Микра. 1 Роль микробиологии в современной медицине. Значение микробиологии в деятельности провизора
 Скачать 218.5 Kb.
|
|
При первичном введении АГ (Первичный иммунный ответ) латентная фаза составляет 3-5 сут., логарифмическая - 7-15 сут., стационарная – 15-30 сут. и фаза снижения – 1-6 мес. и более. Особенностью первичного иммунного ответа явл. то, что первоначально синтезируется IgM, а затем IgG. При вторичном введении антигена (вторичный иммунный ответ) латентный период укорочен до неск. часов или 1-2 сут. Логарифмическая фаза харак-тся быстрым нарастанием и значительно более высоким уровнем АТ, который в последующих фазах длительно удерживается и медленно, иногда в течение нескольких лет, снижается. При вторичном иммунном ответе в отличие от первичного синтезируются главным образом IgG. Иммунологическая память – способность организма при повторной встрече с одним и тем же АГ реагировать более активным и быстрым формированием иммунитета. Клетки иммунной памяти – популяции Т- или В-лимфоцитов, прошедшие стадию антигензависимой дифференцировки, 2-3 цикла деления, замершие в этом состоянии и длительно рециркулирующие в организме. 25. Аллергия как форма иммунного ответа. Классификация аллергических реакций. Аллергия – состояние повышенной чувствительности к повторному введению АГ (аллергена), в результате неадекватной реакции иммунной системы. К аллергическим реакциям относят 2 типа реагирования на чужеродное в-во: Гиперчувствительность немедленного типа (ГНТ) и гиперчувствительность замедленного типа (ГЗТ). К ГНТ относят аллергические реакции, проявляющиеся уже через 20-30 мин. После повторной встречи с АГ, а к ГЗТ – реакции, возникающие через 6-8 ч. и позже. Механизм ГНТ связан с выработкой АТ, а ГЗТ – с клеточными реакциями. ГНТ проявляется в неск. клинических формах: крапивница, отёк Квинке, вазомоторный ринит, аллергический конъюнктивит, сенная лихорадка, бронхиальная астма, сывороточная болезнь, анафилактический шок (в т.ч. лекарственный). Механизм развития ГНТ: АГ, вызывающий ГНТ – аллерген. Первая доза – сенсибилизирующая Вторая доза – разрешающая. Главный эффектор IgE Иммунологическая стадия Патохимическая стадия Патофизическая стадия. К ГЗТ относятся следующие формы проявления: туберкулиновая реакция, замедленная аллергия к белкам, контактная аллергия. В настоящее время придерживаются классификации аллергических реакций по Джеллу и Кумбсу, выделяя 5 типов: I тип Анафилактический: Выработка Ig E цитотропных АТ, их фиксация на тучных клетках и базофилах; реакция АГ-АТ с высвобождением медиаторов типа гистамина из этих клеток. (Атопическая бронхиальная астма, ринит, анафилактический шок. II тип Цитотоксический: Выработка Ig G против АГ, входящих в состав клеточных мембран, цитолиз вследствие реакции АГ-АТ через активацию комплемента. (Цитотоксические реакции при лекарственной аллергии, аутосенсибилизация к АГ щитовидной железы, базальных мембран почек, кожи. III тип Иммунокомплексный: Выработка преципитирующих АТ, избыток АГ, патогенетические реакции, инициированные иммунными комплексами через активацию комплемента и лейкоцитов. (Сывороточная болезнь, аутоиммунные заболевания (коллагенозы), осложнения инфекционных заболеваний). IV тип Клеточный (ГЗТ): Накопление сенсибилизированных Т-лимфоцитов, реакция между АГ и сенсибилизированными Т-лимфоцитами с их активацией, выработкой лимфокинов и цитотоксические реакции при участии макрофагов. (Аллергические явления при инфекционных заболеваниях и аутоиммунных заболеваниях, контактная аллергия (лекарственная). V тип реакции – иммунные реакции, осуществляющие активацию или ингибирование физиологических функций клеток, обусловлены действием АТ к рецепторам клеток, например гормонов щитовидной железы. 26. Реакции иммунной сыворотки: агглютинации, преципитации, лизиса . Агглютинация (лат. agglutinatio — склеивание) - склеивание антигеннесущих корпускулярных частиц (цельные клетки, частицы латекса и др.) молекулами специфических антител в присутствии электролитов, которое заканчивается образованием видимых невооруженным глазом хлопьев или осадка (агглютината). Характер осадка зависит от природы антигена: жгутиковые бактерии дают крупнохлопьевидный осадок, безжгутиковые и бескапсульные — мелкозернистый, капсульные — тяжистый. Различают агглютинацию прямую, при которой во взаимодействии со специфическими антителами непосредственно участвуют собственные антигены бактериальной или любой другой клетки, например эритроцитов; и непрямую, или пассивную, при которой бактериальные клетки или эритроциты, или частицы латекса являются носителями не собственных, а сорбированных на них чужих антигенов (или антител) для выявления специфических к ним антител (или антигенов). В реакции агглютинации участвуют главным образом антитела, относящиеся к классам IgG и IgM. Она протекает в две фазы: вначале происходит специфическое взаимодействие активного центра антител с детерминантом антигена, эта стадия может происходить в отсутствие электролитов и не сопровождается видимыми изменениями реагирующей системы. Для второй стадии — образования агглютината — необходимо наличие электролитов, которые снижают электрический заряд комплексов антиген + антитело и ускоряют процесс их склеивания. Эта фаза заканчивается образованием агглютината. Реакции агглютинации ставят либо на стеклянных, либо на гладких картонных пластинках, либо в стерильных агглютинационных пробирках. Достоинством реакции агглютинации на стекле является простота ее постановки и то, что она протекает несколько минут или даже секунд, так как оба компонента в ней используются в концентрированном виде. Развернутая реакция агглютинации в пробирках дает более точные результаты, ибо она позволяет определить количественное содержание антител в сыворотке (установить ее титр) и при необходимости зарегистрировать факт нарастания титра антител. Для постановки реакции в агглютинационные пробирки вносят определенным образом разведенную 0,85 % раствором NaCl сыворотку и равный объем (обычно 0,5 мл) суспензии стандартного диагностикума, содержащего в 1 мл 1 млрд бактерий. Учет результатов реакции агглютинации производят предварительно через 2 ч инкубации пробирок при температуре 37 °С и окончательно через 20—24 ч по двум признакам: наличию и величине осадка и степени прозрачности надосадочной жидкости. Реакция преципитации и ее варианты Реакции агглютинации и преципитации очень близки по своей сути. Различия между ними зависят главным образом от величины частиц антигена. Преципитацией называют процесс, когда происходит агрегация антител с растворимыми антигенами; если же антиген представлен корпускулами, специфическая агрегация таких антигенов описывается как агглютинация. Появление преципитата при реакции антиген—антитело определяется не только возникновением решетки, образуемой ее участниками, но и особой ролью Fc-фрагмента иммуноглобулина, изменение конформации которого приводит к утрате этим комплексом растворимости в солевых растворах. В связи с этим в реакции преципитации используют неразведенную или слабо разведенную сыворотку. Для постановки реакции преципитации необходимы: антитела — испытуемая сыворотка больного или иммунная диагностическая сыворотка (при идентификации выделенных микробов); антиген — экстрагированный гаптен или полный гаптен соответствующих микроорганизмов; физиологический раствор как источник электролитов. Существует множество модификаций этой реакции, которые подразделяют на две группы: преципитация в жидкой среде (реакция флоккуляции и реакция коль- цепреципитации) и преципитация в геле. Реакция флоккуляциипредставляет собой преципитацию, при которой растворы антигенов и антител смешивают в пробирке. Учет реакции производят с помощью измерения на фотоэлектроколориметре мутности получаемой системы, что позволяет определить концентрацию исследуемого антигена. Чаще применяется реакция кольцепреципитации. Для ее постановки в тонкие преципитационные пробирки наливают сначала неразведенную преципитирующую сыворотку и сверху на нее наслаивают, не допуская перемешивания, раствор антигена. В случае гомологичности антител и антигена на границе между этими растворами быстро, через 3—10 мин, появляется кольцо преципитата Реакция преципитации в геле позволяет выявить число индивидуальных антигенов в исследуемой жидкости и провести анализ их антигенного родства.Для постановки реакции по Оухтерлоню используют 1 %-ный агар, приготовленный на физиологическом растворе, который разливают в чашки Петри слоем 0,5 см. После застывания в пластинке агара вырезают луночки диаметром 5—6 мм — одна в центре чашки, 4—5 — по окружности на расстоянии 1—2 см от центральной. В центральную луночку наливают диагностическую преципитирующую сыворотку, а в периферические — раствор гомологичного и сравниваемых с ним антигенов. Учет результатов проводят через 24, 48 и 72 ч инкубации при комнатной температуре. Антитела и антигены диффундируют навстречу друг другу, и в участках, где создаются их эквивалентные концентрации, образуются дугообразные полосы преципитации. Если полосы преципитации, идущие от двух соседних луночек, сливаются, это указывает на наличие нескольких антигенных компонентов в исследуемой жидкости. Реакцию встречной диффузии по Оухтерлоню часто применяют для определения токсигенности бактерий, например дифтерийных. Реакции лизиса. Существует 2 типа реакции лизиса: 1.Реакция бактериолиза. Используется для серологической диагностики холеры. Феномен бактериолиза легко удается наблюдать in vitro. Исследуемую сыворотку наносят в последовательном двукратном разведении каплями на поверхность питательной среды, на которую предварительно засевают культуру вибриона. Чашку с посевами инкубируют при температуре 37 С в течение 18—20 ч. Под влиянием имеющихся в сыворотке вибриоцидных антител и комплемента холерные вибрионы разрушаются (лизируются), и в местах нанесения капель образуются стерильные пятна. Титром вибриоцидных антител считается максимальное разведение сыворотки, при котором она еще вызывает отчетливый лизис бактерий. 2.Реакция гемолиза. Литическое действие иммунной сыворотки в присутствии комплемента особенно четко проявляется в отношении эритроцитов. Если кролика иммунизировать эритроцитами другого вида животных (барана), кроличья сыворотка приобретает специфическую гемолитическую активность, т. е. способность вызывать гемолиз эритроцитов, использованных для иммунизации. Этот эффект абсолютно зависим от комплемента. Инактивация последнего путем прогревания сыворотки при температуре 56 °С приводит к утрате ею гемолитической активности. Таким образом, наличие или отсутствие активного комплемента в гемолитической сыворотке очень четко выявляется по результатам ее взаимодействия с гомологичными эритроцитами: при наличии комплемента — гемолиз, образование «лаковой крови»; при его отсутствии — гемагглютинация, эритроциты выпадают на дно пробирки, образуя осадок в виде зонтика, жидкость бесцветна. 27. Иммунные сыворотки. Титр агглютинирующей, испытуемой сыворотки, диагностический титр. Диагностикумы, их виды. Иммунные сыворотки - препараты крови человека или животных, содержащие антитела; используются для диагностики, лечения и профилактики различных заболеваний. Иммунные сыворотки получают от иммунизированных животных и людей, а также от лиц, перенесших инфекционную болезнь, в крови которых содержатся соответствующие антитела. Минимальное количество сыворотки, при котором можно еще обнаружить ее действие, носит название титра сыворотки. Титр сывороток, полученных искусственной иммунизацией, обычно значительно выше титра сывороток больных. Первый измеряется тысячными и десятитысячными долями куб.смсыворотки, а титр сывороток больных—только десятыми и сотыми куб. см. Диагностический титр сыворотки— титр антител сыворотки крови к антигену (инфекционному агенту) серологической реакции определенного типа, выявляемый у большинства больных с данной патологией и не наблюдающийся у здоровых лиц. Является лабораторным подтверждением клинического диагноза, свидетельствует о наличии заболевания. Титр диагностической сыворотки – это её рабочее разведение, чтобы проверить работает или не работает в рабочем состоянии. Титр агглютинирующей сыворотки – max разведение её, при котором ещё произошла реакция агглютинации в степени не менее, чем в 2 плюс. Диагностикумы - это взвеси убитых микробов, чаще всего в физиологическом растворе, применяемые в качестве антигенов для серологических реакций. Диагностикумы, используемые для распознавания инфекционных заболеваний, делятся на бактерийные, риккетсиозные и ивирусные. Бактерийныед иагностикумы Для приготовления бактерийных диагностикумов берется агаровая суточная культура определенного вида микроба, находящегося в S-форме. Риккетсиозные диагностикумы Для дифференциальной диагностики риккетсиозов серологическим методом в постановке реакций связывания комплемента и агглютинации широко применяются цельные риккетсиозные антигены. Для приготовления диагностикумов из риккетсий могут быть использованы куриные эмбрионы, белые мыши, платяные вши. Вирусные диагностикумы представляют собой антигены, используемые для серологических реакций. В зависимости от цели применения их подразделяют на антигены для реакции связывания комплемента и антигены для реакции торможения гемагглютинации. 28. Люминесцентная, темнопольная, фазовоконтрастная, электронная микроскопия. Их сущность. Люминесцентная микроскопия Метод основан на способности некоторых веществ светиться под действием коротковолновых лучей света. При этом длина волны излучаемого при люминесценции света всегда будет больше, чем длина волны света, возбуждающего люминесценцию. Так, если освещать объект синим светом, он будет испускать лучи красного, оранжевого, желтого и зеленого цвета. Препараты для люминесцентной микроскопии окрашивают специальными светящимися люминесцентными красителями — флуорохромами. Лучи света от сильного источника (обычно ртутной лампы сверхвысокого давления) пропускают через сине-фиолетовый светофильтр. Под действием этого коротковолнового излучения окрашенные флуорохромом клетки или бактерии начинают светиться красным или зеленым светом. Для того чтобы синий свет, вызвавший люминесценцию, не мешал наблюдению, над окуляром ставят запирающий желтый светофильтр, задерживающий синие, но пропускающий желтые, красные и зеленые лучи. В результате при наблюдении в люминесцентном микроскопе на темном фоне будут видны клетки или бактерии, светящиеся желтым, зеленым или красным светом. Например, при окраске акридиновым оранжевым ДНК клетки (ядерное вещество) будет светиться ярко-зеленым светом. Метод люминесцентной микроскопии позволяет изучать живые нефиксированные бактерии, окрашенные сильно разведенными флуорохромами, не причиняющими вреда микробным клеткам. По характеру свечения могут быть дифференцированы отдельные химические вещества, входящие в состав микробной клетки. Метод с успехом может быть использован для ускоренной диагностики ряда заболеваний. Темнопольная микроскопия При микроскопии по методу темного поля препарат освещается сбоку косыми пучками лучей, не попадающими в объектив. В объектив попадают лишь лучи, которые отклоняются частицами препарата в результате отражения, преломления или дифракции. В силу этого микробные клетки и другие частицы представляются ярко светящимися на черном фоне (картина напоминает мерцающее звездное небо). Для микроскопии в темном поле используют специальный конденсор (параболоид-конденсор или кардиоид-конденсор) и обычные объективы. Этот метод микроскопии удобен при изучении живых бактерий, спирохет и их подвижности. Фазово-контрастная микроскопия Обыкновенные окрашенные препараты поглощают часть проходящего через них света, в результате чего амплитуда световых волн снижается, и частицы препарата выглядят темнее фона. При прохождении света через неокрашенный препарат амплитуда световых волн не меняется, происходит лишь изменение фазы световых волн, прошедших через частицы препарата. Однако человеческий глаз улавливать это изменение фазы света не способен, поэтому неокрашенный препарат при правильной установке освещения в микроскопе будет невидим. Фазово-контрастное устройство позволяет превратить изменение фазы лучей, прошедших через частицы неокрашенного препарата, в изменения амплитуды, воспринимаемые человеческим глазом, и, таким образом, позволяет сделать неокрашенные препараты отчетливо видимыми. Существенными недостатками фазово-контрастной микроскопии являются слабая контрастность получаемых изображений и наличие светящихся ореолов вокруг объектов. Фазово-контрастная микроскопия не увеличивает разрешающей способности микроскопа, но помогает выявить детали структуры живых бактерий, стадии их развития, изменения в них под действием различных агентов (антибиотики, химические вещества и т. д.). |