Шпаргалка для экзамена по микробиологии. Экзаменационные вопросы по курсу ветеринарной микробиологии
 Скачать 1.47 Mb.
|
|
Российский Университет дружбы народов, кафедра микробиологии Экзаменационные вопросы по курсу ветеринарной микробиологии
2я ½ 19в. Морф- Левенгук увид и опис микр, кн; Самойлович - возм предупя заб- введ ослабл зараз=о нач (буб ч); Э.Дженнер – прив кор осп- чел. Физио –Пастер брож, анаэроб, гни, ас/ант, получ чк, вак. Кох -анилин крас, правила патог-ти м-о, дезинф. Имм – Мечников–фагоц, Эрлих – гум теор имм, Ивановский – вирусы. Вет: Леффлер и Фроша открыли первые вирусы животных(1897), Ценковский изготовил вакцину против сибирской язвы(1883). Михин - лептосп крс, пригот вак,сыв. Андриевский – сиб язв;
самопрм зарож ж, абс стер-ть - раств - невозм появ мкр, гниение.; откр возбхолеры кур, рожи свиней, сиб я, стаф, стрепт ;теор атенуа; предл метод получ вак хол кур, сиб, беш.
разр мет мкрб иссл. плот пит ср - чк мкр. мет окрск анилин крс, иммерс сист, обосн теор дезинф. возб тбрк, хол чел, изобр туберкулин
Обнар явл фагоц– акт погл част и жив кл одноклеточными - разр теор фагоц иммун и сравн пат восп.
Систематика предназначена для классиф м-о. Таксономия-наука, кт занимается вопросами классиф, номенклатурой и идентификацией миробов. Задачей явл объедин-е микробов с общими св-ми в опред-е гр - токсоны. Номенклатура- система,кт применятся в определенной области знаний. Идентифика-ция-отнесение микробов к определенному токсону (виду) на основании конкретных признаков. Чтобы отнести микроб к определ виду нужно определить основные его признаки (морфология, окраска по Грамму, наличие капсул, способность к образ-ю эндоспор). В классиф для груп-вания родств-х орг-змов имеют следующ категории : царство, отдел, секция, класс, порядок, семейство, род, вид. В микроб-ии для обознач-я видов бактерий принята двойная номенклатура: 1 слово название рода, хар-ет морфологию или физиолог признак, либо фамилию ученого; 2 слово обозначает видовое название микроба, пред-ет собой производное от сущест-ого, дающего описание цвета колонии, вызыв-го им процесса или болезнь. Пример bacillus antracis-сибиреязвенная палочка. Основной номенклатурной ед-ей явл вид- совокупность микроорг, имеющих единое происхождение и генотип, сходных по биол-м и морфология признакам, обладающих способностью вызывать опред-ный специф процесс. Вид подразд-ся на подвиды-микробы отлич-ся отклонениями от типовых, видовых св-в. Штамм-культура одного и того же вида, выдел-я из разных объектов, отлич-ся незначит-ыми измененными св-ми (чувствит к антибиотикам, ферментацией углеводов). Культура -микроог, вы-ращенные на питат среде в условиях лаборатории. Клон - культура полученная из одной клетки. Чистая культура -культура микроорг-в, полученная из особей одного вида. Смешенная - смесь неоднородных микроорганизмов, выделенных из исследуемого материала
Микроскоп - это оптический прибор, позволяющий получить обратное изображение изучаемого объекта и рассмотреть мелкие детали его строения, размеры которых лежат за пределами разрешающей способности глаза. Разрешающая способность микроскопа – это наименьшее расстояние между двумя точками объекта, которые воспринимаются глазом раздельно и не сливаются в одну: чем меньше размер частицы, видимой в микроскоп, тем больше его разрешающая способность. Разрешающая способность объектива зависит от длины волны света и числовой апертуры объективов и конденсора. Микроскоп состоит из оптической и механической частей. Механическая часть представлена: · штатив · тубус; · предметный столик Оптическая часть представлена: · зеркало · конденсор · объектив · окуляр Правила работы с микроскопом 1. Работать сидя; 2. осмотреть, вытереть 3. установить перед собой, немного слева на 2-3 см от края стола. Во время работы не сдвигать; 4. Открыть полностью диафрагму, поднять конденсор в крайнее верхнее положение; 5. Работу с микроскопом всегда начинать с малого увеличения; 6. Опустить объектив в рабочее положение, т.е. на расстояние 1 см от предметного стекла; 7. Установить освещение в поле зрения микроскопа, используя электроосветитель или зеркало. 8. Положить микропрепарат на предметный столик так, чтобы изучаемый объект находился под объективом. Глядя сбоку, опускать объектив при помощи макровинта до тех пор, пока расстояние между нижней линзой объектива и микропрепаратом не станет 4-5 мм; 9. Смотреть одним глазом в окуляр и вращать винт грубой наводки на себя, плавно поднимая объектив до положения, при котором хорошо будет видно изображение объекта. Нельзя смотреть в окуляр и опускать объектив. Фронтальная линза может раздавить покровное стекло, и на ней появятся царапины; 10. Передвигая препарат рукой, найти нужное место, расположить его в центре поля зрения микроскопа; 11. Если изображение не появилось, то надо повторить все операции пунктов 6, 7, 8, 9; 12. Для изучения объекта при большом увеличении, сначала нужно поставить выбранный участок в центр поля зрения микроскопа при малом увеличении 13. По окончании работы с большим увеличением, установить малое увеличение, поднять объектив, снять с рабочего столика препарат, протереть чистой салфеткой все части микроскопа, накрыть его полиэтиленовым пакетом и поставить в шкаф.
Для обнаружения и исследования микроорганизмов применяют микроскопы. Световые микроскопы предназначены для изучения микроорганизмов, которые имеют размеры не менее 0,2 мкм (бактерии, простейшие и т. п.), электронные для изучения более мелких микроорганизмов (вирусы) и мельчайших структур бактерий. «сухие» объективы малого и среднего увеличения (до 40 х) и иммерсионные с максимальной апертурой и увеличением (90—100 х. Особенностью иммерсионных объективов является то, что между фронтальной линзой такого объектива и препаратом помещают иммерсионную жидкость, имеющую показатель преломления такой же, как стекло (или близкий к нему), что обеспечивает увеличение числовой апертуры и разрешающей способности объектива. В качестве иммерсионной жидкости для объективов водной иммерсии используют дистиллированную воду, а для объективов масляной иммерсии — кедровое масло или специальное синтетическое иммерсионное масло. Использование синтетического иммерсионного масла предпочтительнее, поскольку его параметры более точно нормируются, и оно в отличие от кедрового, не засыхает на поверхности фронтальной линзы объектива. Правила работы с иммерсионной системой: 1. установить микроскоп на малое увеличение; 2. навести максимальную освещенность (зеркало, конденсор, диафрагма); 3. установить препарат на столик; 4. нанести каплю масла на препарат; 5. установить иммерсионный объектив; 6. опустить объектив в каплю масла при помощи макровинта; 7. наблюдая в окуляр вращать макровинт до появления изображения; 8. микровинтом установить более четкое изображение; 9. провести микроскопию мазка с описанием морфологических свойств; 10. поднять тубус вверх, снять препарат и очистить объектив от масла; 11. установить микроскоп в нейтральное положение (малое увеличение, тубус вниз). Существует несколько модификаций светового микроскопа, а, следовательно, и несколько видов световой микроскопии. Большинство бактериальных объектов прозрачны в видимом свете. Окрашенные препараты не позволяют определить некоторые морфологические свойства таких объектов. Для исследования живых нефиксированных и неокрашенных объектов применяют устройства: Фазово-контрастное устройство обеспечивает четкое изображение объектов. В основе метода лежит изменение фазы световых лучей при прохождении их через прозрачные объекты. Человеческий глаз выявляет только различия в длине (цвет) и амплитуде (интенсивность) световой волны, но не позволяет выявить различия в фазе. С помощью устройства различия в фазе превращаются в изменение амплитуды. Устройство представляет собой прозрачный диск, на поверхности которого напылено кольцо из металла (фазовое кольцо), расположенный в задней плоскости объектива; и кольцевую диафрагму (светонепроницаемая пластина с прозрачным кольцевидным участком), помещенная под конденсором. Темнопольный конденсор отличается от обычного тем, что пропускает только косые краевые лучи источника света, которые ввиду сильного наклона не попадают в объектив, в результате поле зрения микроскопа остается темным. На объект попадают только боковые лучи, отраженные от внутренних зеркальных поверхностей конденсора. Эти лучи отражаются в линзу объектива и позволяют видеть светлое изображение на темном фоне. Методы окраски препаратов 1. по Граму На мазок накладывают полоска фильтровальной бумаги и наливают на нее рабочий раствор генцианвиолета. Если есть готовые бумажки, пропитанные этой краской, то их кладут на мазки матовой стороной вверх и наливают несколько капель воды. Через две мин. Бумажки снимают, краску сливают (не промывают), а на препарат наносят раствор Люголя на 1 мин. (до почернения мазка), после чего раствор сливают, а мазок обесцвечивают этиловым спиртом до прекращения отхождения краски (около 30 сек.). Затем мазок промывают водой, и стряхнув воду, докрашивают мазок фуксином Пфейфера 30-60 сек. Или сафранином 2 мин.! Надо строго соблюдать определенные сроки препарата, особенно спиртом: при его передержке можно обесцветить грамположительные микробы по Циль-Нильсену – окрашивание кислотоустойчивых микроорганизмов (микобактерии ярко-красные, все прочие бактерии синие). Мазок фиксируют над пламенем, накрывают полосой фильтровальной бумаги, наливают на нее карболовый фуксин Циля и нагревают с появлением паров 3-5 мин, периодически проводя стекло над пламенем, но не доводя до кипения; при этом надо доливать краску на мазок. Препарату дают остыть, удаляют бумажку, промывают водой; обесцвечивают 5 %-ным раствором серной Окраивание капсул 2. Окраска по Романовскому-Гимзе Фиксированный спиртом или жидкостью Никифорова препарат кладут мазком вниз в чашку Петри на подставки из спичечной или стеклянной соломки. Готовят рабочий раствор краски Романовского-Гимзы (15-20 капель на 10 мл. дистиллированной воды), перемешивают и подливают под препарат, следя за тем чтобы все мазки были полностью смочены краской. Через 15-20 мин. Препараты промывают водой и высушивают на воздухе. Под микроскопом тела бактерий темно-синие, капсулы розовые 3. Окраска по Ребигеру Не фиксированные мазки окрашивают (и одновременно фиксируют) формалинизированным генцианвиолетом 15-20 сек., быстро промывают водой и подсушивают. Бактерии густо-фиолетовые, капсулы красновато-фиолетовые. 4.Окраска по Ольту Для окрашивания готовят свежий 2 %-ный водный раствор сафранина. Краситель растворяют в горячей воде и фильтруют при подогревании. Мазки красят 1-3 мин., промывают и высушивают. Бациллы – коричневые, капсулы бледно-желтые. 5. Окраска по Михину Дает хорошие результаты только при наличии старой синьки Леффлера, способной за счет образования азура давать разноцветное окрашивание тел и капсул микробов. Мазок красят синькой 3-5 мин., быстро споласкивают малым количеством воды и быстро подсушивают. Тела бактерий синие, капсулы розовые Окрашивание бруцелл. 6. Окрашивание по Ольту Мазок фиксируют над пламенем, окрашивают 2 %-ным свежеприготовленным водным раствором сафранина при подогревании 2 мин., промывают водой, докрашивают без подогрева 0,75-1 %-ным растворм малахитовой зелени в течении1 мин., промывают и высушивают. Бруцеллы из молодых культур красные, другие микроорганизмы зеленые. В более старых культурах бруцеллы красятся в оба цвета и промежуточно. 7. Окраска по Шуляку-Шину На фиксированный мазок наливают фуксин Циля в разведении 1:5, выдерживают 2 мин. Без подогревания и промывают водой; докрашивают 2 %-ным водным раствором метиленовой сини 5 мин. и промывают водой. Бруцеллы ярко-красные, остальные бактерии сине-голубые. Окрашивание кислотоустойчивых микробов 8. Окраска по Цилю-Нильсену Мазок фиксируют над пламенем, накрывают полосой фильтровальной бумаги, наливают на нее карболовый фуксин Циля и нагревают с появлением паров 3-5 мин., периодически проводя стекло над пламенем, но не доводя до кипения; при этом надо доливать краску на мазок. Препарату дают остыть, удаляют бумажку, промывают водой; обесцвечивают 5 %-ным раствором серной кислоты 15-20 сек. затем этиловым спиртом 5-10 сек. промывают водой; докрашивают синькой Леффлера 3-5 мин. и смыв краску, подсушивают препарат. Микобактерии ярко-красные, все прочие бактерии синие. Окрашивани анаэробов 9. Окраска по Шоу-Муромцеву Мазки из органов и культур фиксируют смесью 1:4 формалина и этилового спирта 5-10 мин., не давая им испариться (доливая свежий раствор). После высушивания на воздухе окрашивают фуксин-синькой через полоски фильтровальной бумаги 20-30 сек., промывают водой и подсушивают. Бактерии и клетки тканей голубовато-синие, капсулы красные, фон мазка розовый.
Морфология м-о По внешнему виду Бухне разделил м-о на 3 группы: 1. Шаровидные кокки(неподвиж). Подгруппы: микрококки(сапр), диплококки(2кл, пат/сапр), тетракокки(4кл, сапр), стрепток.(цепь,пат/сапр), стафиококки(гроздь,пат/сапр), сарцины(пакеты, сапр). 2. Палочковид.мо(подвиж/неподвиж)Подгруппы: Бактерии(нет спор)- рожа, бруцеллез, листериоз Бациллы(бациллярные споры, т.е. не более поперечного сечения, клетка форму не меняет) Кластригии(споры кластригиальные,>сечения) Спора может располагаться центрально, субтерминально и терминально. 3. Извитые м-о(подвижны) Подгруппы: Вибрионы (, V или S, пат/сапр) Спириллы (до 6 крупных завитков) Спирохеты (10 и более мелких завитков) -кристоспиры -трепонемы -лептоспиры
Структурные компоненты бактериальной клетки делят на основные и временные. Основные структуры – это клеточная стенка, цитоплазматическая мембрана с ее производными, цитоплазма с рибосомами и различными включениями, нуклеоид. Временные компоненты: капсула, жгутики, ворсинки, эндоспоры. Эти компоненты образуются лишь на определенных этапах жизненного цикла бактерий, а у некоторых видов отсутствуют полностью. Клеточная стенка. Важный структурный элемент бактериальной клетки, находится между цитоплазматической мембраной и капсулой, у бескапсульных бактерий – это внешняя оболочка клетки. Выполняет ряд функций: · защищает бактерии от осмотического шока и других повреждающих факторов; · определяет форму бактерий; · участвует в метаболизме; · несет на своей поверхности поверхностные антигены и специфические рецепторы для фагов. Толщина клеточной стенки от 10 до 100 нм, она содержит от 5 до 50% сухого вещества клетки. Основным компонентом клеточной стенки является пептидогликан или муреин – опорный полимер сетчатой структуры, образующий ригидный наружный каркас клетки. Специфика химического состава и ультраструктура клеточной стенки обусловливает способность прокариот окрашиваться по методу Грама в красный или фиолетовый цвет. Эту особенность широко используют для дифференцирования бактерий. Цитоплазматическая мембрана и ее производные. Цитоплазматическая мембрана (плазмолемма) – это полупроницаемая липопротеидная структура бактериальной клетки, отделяющая цитоплазму от клеточной стенки. Цитоплазматическая мембрана представляет собой белково-липидный комплекс, состоящий на 50…75% из белков и 15…20% из липидов. Цитоплазматическая мембрана выполняет ряд функций: · является осмотическим барьером клетки; · контролирует поступление питательных веществ и выход наружу продуктов метаболизма; В процессе роста клетки цитоплазматическая мембрана образует многочисленные инвагинаты, формирующие внутрицитоплазматические мембранные структуры. Локальные инвагинаты получили название мезосом. Они хорошо выражены у грамположительных бактерий, хуже – у грамотрицательных и плохо – у риккетсий и микоплазм. Мезосомы, как и цитоплазматическая мембрана, представляют собой центры дыхательной активности бактерий, поэтому их иногда называют аналогами митохондрий. Цитоплазма. Цитоплазма – это содержимое бактериальной клетки, ограниченное цитоплазматической мембраной. Состоит из цитозоля (гомогенная фракция, включающая растворимые компоненты РНК, ферменты, продукты метаболизма) и структурных компонентов (рибосомы, внутрицитоплазматические мембраны, включения, нуклеоид). Рибосомы – органоиды, осуществляющие синтез белка. Состоят из белка и РНК. Одна бактериальная клетка содержит от 5000 до 50 000 рибосом, которые посредством иРНК объединены в полисомы – агрегаты, состоящие из 50…55 рибосом, обладающих высокой белоксинтезирующей активностью. В цитоплазме бактерий присутствуют (непостоянно) различного типа включения: твердые, жидкие, газообразные, с белковой мембраной и без нее. Значительная их часть представляет собой запасные питательные вещества и продукты клеточного метаболизма. К запасным питательным веществам относятся: полисахариды, липиды, полифосфаты, отложения серы и др. К включениям, окруженным мембраной, также относятся газовые вакуоли (аэросомы), которые снижают удельную массу клеток. Такие образования встречаются у водных прокариот. Нуклеоид – ядро у прокариот. Состоит из одной замкнутой в кольцо двуспиральной нити ДНК, которую рассматривают как одиночную бактериальную хромосому. Нуклеоид не отделен от остальной части клетки мембраной, т.е. у него отсутствует ядерная оболочка. Нуклеоид не имеет митотического аппарата, и расхождение дочерних ядер обеспечивает рост цитоплазматической мембраны. L - формы бактерий и процесс их образования Это мутанты с измененным морфологическим признаком, частично или полностью утратившие способность синтезировать пептидогликан в клеточной стенке. Листер 1935 год. Образуются при воздействии L-трансфогенных агентов – антибиотиков, аминокислот, фермента лизоцима, УФ и рентген-луче. L-формы высокожизнеспособны, полиморфны(шары, нити). Различают стабильные и нестабильные формы. Стабильные лишены ригидной кл стенки и редко возвращаются к исходному состоянию, нестабильные(сферопласты) могут обладать элементами клеточной стенки и могут вернуться к исходному состоянию. L-трансформация – это процесс образования L-форм. Это способностью обладают почти все бактерии и многие патогенные м-о. |