Экзаменационные вопросы по дисциплине Микробиология, вирусология
 Скачать 0.77 Mb.
|
|
Метод «раздавленной капли» Культуру в изотоническом растворе хлорида натрия наносят на предметное стекло и сверху накладывают покровное. Капля материала должна быть такой величины, чтобы она заполняла все пространство между покровным и предметным стеклом и не выступала за пределы покровного. Препарат рассматривают с иммерсионной системой и слегка опущенным конденсором. Метод «висячей капли» Необходимо иметь предметное стекло с лупочкой. Каплю культуры наносят на покровное стекло. Сверху накладывают предметное стекло с лупочкой посредине, края которого предварительно обмазаны вазелином. Затем предметное стекло слегка прижимают к покровному, и препарат переворачивают покровным стеклом кверху. Получается герметично закрытая камера, в которой капля долго не высыхает. Оценка результата: неподвижные микробы в препаратах «раздавленной» и «висячей» капли двигаются хаотично, подвижные – проходят с одинаковой скоростью большие пространства, иногда через все поле зрения «вращаясь» вокруг своей оси. 11.Различия в структуре грамположительных и грамотрицательных бактерий. Протопласты, сферопласты и L-формы бактерий. В клеточной стенке грамположительных бактерий содержится небольшое количество полисахаридов, липидов и белков. Основным компонентом клеточной стенки этих бактерий является многослойный пептидогликан (муреин, мукопептид), составляющий 40-90% массы клеточной стенки. С пептидогликаном клеточной стенки грамположительных бактерий ковалентно связаны тейхоевые кислоты. Форму и прочность бактериям придает жесткая волокнистая структура многослойного, с поперечными пептидными сшивками пептидогликана. Способность грамположительных бактерий при окраске по Граму удерживать генциановый фиолетовый в комплексе с йодом (сине-фиолетовая окраска бактерий) связана со свойством многослойного пептидогликана взаимодействовать с красителем. Кроме этого последующая обработка мазка бактерий спиртом вызывает сужение пор в пептидогликане и тем самым задерживает краситель в клеточной стенке. Грамотрицательные бактерии после воздействия спиртом утрачивают краситель, что обусловлено меньшим количеством пептидогликана (5-10% массы клеточной стенки); они обесцвечиваются спиртом, и при обработке фуксином приобретают красный цвет. Это связано с особенностями строения клеточной стенки. Пептидогликан в клеточной стенке грамотрицательных бактерий представлен 1-2 слоями. Кнаружи от пептидогликана расположен слой липопротеина, соединенный с пептидогликаном через ДАП. За ним следует наружная мембрана клеточной стенки. При нарушении синтеза клеточной стенки бактерий под влиянием лизоцима, пенициллина, защитных факторов организма и других соединений образуются клетки с измененной (часто шаровидной) формой: протопласты - бактерии, полностью лишенные клеточной стенки; сферопласты - бактерии с частично сохранившейся клеточной стенкой. После удаления ингибитора клеточной стенки такие измененные бактерии могут реверсировать, т.е. приобретать полноценную клеточную стенку и восстанавливать исходную форму. Бактерии сферо или протопластного типа, утратившие способность к синтезу пептидогликана под влиянием антибиотиков или других факторов и способные размножаться, называются L-формами (от названия Института им. Д. Листера, где они впервые были изучены). L-формы могут возникать и в результате мутаций. Они представляют собой осмотически чувствительные, шаровидные, колбовидные клетки различной величины, в том числе и проходящие через бактериальные фильтры. Некоторые L-формы (нестабильные) при удалении фактора, приведшего к изменениям бактерий, могут реверсировать, возвращаясь в исходную бактериальную клетку. L-формы могут образовывать многие возбудители инфекционных болезней. В отличие от протопластов и сферопластов L-формы обладают относительно высокой жизнеспособностью и выраженной способностью к репродукции. Исключительное значение L-трансформации патогенных бактерий заключается в том, что она является частой причиной перехода острых форм заболеваний в хронические и их обострений. 12. Окраска по методу Грама. Назначение, основная краска, протрава, обесцвечивающий фактор, дополнительная краска, механизм. Метод Грама применяется для выявления грамположительных и грамотрицательных бактерий Методика окраски:
Способность грамположительных бактерий при окраске по Граму удерживать комплекс генцианвиолета с йодом связана со свойствами многослойного пептидогликана. Обработка спиртом вызывает сужение пор пептидогликана и тем самым задерживает краску. Наоборот, грамотрицательные бактерии после воздействия спиртом утрачивают краситель, обесцвечиваются и окрашиваются фуксином в красный цвет вследствие меньшего содержания пептидогликана, у них наиболее выражен липополисахаридный слой. 13. Окраска по Циль-Нильсону. Назначение, основная краска, протрава, обесцвечивающий фактор, дополнительная краска, механизм. Метод используется для окраски кислотоустойчивых бактерий (M. tuberculosis, M leprae). Кислотоустойчивость связана с наличием в клеточной стенке и цитоплазме бактерий повышенного количества липидов, воска и оксикислот, в частности миколовой кислоты. Карболовая кислота разрыхляет клеточную стенку и тем самым повышает тинкториальные свойства, высокая концентрация красителя и нагревание усиливают реакцию взаимодействия клетки с красителями. При обработке препарата серной кислотой некислотоустойчивые бактерии обесцвечиваются и окрашиваются метиленовым синим в голубой цвет Методика окраски:
14. Окраска по способу Ожешко и Нейссера. Назначение. основная краска, протрава, обесцвечивающий фактор, дополнительная краска, механизм. Основные этапы. Механизм. Окраска по Нейссеру Метод используется для выявления зерен волютина у возбудителей дифтерии (С. diphtheria). В отличие от других коринобактерий у возбудителей дифтерии зерна волютина распалагаются на концах палочек. Этот сложный метод окраски включает несколько этапов: 1) фиксированный мазок окрашивают ацетатом синьки Нейссера ( основная окраска) в течение 2-3 мин. 2) наносят раствора Люголя (протрава) на 10-30 секунд; 3) промывают препарат водой; 4)окрашивают везувином (дополнительная окраска) в теч. 0,5-1 мин. 5) промывают препарат водой, высушить и микроскопируют. Зерна волютина представляют собой соединения, имеющие в отличие от цитоплазмы щелочную реакцию, и поэтому избирательно воспринимают ацетат синьки, окрашиваясь в темно-синий цвет. Цитоплазма клетки, обладающая кислой реакцией, воспринимает щелочной краситель везувин и окрашивается в желтый цвет. Окраска по способу Ожешки Метод Ожешки применяется для выявления спор. Этапы окраски: 1) на нефиксированный мазок наносят 0,5% раствор соляной кислоты и подогревают на пламени спиртовки 2-3 минуты; 2) кислоту сливают, препарат промывают водой, высушивают и фиксируют над пламенем ; 3) окрашивают по Циль-Нильсену. Споры бактерий окрашиваются в красный цвет, а вегетативные формы в синий 15. Актиномицеты. Таксономия. Особенности строения. Общие признаки с бактериями и грибами. Патогенные представители, вызываемые заболевания. Актиномицеты – микроорганизмы, сочетающие свойства бактерий и плесневых грибов,широко распространены в природе, отличаются разнообразием форм и продуцируемых БАВ. Царство :прокариоты Отдел: скотобактерии Класс: бактерии Порядок: Actinomycetales Семейство: Actinomycetaceae Род: Actinomyces Вид: A.bovis, A.israili Актиномицеты— Грам+, полиморфны: чаще образуют нити диаметром 0,2–2мкм и длиной до 600 мкм, иногда встречаются тонкие, прямые или слегка изогнутые палочки 0,2–1х2,5 мкм. Ультраструктура актиномицетов не отличается от истинных бактерий, однако в составе пептидогликана КС обнаружены сахара, отсутствующие у других прокариот (галактоза, арабиноза, ксилоза), миколовые кислоты и большие количества жирных кислот. Нитевидные клетки актиномицетов не разделены септами (перегородками) и называются гифами. Скопление гифов называют мицелием. Мицелий развивается из небольшой почки, которая постепенно вытягивается в палочку, а затем в короткую нить с боковыми ответвлениями. На концах воздушного мицелия актиномицеты образуют спороносцы. Экзоспоры (овальные, круглые, цилиндрические, с гладкой поверхностью или шипами) служат для размножения актиномицетов, они не термостойки, но выдерживают высушивание. Также размножаются распадом мицелия, почкованием. Ранее актиномицеты ошибочно считали грибами, что нашло отражение в названии (от греч. aktis — луч и myces — гриб). Актиномицеты — бактерии, так как: имеют нуклеоид, а не истинное ядро, характерное для грибов; содержат в КС пептидогликан, а не хитин и целлюлозу, которые имеют грибы; чувствительны к бактериофагам и антибиотикам, а не к противогрибковым препаратам; хорошо растут в слабо щелочной среде, а грибы — в кислой. Представители актиномицетов и их роль в патологии. Представители рода Actinomyces — свободноживущие микроорганизмы, обитают в почве богатой перегноем, на растениях, в воде. Некоторые УП актиномицеты, являясь симбионтами человека и животных, присутствуют в ротовой полости, зубном налете, лакунах миндалин, в слюнных железах, на слизистой оболочке ЖКТ, обнаруживаются в камнях желчевыводящих и мочевых путей. Актиномикоз распространен во всех странах. Это первично-хроническая инфекция с длительным прогрессирующим течением и возможностью рецидивов. Актиномикозом болеют люди и сельскохозяйственные животные. Заболевание у человека вызывает A. israeli. Случаев заражения человека от больных людей или животных не описано. Чаще происходит эндогенное развитие заболевания в результате перехода актиномицетов из сапрофитического состояния в паразитическое. Этому способствуют иммунодефицитное состояние и воспалительные заболевания слизистых полости рта, респираторного тракта и ЖКТ. Для профилактики актиномикоза важно соблюдать гигиену полости рта, своевременно лечить зубы, воспалительные заболевания миндалин и слизистых оболочек. Возможно также экзогенное инфицирование при заносе актиномицетов из окружающей среды в ротовую полость. Инкубационный период при актиномикозе колеблется в широких пределах и может доходить до нескольких лет. В месте внедрения инфекции развивается воспалительный очаг и образуется гранулема—очень плотный и почти безболезненный инфильтрат, состоящий из макрофагов и актиномицетов. Гранулема прорастает в окружающие ткани, в результате чего в процесс вовлекается кожа: она становится цианотично-багровой. Когда гранулема нагнаивается, ее центр подвергается некротическому распаду, а при вскрытии абсцесса вначале появляется флюктуация, затем образуются длительно незаживающие свищи. Из свищей выделяется гной, в котором содержатся друзы — белые или желтые гранулы, диаметром 1–2 мм. Затем происходит фиброз (рубцевание) гранулемы. В образовании нагноений играет роль вторичная, преимущественно стафилококковая, инфекция. 16. Спирохеты. Таксономия. Особенности строения. Общие признаки с бактериями и простейшими. Патогенные представители. Вызываемые заболевания. Спирохеты (spira — виток, chaite — волосы) — Грам-, спирально извитые, обладающие активной подвижностью бактерии. Размеры спирохет вариабельны: толщина — 0,1–0,6 мкм, длина 7–500 мкм. Спор не образуют, капсул не имеют. Спирохеты отличаются друг от друга размерами клеток, количеством и характером завитков, числом фибрилл. Царство :прокариоты Отдел: скотобактерии Класс: бактерии Порядок: Spirochaetales Семейство: Spirochaetaceae, Leptospiraceae Род: Treponema Вид: T. pallidum, T. carateum, T. denticola, T. minutum, T. vincentii, T. scoliodontum, T. refringens Род: Borrelia Вид: B. recurrentis, B. burgdorferi, B. persica, B. hispanica, B. duttoni Род: Leptospira Вид: L. interrogans, L. biflexa Снаружи от ЦПМ находится тонкая и эластичная КС, состоящая из слабо выраженного пептидогликанового слоя и наружной мембраны. Между пептидогликановым слоем и наружной мембраной КС расположены осевые фибриллы, в совокупности называемые аксостилем. Осевые фибриллы, как и жгутики бактерий, состоят из белка флагеллина. Клетка спирохет содержит два набора осевых фибрилл, прикрепленных субполярно у каждого клеточного конца. Каждая осевая фибрилла тянется вдоль всей клетки спирохеты. Пучки фибрилл, прикрепленных у разных полюсов, в центральной части перекрываются. На обоих концах протоплазматического цилиндра расположены субтерминальные прикрепительные диски — блефаропласты. Каждая из осевых фибрилл прикрепляется на одном конце протоплазматического цилиндра к блефаропласту и тянется к противоположному концу цилиндра, обвивая его. Другой неприкрепленный конец осевой фибриллы свободен и выходит за конец протоплазматического цилиндра, создавая впечатление истинного наружного полярного жгутика. Однако истинные жгутики крепятся в ЦПМ и отходят от нее радиально, в то время как осевые фибриллы располагаются вдоль протоплазматического цилиндра и заключены во внешнюю оболочку (наружную мембрану), поэтому иногда именуются периплазматическими жгутиками или эндожгутиками. Общие признаки с простейшими: образуют цисты есть аксиальная нить, двигаются за счет ее сокращения вызывают заболевания приступообразного характера Отличаются по количеству и амплитуде завитков. Спирохеты в жидких средах совершают движения трех типов: быстрое вращательное вокруг длинной продольной оси, сгибательное и поступательное (штопорообразное, винтообразное). Они также способны скользить по твердому субстрату.
|