Микра. 1 Роль микробиологии в современной медицине. Значение микробиологии в деятельности провизора

• Название: 1 Роль микробиологии в современной медицине. Значение микробиологии в деятельности провизора
• Дата: 20.01.2021
• Размер: 218.5 Kb.
• Имя файла: Микра.docx
• Тип: Документы; #169793
• страница: 11 из 11

Воду для инъекций получают из воды питьевой методами дистилляции, ионного обмена, обратного осмоса и комбинацией этих методов. Дистилляцию разделяют на одноколоночную, многоколоночную и термокомпрессионную. К допустимым методам очистки воды также относят дегазацию, электродеионизацию, деионизацию, ультрафильтрацию, умягчение (проводят методами натрий-катионирования и нанофильтрации, применяется для неинъекционной воды). Для изготовления неинъекционных стерильных и несте­рильных лекарственных средств используют очищенную воду, которая может быть получена дистилляцией, обратным осмосом, ионным обменом и другими разрешенными способами. Микробиологическая чистота очи­щенной воды должна соответствовать требованиям на питьевую воду, до­пускается содержание в ней не более 100 микроорганизмов в 1 мл при от­сутствии бактерий семейства Enterobacteriaceae, P.aeruginosa, S. aureus.

Для приготовления стерильных неинъекционных лекарственных средств, изготовляемых асептически, воду необходимо стерилизовать.

Для изготовления растворов для инъекций используют воду, которая должна выдерживать испытания на очищенную воду и апирогенность.

Получение и хранение очищенной воды должно производиться в спе­циально оборудованном для этой цели помещении. Очищенную воду используют свежеприготовленной или хранят в за­крытых емкостях, изготовленных из материалов, не изменяющих свойства воды и защищающих ее от инородных частиц и микробиологических за­грязнений не более 3 сут.

Получение воды для инъекций должно осуществляться в помещении дистилляционной асептического блока, где категорически запрещается выполнять какие-либо работы, не связанные с перегонкой воды.

Ежедневно перед началом перегонки необходи­мо в течение 10—15 мин пропускать через дистиллятор пар, не включая холодильник. Первые порции дистиллированной воды через 10—15 мин сливаются, и только после этого начинается сбор воды. Вода собирается в чистые простерилизованные или обработанные паром сборники промыш­ленного производства и в порядке исключения — в стеклянные баллоны с четкой надписью "вода дистиллированная", "вода для инъекций". Сборни­ки нумеруются.

Стеклянные сборники плотно закрываются пробками с двумя отвер­стиями: одно для трубки, по которой поступает вода, другое для стеклян­ной трубки, в которую вставляется тампон из стерильной ваты (меняется ежедневно). Сборники устанавливаются на баллоноопрокидыватели .

Подачу воды на рабочие места осуществляют по трубопроводам или в баллонах, трубопроводы должны быть изготовлены из материалов, разре­шенных МЗ РФ к применению в медицине.

Дезинфекционная обработка транспортных путей для подачи дистил­лированной и апирогеннои воды осуществляется перед сборкой и далее 1 раз в 14 дней. Способ обработки зависит от материала трубопроводов (металл, стекло, полимеры).

В соответствии с санитарными требованиями к изготовлению лекар­ственных средств в асептических условиях и не стерильных лекарствен­ных форм сотрудники должны в установленном порядке обрабатывать ру­ки, следить за выполнением правил эксплуатации бактерицидных облуча­телей, осуществлять контроль за режимом и правильным использованием средств дезинфекции и стерилизации аптечной посуды, укупорочных средств и других объектов.

Это относится, в частности, к работам, связанным с исследованиями пирогенных растворов и дистиллированной воды на содержание, как бак­терий, так и частиц клеточно-тканевой природы.

Фармацевты при изготовлении инъекционных растворов должны ра­ботать в стерильных халатах и головных уборах, соблюдая правила личной гигиены и обрабатывая перед работой руки в соответствии с инст­рукцией.

Окна асептической должны быть плотно закрыты, щели наглухо за­деланы. Воздухообмены должны быть с преобладанием притока над вы­тяжкой для того, чтобы создать подпор наружному воздуху. Подаваемый воздух должен проходить через фильтры, улавливающие пыль и микроорганизмы.

В последние годы выпускаются специальные столы, в которые вмон­тированы устройства, подающие на рабочее место чистый воздух (стол монтажный пылезащитный СМП-1). Фильтрующая среда, которой снаб­жен СМП-1, позволяет получить поток стерильного воздуха.

Соблюдение санитарного режима должно способствовать содержа­нию микроорганизмов в лекарственных формах в количествах, соответст­вующих требованиям, предъявляемым к микробиологической чистоте ле­карственных средств .

Нормативные показатели допустимого содержания микроорганизмов в готовых лекарствах приведены в таблице № 4

Контроль за пирогенностью

Среди методов контроля пирогенности растворов и дистиллированной воды хорошо зарекомендовал себя ме­тод проведения биопроб на животных (кроликах), который может быть реализован в условиях значительного по масштабам производства, имею­щего виварий, например на фармацевтических фабриках. К недостаткам метода относят значительную разницу действующих концентраций пиро­генов для животных и человека (от 10 до 50 раз).

В зарубежной практике для контроля пирогенности используется микробиологический метод — подсчет общего количества микроорганиз­мов в исследуемых образцах растворов до их стерилизации. К сожалению, он не всегда информативен, поскольку как бактериальные, так и клеточно-тканевые пирогены достаточно термостабильны. Следует иметь в виду, что и продукты их распада также сохраняют пирогенные свойства.

Отме­тим, что, например, в США применяется так называемый лимулус-тест, т. е. изучение и измерение реакций на пирогены со стороны амебных кле­ток Limulus poliphemus.

Оценка пирогенности растворов с помощью физико-химических ме­тодов (полярографические, оптические, люминесцентные) имеет опреде­ленные ограничения, обусловленные необходимостью определения пиро­генов в весьма малых концентрациях.

Наиболее доступным и информативным представляется метод, осно­ванный на реакции образования геля с 3 % раствором КОН.

Ограниченный спектр методов контроля пирогенности обусловливает необходимость строгого соблюдения регламента технологических процес­сов аптечных процедур и санитарного режима — мероприятий, обеспечи­вающих ограничение возможности попадания микроорганизмов в изго­товляемое лекарство.

Известно, что основной причиной загрязнения дистиллированной во­ды является заброс капель неперегнанной воды в дистиллят и нарушения санитарных требований при транспортировке и хранении воды. Другой причиной попадания пирогенов в лекарство может быть нарушение сро­ков хранения, правил обработки и дезинфекции посуды.

В связи с имеющимися сведениями о наличии посттрансфузионных реакций, обусловленных попаданием в организм остаточных количеств поверхностно-активных веществ (от 2 до 22 мкг/мл), требуется более тща­тельное, после введения дополнительного предварительного ершевания, ополаскивание посуды под проточной очищенной водой.

Следует заметить, что контроль по фенолфталеиновой пробе нередко дает отрицательные результаты, что связано с появлением новых моющих средств с более выраженной кислой средой.

В соответствии с Инструкцией по санитарному режиму аптечных ор­ганизаций (аптек) № 309 от 21.10.97 г. изменился способ контроля качест­ва обработки посуды. Применяемая ранее фенолфталеиновая проба используется как ориентировочная. Полноту смыва моющих средств опре­деляют по величине рН потенциометрическим методом. Значение рН очищенной воды после полного ополаскивания посуды должно соот­ветствовать рН исходной воды, взятой для контрольного смыва.

72. Пути и источники загрязнения лекарственных средств.

Объектами фарм анализа являются не только медикаменты, но и лекарственное сырье,используемое для изготовления различных фармаевтических препаратов, от степени чистоты которого зависит качество лек. Средств.

Погчти все лек.вещества содержат те или иные примеси посторонних веществ. Загрязнение лекарственных веществ различными примесями может не только снижать его терапевтический эффект, но и вызывать Нежелательное побочное действие лекарства. Особенно опасны ядовитые примеси которые могут вызывать отравление организма.

Причины возникновения примесей в лек.веществах могут быть различныи носят вполне закономерный характер. Это и плохая очистка исходного сырья и побочные продукты синтеза, и механическипе загрязнения(остатки фильтрующих материалов – ткань, фильтровальная бумага, асбет и т.д.), остатки растворителей (спирт, вода и др.). источником загрязнения лек.веществ могут быть примеси материалов, из которых сделана аппаратура, применяемая для изготовления препарата. Металлическая аппаратура может служить источником таких опасных примесей в лекарственном веществе, как свинец (из посуды), железо, медь, иногда цинк и самая опасная примесь – мышьяк. Примеси могут возникнуть и при нарушении необходимых условий хранения лекарств. Так, например, при нарушении правил хранения хлороформа для наркоза(на свету, с доступом воздуха) происходит его окисление; продукты окисления – фосген и хлороводородная кислота – не только снижают его наркотическое действие, но могут привести к отравлению больного фосгеном.

Некоторые препараты требуют таких условий хранения, при которых исключалась бы возможность появления влажности , так как влажность может привести к гидролитическому распаду или к появлению микроорганизмов. Например, препараты, представляющие по структуре сложные эфиры, в условиях влаги могут гидролизоваться, при этом не только снижается лечебный эффект препарата, но иногда продукты гидролиза могут быть токсичны.

Например, есть препараты в которых для проявления необходимого действия должна обязательно содержаться влага, например сульфат магния (слабительное средство)

Очень важно соблюдать определенные условия хранения для тех препаратов , которые содержат кристаллизационную воду, особенно для препаратов, в состав которых входят ядовитые вещества (мышьяк, ртуть и др.) так, если в препарате мышьяка натрия арсенате *7O выветрится кристаллизационная вода, а дозировка делается в расчете на 7 молекул в оды в молекуле препарата, то при той же дозировке больной получит большее количество мышьяка, чем это нужно для лечебного эффекта в результате чего может произойтиотравление организма.

Многие из перечисленных источников загрязненных лекартсвенных веществ могут обусловить наличие в них нелетучих примесей с большим содержанием неорганических веществ (зольный остаток). Так как зола в большинстве случаев не содержат таких вредных примесей, как тяжелое металлы, мышьяк, которые рекомендуется проверять при анализе лекарственного вещества. Государственной фармакопеей допускается для каждого лекарственного вещества определенной предел зольности. Для определениядопустимого предела примесей в препарате в ГФ введены так называемые эталонные растворы.

73. Методы определения микробной загрязненности готовых лекарственных средств.

Имеются определенные требования ВОЗ и фармакопеипо микробной загрязненности различных лекарственных средств.

Лекарственные средства для парентерального введения в виде инъекций, глазные капли, мази, пленки, средства для новорожденных, должны бытьстерильными.

Стерильные инъекционные растворы могут обладать пирогенными свойствами, т.е. вызывать повышение температуры тела. Это обусловлено наличием в них убитых бактерий или продуктов их распада. Пирогены – это сложные по своей структуре вещества, которые содержат протеины, липиды и полисахариды, и вызывают в макроорганизме комплекс изменений, характеризующихся повышением температуры тела, вазомоторными расстройствами, в тяжелых случаях – шоковым состоянием. Пирогенами являются бактериальные эндотоксины.Все растворы, предназначенные для инъекций не должны содержать пирогенов.Ноосвободитьот нихготовый продукт не удается, т.к. пирогены проходят через бактериальные фильтры и устойчивы к нагреванию.

Для этого необходимо соблюдать специальные требованияпри изготовлениистерильных лекарственных средств:

1) дистиллированная вода уже до стерилизации не должна содержать кишечной палочки;

2) общее количество микробов в воде не должно превышать 10 – 15 клеток на 1 мл;

3) препараты готовят в асептических условиях, пользуются стерильной посудой, соблюдают стерильность при их упаковке, после приготовления стерилизуют.

Проверку стерильностипроизводят в боксах со строгим соблюдением правил асептики. Делаютпосев на тиогликолевую среду(для выявления различных бактерий, в том числе анаэробов) ипосев на среду Сабуро(для выявления грибов, г.о. рода Кандида). Если нет роста микробов на средах, то препарат является стерильным.

Если лекарственное средствообладаетантимикробнымдействием, тостерильностьопределяют путеммембранной фильтрации. После фильтрации исследуемого препарата фильтр делят на части и вносят для роста задержанных микроорганизмов в жидкие питательные среды. При отсутствии роста препарат считается стерильным.

Лекарственные средства, не требующие стерилизации, содержат микроорганизмы. Но их содержание не должно превышать предельно допустимых значений для различных лекарственных форм.

Оценка микробной загрязненности нестерильных препаратов.

Определяют:

1) количество жизнеспособных бактерий в 1 г или 1 мл препарата;

2) количество жизнеспособных грибов в 1 г или 1 мл препарата;

3) кишечную палочку и представителей семейства энтеробактерий, синегнойную палочку и золотистого стафилококка, которые не должны присутствовать в нестерильных лекарственных средствах.

Методы определение микробной загрязненности лекарственных средств, не обладающих антимикробным действием.

От каждой серии препарата отбирают 10 проб из 10 разных упаковок, в целом не меньше 50 г или мл. На анализ берут 30 г т(мл), разделив на 3 части по 10 г (мл).

Определение общего количества бактерий и грибов. 10 г (мл) разводят в 10 раз 0,1 М раствором фосфатного буфера, доводя конечный объем до 100 мл. Делают посев по 1 мл разведенного препаратадвухслойным агаровым методомв 2 чашки Петри с МПА, содержащим 0,1% глюкозы для определения бактерий и по 1 мл в 2 чашки Петри со средой Сабуро с антибиотиками для грибов. Чашки с МПА для определения бактерий инкубируют при 37С 5 дней, а со средой Сабуро для определения грибов при 24С 5 дней. Затем подсчитывают число колоний, находят среднее арифметическое для 2-х чашек и высчитывают количество бактерий и грибов в 1г (мл) отобранного на анализ образца.

Определение бактерий семейства Enterobacteriaceae. Следующие 10 г(мл) образца вносят в 90 мл среды обогащения, перемешивают и инкубируют при 37С 24 – 48 час. При наличии роста делают пересев на среду Эндо и висмут-сульфитный агар. Инкубируют при 37С 24 – 48 час. На среде Эндо бактерии семействаEnterobacteriaceaeобразуют малиновые колонии с металлическим блеском. На висмут-сульфитном агаре – черные или зеленовато-бурые, светло-зеленые или коричневые колонии. Колонии исследуют микроскопически и выявляют грам «-» неспоровые палочки. Подозрительные колонии пересевают на скошенный в пробирках МПА с 0,1% глюкозой и инкубируют при 37С 24 час. Из каждой пробирки с чистой культурой делают пересевы на :

1) среду с глюкозой и феноловым красным ( энтеробактерии ферментируют глюкозу и среда становится желтой);

2) среду с нитратом калия (энтеробактерии восстанавливают нитраты в нитриты и не имеют фермента цитохромоксидазы).

Если в образце обнаружены грам «-» неспоровые палочки, которые дают отрицательную реакцию на цитохромоксидазу, ферментируют глюкозу и восстанавливают нитраты в нитриты, то делают вывод, что исследуемый препарат содержит бактерии семейства Enterobacteriaceae.

Определение бактерий S. aureus и P. aeruginosa. Следующие 10 г(мл) образца вносят в 90 мл накопительной среды и инкубируют при 37С 24 – 48 час. При наличии роста делают пересев петлей на чашки Петри с солевым агаром с маннитом для стафилококка и на чашки Петри со средой для идентификации синегной палочки. Инкубируют при 37С 24 – 48 час. Стафилококк на солевом агаре образует желтые колонии, окруженные желтыми зонами. При микроскопии обнаруживаются грам"+" кокки. С чистой культурой стафилококка ставят реакцию плазмокоагуляции. Для этого в пробирку с 0,5 мл разведенной (1:4) плазмой крови человека или кролика вводят петлю агаровой культуры стафилококка и инкубируют 1-24 час при 37С. Стафилококк коагулирует плазму.

P.aeruginosaна диагностической среде образует зеленые флюоресцирующие колонии. Их идентифицируют микроскопически и биохимически. Под микроскопом бнаруживают грам «-» палочки. Реакция на цитохромоксидазу положительна (бумажка с индикатором синеет).

Нормативы. В нестерильных лекарственных средствах для приема внутрь в 1 г (мл) должно быть не более 1000 бактерий и 100 дрожжевых и плесневых грибов, а также должны отсутствовать патогенные и условно-патогенные микроорганизмы - представители семейства энтеробактерий, синегнойная палочка и золотистый стафилококк.

Лекарственные средства для местного применения (полость уха, носа, интравагинально) не должны содержать более 100 (суммарно) микробных клеток в 1 г (мл).

В таблетированных препаратах не должно быть патогенной микрофлоры, а общая обсемененность не должна превышать 10 тыс. микробных клеток на 1 таблетку.

Бактериологический контроль соблюдения санитарно-гигиенического режимаизготовления лекарственных препаратов на предприятиях и в аптеках осуществляется исследованиями смывов с рук персонала, посуды, поверхности столов, оборудования. Смывы высевают на различные питательные среды и определяют общую микробную обсемененность, наличие кишечной палочки, золотистого стафилококка, патогенных энтеробактерий, грибов рода Сandida, энтеровирусов.