Фармакопея 12 - 1 часть. Научный центр экспертизы средств медицинского применения
 Скачать 3.93 Mb.
|
|
│ Название │ При росте на плотной питательной │ При росте на жидкой │ При │ │ тест-микроба │ среде │ питательной среде │ микроскопическом │ │ ├──────────────────┬──────────────────┼────────────┬─────────────────┤ изучении мазка │ │ │ условия │ описание │ условия │описание культуры│агаровой культуры, │ │ │ выращивания │ культуры │выращивания │ │окрашенной по Граму│ ├──────────────────┼──────────────────┼──────────────────┼────────────┼─────────────────┼───────────────────┤ │Staphylococcus │Среда N 1, │Гладкие с ровными │Мясо- │Равномерное │Однородные по │ │aureus 209 Р │T град. (36 +/- 1)│краями колонии, с │пептонный │помутнение │величине и │ │ │град. C, │равномерной │бульон, │бульона без │расположению в виде│ │ │18-20 ч, затем при│золотистой │рН 7,2-7,4, │пленки и │гроздьев кокки с │ │ │комнатной │пигментацией │18-20 ч │слизистого осадка│хорошо выраженной │ │ │температуре 24 ч │ │ │на дне │грамположительной │ │ │ │ │ │ │окраской │ ├──────────────────┼──────────────────┼──────────────────┼────────────┼─────────────────┼───────────────────┤ │Candida utilis │Среда N 3, │Круглые, кремового│МПБ, │Рост в виде │Овальные, иногда с │ │ЛИА-01 │T град. (30 +/- 1)│цвета с матовой │pH 7,2-7,4 │равномерной мути │отростками клетки; │ │ │град. C, │поверхностью │с 1% │и осадка на дне │расположены │ │ │48 ч │колонии с ровными │глюкозой, │ │отдельно, цепочками│ │ │ │краями │18-20 ч │ │или группами │ ├──────────────────┼──────────────────┼──────────────────┼────────────┼─────────────────┼───────────────────┤ │Bacillus subtilis,│Среда N 1, │Колонии │МПБ, │Рост в виде │Палочки с │ │var. Л │T град. (36 +/- 1)│желтоватого цвета,│pH 7,2-7,4, │пленки с осадком │закругленными │ │ 2 │град. C, │круглой формы, │18-20 ч │на дне │краями, │ │ │18-20 ч │влажно блестящие с│ │ │располагающиеся │ │ │ │шагреневой │ │ │отдельно и │ │ │ │поверхностью, │ │ │цепочками с хорошо │ │ │ │слегка │ │ │выраженной │ │ │ │зазубренными │ │ │грамположительной │ │ │ │краями и │ │ │окраской │ │ │ │приподнятым │ │ │ │ │ │ │центром │ │ │ │ ├──────────────────┼──────────────────┼──────────────────┼────────────┼─────────────────┼───────────────────┤ │Bacillus subtilis │Среда N 1, │Мелкие сероватые │МПБ, │Рост в виде │Тонкие палочки, │ │ATCC 6633 │T град. (36 +/- 1)│колонии с зубчатым│рН 6,8-7,0, │пленки с осадком │располагающиеся │ │ │град. C, │краем │18-20 ч │на дне │отдельно или │ │ │18-20 ч │ │ │ │цепочками, с хорошо│ │ │ │ │ │ │выраженной │ │ │ │ │ │ │грамположительной │ │ │ │ │ │ │окраской │ ├──────────────────┼──────────────────┼──────────────────┼────────────┼─────────────────┼───────────────────┤ │Bacillus cereus, │Среда N 2, │Шероховатые │МПБ, │Морщинистая │Палочки с │ │var. mycoides 537 │T град. (36 +/- 1)│колонии с краем, │pH 7,8-8,0, │пленка; вся среда│закругленными │ │ │град. C, │сформированным из │18-20 ч │прозрачная, без │концами, │ │ │18-20 ч │переплетающихся │ │осадков │располагающиеся │ │ │ │волокон │ │ │отдельно или │ │ │ │ │ │ │цепочками, с хорошо│ │ │ │ │ │ │выраженной │ │ │ │ │ │ │грамположительной │ │ │ │ │ │ │окраской │ ├──────────────────┼──────────────────┼──────────────────┼────────────┼─────────────────┼───────────────────┤ │Bacillus cereus, │Среда N 1, │Гладкие колонии с │МПБ, │Равномерное │Тонкие с │ │var. mycoides HB │T град. (36 +/- 1)│ровными краями и │pH 6,8-7,0, │помутнение │закругленными │ │ │град. C, │сферической │18-20 ч │бульона без │концами палочки, │ │ │18-20 ч │поверхностью │ │образования │располагающиеся │ │ │ │ │ │пленки и осадка │отдельно или │ │ │ │ │ │ │короткими │ │ │ │ │ │ │цепочками, с хорошо│ │ │ │ │ │ │выраженной │ │ │ │ │ │ │грамположительной │ │ │ │ │ │ │окраской │ ├──────────────────┼──────────────────┼──────────────────┼────────────┼─────────────────┼───────────────────┤ │Bacillus pumilus │Среда N 1, │Мелкие серовато- │МПБ, │Равномерное │Тонкие, мелкие │ │NCTC 8241 │T град. (36 +/- 1)│голубого цвета │pH 7,2-7,4, │помутнение │палочки с │ │ │град. C, │колонии с │18-20 ч │бульона без │закругленными │ │ │18-20 ч │зазубренными │ │образования │концами, │ │ │ │краями и │ │пленки и осадка │располагающиеся │ │ │ │приподнятым │ │ │отдельно или │ │ │ │центром │ │ │короткими │ │ │ │ │ │ │цепочками, с хорошо│ │ │ │ │ │ │выраженной │ │ │ │ │ │ │грамположительной │ │ │ │ │ │ │окраской │ ├──────────────────┼──────────────────┼──────────────────┼────────────┼─────────────────┼───────────────────┤ │Bordetella │МПА, │Мелкие, мутные, │МПБ, │Заметное │Одиночные, │ │bronchiseptica │pH 7,2-7,4 │белые, слегка │pH 7,2-7,4 │помутнение, серая│короткие, тонкие │ │ATCC 4617 │T град. (36 +/- 1)│выпуклые, │ │пленка, тягучий │палочки с хорошо │ │ │град. C, │фарфоровидные │ │осадок │выраженной │ │ │18-20 ч │колонии │ │ │грамотрицательной │ │ │ │ │ │ │окраской │ ├──────────────────┼──────────────────┼──────────────────┼────────────┼─────────────────┼───────────────────┤ │Pseudomonas │МПА, │Широкие, │МПБ, │Заметное │Одиночные палочки │ │aeruginosa NCTC │pH 7,2-7,4, │расплывчатые, │pH 7,2-7,4 │помутнение, │либо короткие │ │2134 │T град. (36 +/- 1)│прозрачные с │ │толстая пленка, │цепочки с хорошо │ │ │град. C, │неровным краем │ │среда может │выраженной │ │ │18-20 ч │колонии │ │приобретать │грамотрицательной │ │ │ │ │ │желтовато-зеленую│окраской │ │ │ │ │ │окраску │ │ └──────────────────┴──────────────────┴──────────────────┴────────────┴─────────────────┴───────────────────┘ Шесть стерильных цилиндров единого размера и массы, высотой (10,0 +/- 0,1) мм и внутренним диаметром (6,0 +/- 0,1) мм, из нержавеющей стали или алюминия расставляют на поверхности засеянной среды на равном расстоянии друг от друга и от края чашки. Вместо цилиндров могут быть использованы лунки диаметром от 6 до 8 мм, сделанные в толще агара с помощью стерильного сверла, либо другого соответствующего приспособления. В цилиндры или лунки каждой чашки вносят равные объемы рабочих растворов стандартного и испытуемого образцов. Основные растворы стандартных и испытуемых образцов готовят в стерильных растворителях с концентрацией 1 мг/мл. Затем из основных растворов в зависимости от применяемого варианта метода диффузии в агар (трехдозного или с построением стандартной кривой) готовят рабочие растворы трех или одной концентраций испытуемого образца и растворы трех или пяти концентраций стандартного образца. Рабочие растворы испытуемых образцов готовят из основных растворов таким образом, чтобы их концентрации не имели существенных отличий от концентраций раствора стандартного образца. Для уменьшения влияния колебаний во времени между закапыванием растворов, используемых в опыте, рекомендуется после их внесения выдерживать чашки при комнатной температуре в течение 1-2 ч. Затем чашки инкубируют при температуре (36 +/- 1) град. C в течение 16-18 ч. Диаметры зон угнетения роста тест-микроба при помощи соответствующих приборов измеряют с точностью до 0,1 мм. Определение антимикробной активности антибиотиков с использованием трехдозного варианта метода диффузии в агар. Для проведения испытания готовят три раствора стандартного образца (С1, С2, С3) и три раствора испытуемого образца (И1, И2, И3). Концентрации растворов, содержащих малую, среднюю и большую дозы, должны находиться между собой в кратном соотношении (1:2:4). При необходимости это соотношение может быть изменено. Концентрация раствора С2 должна быть близка к контрольной концентрации раствора стандартного образца, указанной в табл. 33.2. Все растворы стандартного и испытуемого образцов вносят в цилиндры или лунки одной чашки Петри таким образом, чтобы растворы с большими концентрациями не соприкасались между собой. Предлагаемый вариант закапывания - С1И3С2И1С3И2. Число чашек, используемых в каждом опыте, должно быть достаточным для обеспечения статистической достоверности результатов, но не менее 6 чашек. Последовательность внесения растворов стандартного и испытуемого образцов в цилиндры или лунки каждой чашки должна быть следующей: первым вносят раствор с малой концентрацией стандартного образца (С1) и соответствующий раствор испытуемого образца (И1). Затем растворы со средней концентрацией (С2 и И2), последними вносят растворы с большими концентрациями (С3 и И3). Расчет активности и дисперсионный анализ при использовании трехдозного варианта метода диффузии в агар осуществляется в соответствии со статьей "Статистическая обработка результатов химического эксперимента и биологических испытаний". Растворы определенных концентраций стандартного s u (С) и испытуемого (И) образцов обозначены D и D соответственно. Определение антимикробной активности антибиотиков с использованием стандартной кривой. Постановка опыта. В день постановки анализа из основного раствора готовят пять рабочих растворов стандартного образца С1, С2, С3, С4, С5 с концентрациями, увеличивающимися в геометрической прогрессии (Z), обычно в соотношении 1:1,25. Средняя концентрация (С3) является контрольной и должна быть близка к концентрации, указанной в табл. 33.2: концентрация С1 - наименьшая, С5 - наибольшая. Для исследования растворов каждой концентрации (кроме контрольной) используют по три чашки. Раствор контрольной концентрации С3 закапывают в три цилиндра (или лунки) каждой из взятых в опыт чашек, в три другие цилиндра (лунки) закапывают раствор одной из концентраций стандартного образца, чередуя его с раствором контрольной концентрации. Таким образом, для построения стандартной кривой используют 12 чашек. Таблица 33.2 Тест-микроорганизмы и условия для биологического определения активности антибиотиков
| ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||