Темы и лекции 1 модуля. Обычные Bacillus subtilis 0,70,8x23 Escherichia coli 0,31х16 Staphylococcus aureus 0,51,0 Thiobacillus thioparus 0,5х13 Rickettsia prowazeki 0,30,6x0,82 Мелкие
 Скачать 2.33 Mb.
|
|
Таинственный мир бактерий, риккетсий, вирусов, грибов окружает нас повсюду. Микробы сопровождают нас от рождения до смерти. В биоценозах человека обитает 1014-1015 микроорганизмов, которые приходятся на 1013 клеток организма. То есть на каждую клетку человека приходится 10-100 микробных клеток. Нормальная микробная флора ЖКТ насчитывает 500 видов Несмотря на значительные научные достижения наши знания микромира по-прежнему недостаточны. Из всех существующих на планете микроорганизмов идентифицировано всего лишь 15%. Микробы – мельчайшие живые существа. Размеры бактериальных клеток исчисляются в микрометрах Крупные Achromatium oxaliferum 5-33х15-100 Beggiatoa alba 2-10х1-50 Cristispira pectinis 1,5х36-72 Macromonas mobilis 6-14х10-30 Thiovulum majus 5-25 Spirochaeta plicatilis 0,2-0,7х80-250 Обычные Bacillus subtilis 0,7-0,8x2-3 Escherichia coli 0,3-1х1-6 Staphylococcus aureus 0,5-1,0 Thiobacillus thioparus 0,5х1-3 Rickettsia prowazeki 0,3-0,6x0,8-2 Мелкие Mycoplasma mycoides 0,1х0,25 Bdellovibrio bacteriororus 0,3x1,2 Haemobarfonella muris 0,1x0,3-0,7 Wolbachia melophagi 0,3х0,6 Простые методы окраски Простые и сложные методы окраски микроорганизмов. Способы окраски спор, жгутиков, капсул, включений. Для окрашивания препаратов пользуются кислыми, щелочными и нейтральными анилиновыми красителями. Наиболее широкое применение нашли основной и кислый фуксин, метиленовый синий, генцианвиолет и везувин. Простой способ окраски мазков производится водным фуксином Пфейффера и метиленовым синим Леффлера. Готовят водный фуксин из фенолового фуксина Циля, разводя его дистиллированной водой в соотношении 1:10. Состав РАСТВОРА ФУКСИНА ЦИЛЯ: основной фуксин - 1 г; спирт этиловый 96 % - 10 мл; фенол кристаллический - 5 г; глицерин - несколько капель; вода дистиллированная - 100 мл. Метиленовый синий Леффлера готовят, прибавляя к 30 мл насыщенного раствора метиленового синего (10 г метиленового синего в 100 мл 96 % этилового спирта) 1 мл 1% NaOH или KOH и 100 мл дистиллированной воды. После окрашивания красители сливают, препарат промывают водой и высушивают между листками фильтровальной бумаги. На сухой мазок наносят каплю масла и микроскопируют с использованием иммерсионного объектива оптического микроскопа. Способность микробов воспринимать красители называется тинкториальными свойствами. При окраске щелочным метиленовым синим по Леффлеру (3-5 мин) гранулы волютина у дифтерийных коринебактерий приобретают темно-синий, а палочка - голубой цвет. Вопрос: метод окраски мазков по Цилю-Нильсену является простым? (Да/Нет) Сложные методы окраскиПри сложных методах окраски мазков применяют два-три различных по цвету красителя, что позволяет дифференцировать микробы и выявить некоторые нюансы в деталях их строения. К таким методам относят окраску по Граму, Цилю-Нельсену, Нейссеру, Бурри-Гинсу, Романовскому-Гимзе и некоторые другие. При окраске по НЕЙССЕРУ гранулы ВОЛЮТИНА у дифтерийных коринебактерий окрашиваются в сине-черный, а бактерия - в желтый цвет. Мазок окрашивают: 1) 1 мин уксуснокислым метиленовым синим (метиленовый синий - 0,1 г, спирт - 2 мл, ледяная уксусная кислота - 5 мл, дистиллированная вода - 100 мл); 2) сливают краситель и мазок промывают водой; 3) на 20- 30 с наносят раствор Люголя; 4) 1 -3 мин окрашивают везувином (прокипяченная и отфильтрованная взвесь 2 г везувина в смеси 60 мл спирта и 40 мл дистиллированной воды). Количественное содержание ПЕПТИДОГЛИКАНА, содержащегося в # стенке, определяет характер окраски бактерий и других прокариот по ГРАМУ. Те из них, которые содержат в клеточной стенке большое его количество (около 90 % пептидогликана), окрашиваются по Граму в сине-фиолетовый цвет и их называют грамположительными, все другие, содержащие в оболочке 5-20 % пептидогликана, - в розовый цвет и их называют грамотрицательными. Толщина слоя пептидогликана в клеточной стенке грамположительных бактерий в несколько раз больше, чем у грамотрицательных. Техника окраски по Граму: 1. Фиксированный мазок 1-2 мин окрашивают раствором генцианвиолета (генцианвиолет - 1 г, этанол 96 % - 10 мл, фенол кристаллический - 2 г, вода дистиллированная - 100 мл; по методу Синева его покрывают пропитанной тем же красителем полоской фильтровальной бумаги, которую смачивают 2-3 каплями воды). 2. Слив генцианвиолет (сняв полоску бумаги Синева), мазок 1 мин обрабатывают раствором Люголя и, не промывая водой, сливают его. 3. Обесцвечивают спиртом в течение 0,5 мин, промывают водой. 4. Окрашивают 1-2 мин фуксином Пфейффера. 5. Мазок ополаскивают водой и высушивают. Для выявления грамположительных КИСЛОТО- И СПИРТОУСТОЙЧИВЫХ микобактерий туберкулеза и лепры, которые из-за большого количества в клеточных оболочках жировосковых веществ, миколовой кислоты и других оксикислот непроницаемы для разведенных растворов красителей, используют окраску по методу ЦИЛЯ - НИЛЬСЕНА. Окрашивание их по этому способу достигается при помощи концентрированного фенолового фуксина Циля с подогреванием над пламенем горелки до закипания и отхождения паров. Окрашенные с применением термокислотной обработки микобактерии не обесцвечиваются слабыми растворами минеральных кислот и этилового спирта. Техника окраски. 1. Фиксированный мазок покрывают полоской фильтровальной бумаги, на которую наносят фуксин Циля, и несколько раз подогревают над пламенем горелки до появления паров, подливая краситель, далее бумагу снимают и промывают водой. 2. Препарат обрабатывают (обесцвечивают) 5 % раствором серной кислоты и промывают водой. 3. На мазок наливают водно-спиртовой раствор метиленового синего, спустя 3-5 мин промывают водой и высушивают. Кислотоустойчивые бактерии окрашиваются в интенсивно красный цвет, остальные виды микробов, обесцвечивающиеся в процессе обработки препарата кислотой, - в светло-синий. |