшение самочувствия совпало с наступлением желтушного периода. При эпидемиологическом обследовании очагов инфекции было установлено, что за 15-45 дней до появления признаков болезни все заболевшие дети пили воду из источника, вода которого не обезораживалась. Каких либо медицинских манипуляций связанных с повреждение кожных покровов в последние годы заболевшим не проводилось Вопросы 1 о какой форме вирусного отрастила можно думать у заболевших детей учитывая данные эпидемиологического обследования? 2. Какую специфическую профилактику необходимо провести детям которы контактировали с заболевшими учащимися? 3. Какие обследования необходимо провести для уточнения диагноза? Ответы 1 у заболевших можно заподозрить гепатит А 2 для профилактики контактным ввести иммуноглобулин, полученный из смеси донорских сывороток крови взрослых людей 3 для уточнения диагноза используют иммунологические методы как для выявления антигена вируса так и антител относящихся к IgM, lgG А) иммунноферментные реакции Б)радиоиммуный метод на твердофазной основе В) РНГА Г)иммунную электронную микроскопию Задача 216 При серологическом обследовании группы венерически больных, лечившихся в кожно-венерологическом диспансере в течение последних 5 лет, использовалась непрямая венерологическая реакция для выявления СПИД В одном случае реакция оказалась положительная. В этой связи Вам поступило указание собрать образцы крови у больных, находящихся на лечении в стационаре и отослать их для уточнения полученных результатов в центральную лабораторию Вопросы 1 сколько образцов крови необходимо взять у обследуемых для окончательной постановки диагноза? 2. Как долженствующие быть приготовлены образцы крови в течении какого времени после взятия они должны быть отправлены для исследования? Ответы 1. При выявлении подозрительного на СПИД больного для окончательной постановки диагноза необходимо послать в Институт иммунологии МЗСССР два образца крови 2.1 Образцы крови должны быть приготовлены следующим образом: В термитную пробирку содержащую 0.7 мл раствора гепарина поместили 5мл крови. Тщательно перемешать Раствор гепарина приготовить следующим образом: в стерильных условиях 12 мл ампулированного раствора гепарина содержащего , 5 тыс. ед. 1 мл. добавить 24 мл стерильного физиологического раствора Приготовленный раствор гепарина можно хранить в холодильнике в течении 10 дней при температуре + 4(° С). Полученные образцы гепаринизированной крови необходимо доставить в институт иммунологии не позднее, чем через 6-8 часов после взятия крови кровь должна доставлять в охлажденном +4-+12 С, но не в замороженном состоянии. Транспортировку крови желательно производить в сумке холодильнике. 2.2 в случае невозможно получения указанных выше образцов крови получают сыворотку без применения консервантов . Полученную сыворотку разлить в 3-4 ампулы , заморозить при 20• С и направить в институт иммунологии . Транспортировку сыворотки необходимо осуществлять в термосах сохраняющих заданную температуру при невозможности экстренной транспортировки образцы сыворотки следует хранить замороженными при -20*С ЗАДАНИЕ 217 Инженер М., 37 лет, обратился к врачу с жалобами на постепенное в течение недели повышение температуры, частый жидкий стул, потерю веса. Появились отеки нижних конечностей, увеличились лимфатические узлы (лимфоденопатия), ночная потливость. При расспросе больного выяснилось, что ранее, кроме ОP3, ничем не болел. 5 месяев назад вернулся из служебной командировки в Лос-Анжелес (CША). В этом городе при переезде в автомобиле из одного района в другой получил травму. 8 дней находился в госпитале. После выздоровления и выполнения командировочного задания возвратился на Родину. Оценивая анамиез и клиническую картину, врач заподозрил у больного СПИД (синдром приобретенного иммунодефицита). ЗАДАНИЯ 1. Каким образом можно подтвердить или опровергнуть предварительный диагноз? 2. Сколько проб крови необходимо направить для исследования в институт иммунологии или лабораторию, где осуществляется днагностика СПИД? 3. Какие исследования должны быть проведены для диагностики СПИД? 4. Какие результаты проведённых исследований дадут основание утверждать, что у больного СПИД? 5. Как мог заразиться инженер М.? Он - не гомосексуалист, не наркоман. Какие-либо интимные связи вне своей семьи категорически отвергает как в США, так и на Родине. 6. Какие препараты целесообразно применить, если предполагаемый диагноз подтвердится? ЭТАЛОНЫ ОТВЕТОВ 1.1. Для подтверждения или опровержения диагноза «СПИД» используют иммунологические методы диагностики с целью обнаружения в крови людей антител к вирусу СПИД. 1.2. Наиболее широко используется иммуноферментный метод. 2. Для проведения исследования направляют в лабораторию 5 мл крови, взятой из локтевой вены шприцем одноразового пользовання. 3. Иммуноферментный или радиоимунный анализ с использованием концентрированного очищенного антигена вируса СпиД 4. Обнаружение в сыворотке крови обследуемых лиц специфических aнтител к вирусу СПИД. 5. Заражение СПИД происходит при попадании вируса в кровь. Учитывая, что инженеру М. могли переливать кровь для восполнения кровопотери после травмы, вирус мог быть внесен с переливаемым образцом крови, если донор предварительно не обследован. 6. Ему можно назначить рибоверин, тимолин, Т-активин, 7 -интерферон, литерлейкины. ЗАДАНИЕ 218 Заболеваемость СПИД в мире, как известно, стремительно нарастает. Предварительные данные обследований, проведенные в СССР, показали, что СПИД в нашей стране пока не имеет широкого распространения. О ранних симптомах этого заболевания должно знать все население и особенно медицинские работники. Вас пригласили на совецание средних медицинских работников с просьбой ответить на ряд вопросов. ЗАДАНИЯ 1. Какне ранние симитомы заболевания характерны для СПИД? 2. Какие результаты иммунологических исследований позволят подтвердить или отвергнуть диагноз СПИД? ЭТАЛОНЫ ОТВЕТОВ 1. Ранними симптомами болезни могут оказаться: увеличение лимфатических узлов; которое не исчезает долгое время; общее недомогание: длительная повышенная тем- пература. Проявлением заболевания может быть понос, потливость по ночам, падение веса и пневмония, которая протекает атипично, расстройства психики. 2. Для подтверждения диагноза шприцем разового пользования из вены берут кровь. Пробирки доставляются в лабораторию, где из кровя получают сыворотку. Автоматической пипеткой набирают строго отмеренную порцию сыворотки крови и помещают ее в ячейки специального полистиролового планшета. На поверхности лунок этого планшета сорбирован концентрированный очищенный антиген вируса СПИД. Если в сыворотке крови человека есть антитела, то на поверхности лунок образуется комплекс антиген-антитело. После промывания планшетов в лунки вносят моченные пероксидазой или щелочной фосфатазой антитела против глобулинов человека. Затем вновь планшет промывают, добавляют субстрат для выявления фермента. В положителыных случаях в лунках появляются бурое окрашивание. В отрицателытых анализах субстрат бесцветен. Сравнив цвет испытуемого образца с контрольными, приходят к определенному заключению о наличии антител в крови к вирусу СПИД и, следовательно, соответствующего заболевания. ЗАДАНИЕ N 219 В районе дислокации ССО в связи с отсутствием стационарного жилья необходимо развернуть палаточный городок. По указанию главного врача СЭС перед эпидотделом поставлена задача: представить заключение о степени хозяйственно-бытового загрязнения территории, на которой будет развернут палаточный городок. ЗАДАНИЯ 1. С какой целью и для чего поставлена вышеуказанная задача? 2. Какие санитарно-показательные микроорганизмы необходимо выявлять в объектах внешней среды, почве? 3. Требования, предъявляемые к санитарно-показательным микроорганизмам? 4. Какой материал подлежит исследованию в баклаборатории, правила его взятия, этапы исследования? 5. Какими могут быть результаты исследования и как их необходимо трактовать? ЭТАЛОНЫ ОТВЕТОВ 1. Для определения санитарно-эпидемиологического состояния почвенного покрова, выбора источника водоснабжения, мест водозабора при размещении ССО. 2. Санитарно-показательные микроорганизмы при исследовании почвы: кишечная палочка, анаэробы, протей, термофилы. 3.1. Они должны постоянно и в значительно больших количествах (чем патогенные микробы) содержаться в выделениях человека и теплокровных животных. 3.2. Сроки сохранения их жизнеспособности во внешией среде должны совпадать или превышать сроки сохранения выделяющихся этими же путями патогенных микробов 3.3. Не должны интенсивно размножаться во внешней среде. 3.4. Должны легко обнаруживаться, идентифицироваться с помощью простых, несложных методов и не иметь во внешней среде сапрофитов, дифференциация с которыми была бы сложна. 3.5. Должны быть свободны от ингибирующего действия сапрофитов. 3.6. Не должны обладать рано наступающей и далеко идущей изменчивостью. 4. Почва. На обследуемой территории до 1000 м2 выделяют два участка площадью 25 м2. Один участок вблизи источника загрязвения (свалка, мусорный ящик), другой вдали - контроль. С каждого участка составляют средний образец из отдельных проб, взятых в 5 точках по диагонали или в 4 точках по краям и одной в цетре, стерильным инструментом - нож. Во время отбора проб удаляют поверхностный слой почвы толщиной 1-2 см, так как исследование его не отражает истинной картины микробного пейзажа в силу действия инсоляции, подсушивания и т. д. При исследовании поверхностных слоев почвы образцы берут на глубине до 20 см, для установления эффективности обезвреживания нечистот - на глубине 25—150 см. Масса образца - 200-300 гр., а смешанного - 1 кг. Пробы переносят в стерильные банки с ватно-марлевой пробкой. К банке приклеивают этикетку с датой, номером взятой пробы. Банки немедленно доставляют в лабораторию. Если нет возможности приступить к обработке почвы в тот же день, допускается хранение проб почвы в холодильнике не более 24 час. при 1-2°С. Санитарно-бактернологический анализ почвы включает: определение общего числа в 1 г почвы; установление титра Е. сoli; oпределепие титра анаэробов (CL. рeriringens); титра Рroteus; количество термофилов. При наличии эпидемиологических показаний производят исследование почвы на зараженность бактериями тифопаратифозной группы, клостридиями столбняка, ботулизма, сибирской язвы и др. Методика определения микробного чнела почвы аналогична той, которую применяют при исследовании воды. Определенне коли-титра почвы производят методом бродильных проб с использованием среды Кесслер или среды ТТX (трифенилтетразолхлорид), методом мембранных фильтров. Метод бродильных проб с использованием среды Кесслер: Из основной извеси почвы 1:10 готовят разведения: для чистых почв - 1:10, 1:100, 1:1000, 1:10000: для загрязненных - от 1:1000 до 1:1000000. Из приготовленных разведений по 1 мл засевают в среду Кесслер, для определения коли-титра и пробирки со средой Тукаева для определения перфрингенс-титра по схеме 1: При определении перфрингене-титра для освобождения от посторонней неспороносной микрофлоры посевы прогревают в водяной бане при 80°С 15 мин., выращивают при 43°С 10-20 час. Посевы со средой Кесслер культивируют при 48°С 48 час. Коли-титр почвы соответетвует забродившей пробе в пробирке с посевом наибольшего разведения почвенной суспензии в среде Кесслер. Из забродивших проб на среде Кесслер производят высев петлей на среду Эндо. Инкубация в термостате 17-18 час. Производят учет измененнй роста на молочных средах Тукаева. Из положительных проб готовят мазки, окрашивают по Граму, микроскопируют. При наличии в мазках грамположительных палочек рассчитывают перфрингенс- титр почвы. Изучают посевы на среде Эндо. Отбирают колонии, типичные для бактерий кишечной группы, готовят мазки, окрашивают по Граму, микроскопируют. При обнаружении трамотрицательных палочек делают пересев на среду Эйкмана (2-я бродильная проба), посевы помещают в термостат. Проводят учет результатов 2-й бродильной пробы, определяют коли-титр почвы. Сопоставление величин коли-титра перфрин-генс-титра почвы. Схема санитарной оценки почвы по коли-титру и перфрингенс-титру: Характеристика загрязнения почвы по результатам комплексного определения санитарно-показательных микробов ЗАДАНИЕ 220 Среди группы туристов (25 человек), которые использовали для питья воду из озера, у 7 человек через 2 дня появились симптомы острого гастроэнтерита. Для санитарно-бактериологического анализа была взята вода данного источника и доставлена в баклабораторию. Необходимо определить соответствие показателей качества данного образца требованиям, предъявляемым к воде открытых водоемов. ЗАДАНИЯ 1. Для чего веобходнмо провести санитарно-бактериологический контроль воды из озера? 2. Какие показатели, характеризующие чистоту воды, необходимо определить? 3. Для каких заболеваний бактериальной и вирусной природы фактором распространения может служить вода? 4. Какие мероприятия необходимо провести с целью предотвращения последующих заболеваний среди лиц, осуществляющих турпоходы по данному маршруту? ЭТАЛОНЫ ОТВЕТОВ 1. Необходимость в санитарно-микробиологическом исследовании воды открытых водоемов возникает при выборе мест водозабора, отводе участков для пляжей, изучении эффективиости естественного самоочищения или искусственного обеззараживания воды, а также в связи с неблагополучной эпидемической обстановкой. 2.1. Определение общего количества бактерий в одном миллилитре исследуемой воды - микробное чнсло. 2.2. Определение коли-титра и коли-индекса. 2.3. При коли-индексе выше 10000 проводят дополиительные бактериологические исследования на показатели свежего фекального загрязнения, патогенные энтеробактерин и энтеровирусы. 3. Дизентерия, брюшной тиф. паратиф А и В, холера, заболевания, вызываемые энтеропатогенными кишечными налочками, полиомиелит. Коксаки, ЭКХО, гепатит А и др. 4. Разъяснить туристам о сложившейся эпидобстановке. Запретить использование воды данного водоема для питья, приготовления пищи. Рекомендовать туристам брать с собой запас воды. Провести искусственное обеззараживание воды и последующие контрольные бактериологические исследования ее эффективности ЗАДАНИЕ 221 По эпидпоказаниям для санитарно-бактериологического анализа в лабораторию направлена проба воды открытого водоема. Необходимо определить соответствие данного образца воды требованиям, предъявляемым к воде открытых водоемов. ЗАДАНИЯ 1. Для чего необходимо провести санитарно-бактериологический контроль воды? 2. Укажите санитарио- бактериологические показатели, характеризующие чистоту воды и методы их определения. ЭТАЛОНЫ ОТВЕТОВ 1. Санитарно-микробиологическое исследование воды производится при выборе источника централизованного хозяйственно-питьевого водоснабжения, изучении эффективности естественного самоочищения или искусственного обезвреживания воды, при систематическом санитарном контроле и по эпидемическим показаниям. 2.1. О степени микробной обсемененности воды судят по микробному числу - количеству Е. Coli, обнаруженных в 1 мл воды; бродильному титру-наименьший объем воды, при засеве которого на питательную среду с глюкозой обнаруживается газообразование; коли-титру-наименьший объем воды, в котором обнаруживаются Е. Сoli; коли-индексу-количество кишечных палочек в 1л воды. Согласно требованиям ГОСТа определяют содержание в 1 мл исследуемой воды мезофильных анаэробов и факультативных анаэробов, способных при 37°С в течение суток на МПА образовывать колонии, видимые невооружённым глазом. Из каждой пробы делают высев не менее двух различных объемов. При исследовании чистых вод засевают 1-0,1 мл, более загрязненных вод-0,01—0,001 мл. Указанные объемы вносят в 2 чашки Петри и заливают тонким слоем предварительно растопленного и остуженного до 45°С МПА. Перемешивают, дают застыть, посевы выращивают в течение суток при 37°С. Производится подсчет колоний, выросших на поверхности агара, и в глубине с помощью лупы, дающей увеличение в 2-5 раз. Оценивают только те разведения, при посеве которых выросло от 30 до 300 колоний. Бродильный метод. 1-й день. Посев воды в глюкозо-пептонную среду. Объемы 100 мл, 10 мл засевают в концентрированную среду, дозы по 1,0 и 0,1 мл засевают в пробирки со средой нормальной концентрации. Посевы инкубируют 24 часа при 37°С. 2-й день. Определение бродилького титра на глюкозо-пептонной воде по помутиению и образованию кислоты и газа во флаконах и пробирках. Отсутствие помутнения и газа позволяет дать отрицательный ответ и закончить исследование через 24 часа. Высев из забродивших проб на среду Эндо. Чашки инкубируют в термостате 16- 18 часов при 37°С. 3-й день. Осмотр и бактериоскопия выросших на среде Эпдо колоний. Постановка оксидазного теста. Пересев грамоотрицательных оксидазоотрицательных палочек в полужидкую среду с глюкозой. Инкубация при 37°С 4-5часов. 4-й день. Учет роста в полужидкой среде с глюкозой. При наличии кислоты и газа дают положительный ответ, при отсутствии- отрицательный. При наличии только кислоты оставляют на 24 часа. При отсутствии газа через 24 часа дают окончательный отрицательный результат. По таблицам определяют коли-титр, коли- индекс. 2.2. Применяется метод мембранных фильтров. При исследовавии воды неизвестного качества фильтруется 3- 4 дясятикратных объема (например, 3,03 30,0; 100; 200). Когда через фильтр пропускают определенный объём воды, его вынимают, стерильным пинцетом переносят на чашки со средой Эндо так, чтобы он прилегал к среде нижней стороной, чашки помещают в термостат при 37°С на 24 часа, учет-на 2 сутки. При наличии бактерий группы кишечной палочки вычисляют коли-индекс, учитывая объем анализируемой воды. |