Фармакопея 12 - 1 часть. Научный центр экспертизы средств медицинского применения
 Скачать 3.93 Mb.
|
|
Для заражения питательных сред допускается использование лиофилизированных тест-культур с точно известным содержанием количества микробных клеток (спор) в ампуле, которые после суспендирования в соответствующем растворителе (изотоническом растворе натрия хлорида 0,9% или дистиллированной воде) вносят в питательную среду без предварительного пересева. Таблица 33.3 Состав питательных сред для выращивания тест-культур, получения спор и определения активности антибиотиков
-------------------------------- <*> 1000 мл. Питательные среды и буферные растворы. В табл. 33.3 представлен состав сред, используемых при определении активности антибиотиков. Для приготовления сред N 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 13, 14, 15, 16 применяют ферментативный гидролизат биомассы микроорганизмов без оболочек. Методика приготовления состоит в следующем: 5 г сухого ферментативного гидролизата размешивают в 1 л дистиллированной воды, прибавляют агар-агар, расплавленный в открытом котле или автоклаве текучим паром или под давлением 0,05 МПа и температуре (111 +/- 1) град. C в течение 30 мин. В случае необходимости в среду прибавляют соли в количестве, указанном в прописи сред; pH сред определяют потенциометрически со стеклянными электродами или колориметрически. pH корригируют хлористоводородной кислотой или раствором натрия гидроксида. Готовые среды разливают в соответствующую посуду и стерилизуют в автоклаве при 0,1 МПа и температуре (120 +/- 1) град. C в течение 15 мин. Мясо-пептонный бульон (среда N 1) готовят на водопроводной воде обычным способом, изложенным в руководствах по микробиологии. Примечания 1. Количество агар-агара в средах указано для цилиндрочашечной модификации. В случае применения лунок количество агар-агара увеличивают до 20-25 г на 1000 мл среды. 2. Допускается уменьшение или увеличение содержания агар-агара в средах в зависимости от его качества. 3. Допускается использование взамен сред с ферментативным гидролизатом биомассы микроорганизмов (без оболочек) сред с другими источниками аминного азота: а) сухих сред на основе сухого рыбного бульона. При использовании данной среды в отдельных случаях необходимо изменение посевной дозы тест-микроба и увеличение концентрации растворов стандартных и испытуемых образцов; б) сред на основе панкреатического гидролизата мяса (по Хоттингеру) глубокого расщепления. Среды N 6, 7, 8, 10 должны содержать 130-140 мг% аминного азота, а среды N 4, 5, 9, 13 - 30-35 мг% аминного азота. Для приготовления сред с гидролизатом мяса применяют дистиллированную воду. Панкреатический гидролизат мяса и среды на его основе готовят обычным способом, изложенным в руководствах по микробиологии. Условия проведения анализа на средах с панкреатическим гидролизатом не отличаются от условий проведения анализа на средах с ферментативным гидролизатом биомассы микроорганизмов без оболочек. При контроле активности антибиотиков применяются буферные растворы, состав которых приведен в табл. 33.4. Таблица 33.4 Состав буферных растворов
Приложение N 1 Вычисление ошибки логарифма активности испытуемого S проводится по lgCu общей фармакопейной статье "Статистическая обработка результатов химического эксперимента и биологических испытаний". 2 Сначала вычисляют величину дисперсии S , характеризующую разброс 0 значений d1, d2, d3, d4, d5 относительно прямой D = a + b lgC: 2 5 2 S = [SUM (di - (а + b x lg Ci)) ] : 3 0 i=1 -------------------------------------------------- / 2 _ _2 / S 5 (d - d ) / 0 1 U S S = / ----- (0,2 + -- + ------------------------------), lg CU / 2 n 2 5 2 5 2 \ / b b (5 SUM lg Ci - SUM lg Ci) \/ i=1 i=1 где: n - число параллельных испытаний величины Cu, приведенных в опыте с одной стандартной кривой; d - среднее значение диаметра зон задержки роста для испытуемого, | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||