практические навыки по микробиологии. 1. микроскопические методы исследования цели задачи виды микроскопии и их применение в микробиологической диагностике
 Скачать 1.02 Mb.
|
14.Методы выделения чистых культур аэробов.Процесс выделения чистой культуры можно разделить на несколько этапов. Первый этап. Из исследуемого материала готовят мазок, окрашивают его по Граму или другим методом и микрсгскопиру-ют. Для посева исследуемый материал в случае необходимости разводят в пробирке со стерильным изотоническим раствором хлорида натрия. Одну каплю приготовленного разведения наносят петлей на поверхность питательного агара в чашку Петри и тщательно втирают шпателем в среду, равномерно распределяя материал по всей ее поверхности. После посева чашку переворачивают дном кверху, подписывают и помещают в термостат при температуре 37 °С на 18—24 ч. Второй этап. Просматривают чашки и изучают изолированные колонии, обращая внимание на их форму, величину, консистенцию и другие признаки. Для определения морфологии клеток и их тинкториальных свойств из части исследуемой колонии готовят мазок, окрашивают по Граму и микроскопируют. Для выделения и накопления чистой культуры одну изолированную колонию или несколько различных изолированных колоний пересевают в отдельные пробирки со скошенным агаром или какой-либо другой питательной средой. Для этого часть колонии снимают петлей, не задевая соседние колонии. Третий этап: Отмечают характер роста выделенной чистой культуры. Визуально чистая культура характеризуется однородным ростом. При микроскопическом исследовании окрашенного мазка, приготовленного из такой культуры, в нем обнаруживаются морфологически и тинкториально однородные клетки. Очнако в случае выраженного полиморфизма, присущего некоторым видам бактерий, в мазках из чистой культуры наряду с типичными встречаются и другие формы клеток. 1. Методы механического разобщения основаны на разъединении микробов путем последовательного растирания исследуемого материала по поверхности агара. а) Метод Пастера – имеет историческое значение, предусматривает последовательное разведение исследуемого материала в жидкой питательной среде методом переката б) Метод Коха – метод пластинчатых разводок – основан на последовательном разведении исследуемого материала мясо-пептонным агаром с последующей разливкой пробирок с разведенным материалом в чашки Петри в) Метод Дригальского – при посеве материала, обильно обсемененного микрофлорой, используют 2–3 чашки для последовательного посева шпателем. г) Посев петлей параллельными штрихами. 2. Биологические методы основаны на биологических свойствах возбудителей. а) Биологический – заражение высокочувствительных животных, где микробы быстро размножаются и накапливаются. В одних случаях, этот метод является единственным, позволяющим выделить культуру возбудителя от больного человека (например, при туляремии),в других случаях – он более чувствителен (например, выделение пневмококка на белых мышах или возбудителя туберкулеза на морских свинках). б) Химический – основан на кислотоустойчивости микобактерий. Для освобождения материала от сопутствующей флоры, его обрабатывают раствором кислоты. Вырастут только туберкулезные палочки, так как кислотоподатливые микробы погибли под действием кислоты. в) Физический метод основан на устойчивости спор к нагреванию. Для выделения культуры спорообразующих бактерий из смеси материал прогревают при 80°С и засевают на питательную среду. Вырастут только споровые бактерии, так как споры их остались живыми и дали рос 15. механическая стерилизация: фильтрование, виды фильтров назначение и применение Этот метод состоит в отделении микробов от жидкости с помощью стерильных микропористых фильтров. Проводится в асептических условиях. В качестве микропористого фильтрующего материала используют каолин, фарфор, бумажно-асбестовую массу, инфузорную землю, коллодий и другие пористые материалы, а также стекло. Микробы задерживаются при фильтрации не только вследствие того, что они имеют большую величину по сравнению с мельчайшими порами фильтра. В порах фильтра задерживаются и микробы, имеющие относительно меньшую величину. В настоящее время общепринятым является объяснение механизма фильтрации главным образом адсорбцией микробов, происходящей в порах фильтрующих материалов, которые в большинстве случаев заряжены отрицательно. Фильтры из микропористых материалов изготовляют различной конструкции и формы. Фильтры из фарфора или каолина имеют вид полых цилиндров (полых свечей); один конец у них закрыт, а в другом имеется отверстие. Изготовляют их с диаметром пор от 1 до 3 мк. Из таких фильтров наиболее часто применяют «Бактериальный фильтр ГИКИ» (Государственного института керамических изделий) типа Л-5 и Ф-5, отличающиеся величиной пор. Жидкость, предназначенную для фильтрации, равномерно наливают внутрь фильтра и она, просачиваясь сквозь его стенки, вытекает в стерильный сосуд, или, наоборот, фильтр помещают в сосуд с фильтруемой жидкостью. В этом случае жидкость поступает сквозь стенки внутрь фильтра и оттуда вытекает через имеющееся в фильтре отверстие в стерильный сосуд. Фильтрация производится при разрежении, создаваемом в аптечных условиях с помощью водоструйного насоса. Стеклянные микропористые фильтры изготовляют из сваренных зерен стекла с диаметром пор от 6 до 10 мк. Они имеют вид пластинок или дисков, закрепленных в стеклянных сосудах различной формы. Для придания большей механической прочности и предохранения от загрязнения крупными посторонними частицами стеклянные фильтры иногда изготовляют с дополнительной пластинкой. Стеклянные фильтры по сравнению с другими микропористыми фильтрами более удобны для применения в аптечной практике. Все фильтры предварительно должны быть проверены на отсутствие в них повреждений и вместе с приемником и другими соединительными частями подвергнуты стерилизации. После окончания фильтрации фидьтры должны быть тщательно очищены. Бумажно-асбестовые фильтры (СФ) в виде пластин применяют в качестве фильтрующей поверхности в фильтре Сальникова, который представляет собой металлическую раму, зажатую между двумя сферическими дисками. Кроме обычных микропористых бактериальных фильтров, все более широкое применение находят ультрафильтры, изготовляемые из коллодия и других материалов, в которых можно регулировать величину пор. Они задерживают все частицы, величиной от 0,001 до 1 мк. Благодаря большой пористости фильтрация в них протекает быстрее, чем в других микропористых фильтрах. Механический метод стерилизации с помощью микропористых фильтров имеет некоторые преимущества по сравнению с методами тепловой стерилизации, когда раствор подвергается воздействию высокой температуры. Для многих растворов термолабильных веществ он по существу является вообще единственным доступным методом стерилизации. Однако ему присущи и крупные недостатки, сильно ограничивающие область его применения. В микропористых фильтрах возможно образование трещин, не видимых невооруженным глазом, что может привести к пойаданию микроорганизмов в профильтрованный раствор. В аптечных же условиях, где проверка на стерильность каждого раствора практически невозможна, необходима полная уверенность в надежности метода стерилизации. При применении «бумажно-асбестовых фильтров возможно загрязнение раствора асбестовыми волокнами. Вследствие этого к фильтрации сквозь микропористые фильтры в аптеках прибегают главным образом при приготовлении растворов термолабильных веществ, когда не могут быть применены другие методы стерилизации, а также как к подсобному методу. 16 дезинфекция: определение, виды, классификация химических веществ Дезинфекция – это совокупность химических, физических и механических способов полного уничтожения вегетативных и споровых форм определенных групп патогенных для человека микроорганизмов, являющихся источниками возникновения сибирской язвы, холеры, бруцеллеза, ряда кишечных и вирусных инфекций. Существует профилактическая и очаговая дезинфекция. Профилактическая дезинфекция осуществляется с целью предупреждения внутрибольничных инфекций. Раз личают текущую дезинфекцию и генеральную уборку по мещений стационара. Очаговая дезинфекция делится на очаговую теку щую дезинфекцию, которая осуществляется в очаге ин фекции, у постели инфекционного больного, проводится многократно, и очаговую заключительную дезинфекцию, которая проводится однократно после изоляции, госпита лизации в инфекционное отделение, выздоровления или смерти больного с целью полного освобождения инфекци онного очага от возбудителей заболевания. |