практикум по биохимии. Практикум по биологической химии, изданный в 1986 году, подвергся существенной переработке, а также дополнен новыми лабораторными работами в разделах белки, липиды,
 Скачать 1.79 Mb.
|
|
Сделать вывод о характере изменений кислотности желудочного сока. Указать причины появления молочной кислоты в желудочном соке и практическое значение определения исследуемых веществ. Практическое значение работы. Переваривание белков во многом зависит от кислотности желудочного сока. В норме общая кислотность равна 40-60 ед., содержание свободной соляной кислоты – 20-40 ед., связанной – 5-20 ед. При патологии кислотность желудочного сока может быть нулевой, повышенной или пониженной. Отсутствие соляной кислоты и пепсина (ахилия) часто наблюдается при злокачественных новообразованиях желудка. Пониженная кислотность (гипохлоргидрия) встречается при гипоацидном гастрите, иногда при язвенной болезни желудка. Повышенная кислотность (гиперхлоргидрия) имеет место при гиперацидном гастрите и часто сопровождается язвенной болезнью желудка и двенадцатиперстной кишки. Присутствие молочной кислоты указывает обычно на гипоацидный гастрит или рак желудка. В связи с этим определение кислотности желудочного сока и наличие молочной кислоты в нем имеет важное значение для диагностики желудочно-кишечных заболеваний. Работа 36. Определение кислотности желудочного сока диагностическим набором «Ацидотест» Реактивы. 25% соляная кислота, набор «Ацидотест». Оборудование. Штатив с пробирками (диаметр 11-13 мм), пипетки на 5 мл, мерные колбы на 200 мл. Материал. Контрольная и опытная моча. Метод основан на освобождении из принятого тест-драже красящего вещества, количество которого зависит от кислотности желудочного сока. Ход определения. После опорожнения мочевого пузыря обследуемый принимает 1-2 таблетки кофеина, который повышает диурез и усиливает желудочную секрецию. Через 1 час проводится опорожнение мочевого пузыря и полученная моча обозначается как «контрольная». После этого с небольшим количеством воды, без разжевывания, принимается 3 тест-драже. Через 1,5 часа повторно следует опорожнение мочевого пузыря и моча обозначается как «1,5-часовая». Как контрольная моча, так и полученная через 1,5 часа, разбавляется водой до 200 мл. Разбавленную мочу (контрольная и опытная) вносят в количестве 5 мл, добавляют 5 мл 25% раствора соляной кислоты. В пробирке, содержащей 1,5-часовую мочу (опытная проба) в присутствии красящего вещества, появляется окрашивание алого цвета. Интенсивность окрашивания тут же сравнивают с цветной шкалой, т.к. при стоянии цвет изменяется. Оценка результатов. Совпадение развившегося окрашивания разделению, обозначенному буквой «А» на цветной шкале указывает на наличие свободной соляной кислоты и нормальную кислотность желудочного сока, при более интенсивной окраске – гиперацидность, при окрашивании, соответствующему между разделениями «А» и «В» обозначает гипоацидность. Оформление работы. Сопоставить развившееся окрашивание с цветной шкалой и сделать вывод о характере кислотности желудочного сока. Работа 37. Гидролиз белка ферментами пищеварительного трактаПереваривание белка происходит с участием протеолитических ферментов желудка (пепсин и гастриксин) и кишечника (трипсин, химотрипсин, карбоксипептидазы А и В, аминопептидаза, эластаза и др.). Каждый из ферментов специфически гидролизует пептидные связи, образуемые определенными аминокислотами в полипептидной цепи перевариваемого белка (см. учебник, с.178-181). Оптимум рН действия протеиназ желудка находится в кислой области и равен 1,5-2,0 для пепсина и 3,0-3,5 для гастриксина, в то время как протеолитическая активность ферментов кишечника максимальна при рН 7,6-8,5. Исследование активности протеолитических ферментов проводится путем анализа скорости гидролиза добавленного белка или определения количества образующихся в ходе реакции пептидов и свободных аминокислот. Реактивы. Фибрин*; соляная кислота, 0,05 и 0,1 М растворы; гидроксид натрия, 0,4%-ный раствор; карбонат натрия, 0,4%-ный раствор; лакмусовая бумага. Оборудование. Штатив с пробирками; пипетки вместимостью 1 и 2 мл; термостат, отрегулированный на 38˚С. Материал.
а. Демонстрация гидролиза белка под действием пепсина. Метод основан на визуальном наблюдении скорости гидролиза белка пепсином, определяемой по растворению кусочков фибрина. Ход определения. Берут пять пробирок и вносят в первую 1 мл раствора пепсина, во вторую – предварительно прокипяченного раствора пепсина, в третью – раствора соляной кислоты (0,05 М), в четвертую и пятую – предварительно нейтрализованного гидроксидом натрия раствора пепсина. Во все пробирки, кроме пятой, помещают одинаковые небольшие кусочки фибрина и ставят пробы на 20-30 мин в термостат при 38˚С, после чего отмечают изменения, произошедшие с волокнами фибрина в первых четырех пробирках. Пятую пробирку охлаждают и нейтрализуют ее содержимое раствором соляной кислоты по лакмусовой бумажке. Затем приливают в пробирку 1 мл 0,1 М раствора соляной кислоты и добавляют небольшой кусочек фибрина. Пробу вновь помещают в термостат при 38˚С и через 20-30 мин отмечают изменения волокон фибрина. б. Демонстрация гидролиза белка под действием трипсина. Основа метода та же, что и при изучении действия пепсина. Ход определения. Берут три пробирки и наливают в одну из них 2 мл раствора карбоната натрия, в другую – дистиллированной воды и в третью – раствор соляной кислоты (0,1 моль/л). В первую и третью пробирки добавляют по 1 мл раствора трипсина (или панкреатина) и во вторую – 1 мл предварительно прокипяченного трипсина (или панкреатина). Перемешивают пробы встряхиванием. В каждую пробирку помещают по одинаковому кусочку фибрина и ставят их в термостат при 38˚С на 10 мин, следя за растворением фибрина. Отмечают изменения, происходящие с фибриновыми волокнами в ходе инкубации. Оформление работы. Результаты опытов оформить в виде таблицы.
| ||||||||