практикум по биохимии. Практикум по биологической химии, изданный в 1986 году, подвергся существенной переработке, а также дополнен новыми лабораторными работами в разделах белки, липиды,
 Скачать 1.79 Mb.
|
Рис. 5. Диализатор в рабочем состоянииЧерез час после начала диализа берут две пробы (по 10 капель) наружной жидкости (диализат). С одной стороны из них проводят биуретовую реакцию на белок, а с другой – реакцию на сульфаты, добавляя 2-3 капли хлорида бария. Проделывают пробы на белок и сульфаты с жидкостью внутри мешочка. Оформление работы. Результаты оформить в виде таблицы, отметив знаками «плюс» или «минус» наличие реакции:
В выводах отметить, какое свойство белка демонстрирует метод диализа и возможность его применения. Практическое значение работы. Метод анализа используется для отделения низкомолекулярных органических примесей и неорганических ионов при очистке белков, нуклеиновых кислот, полисахаридов и т.д. в биохимических исследованиях или при получении лечебных препаратов (например, белковых). Способ диализа положен в основу работы аппарата «искусственная почка», который применяется для очищения крови от природных низкомолекулярных «шлаков» и токсических соединений. Работа 5. Определение изоэлектрической точки белкаБелок как амфотерный полиэлектролит содержит положительные и отрицательные заряды, соотношение которых определяется количеством кислых и основных аминокислот в его макромолекуле. Заряженность молекулы белка является одним из факторов его устойчивости в растворах, так как мешает слипанию белковых частиц и выпадению их в осадок. На общий заряд макромолекулы белка влияет рН среды. Для каждого белка существует значение рН, при котором сумма положительных и отрицательных зарядов его равна нулю. Это состояние белка называется изоэлектрическим, а соответствующее такому состоянию значение рН называется изоэлектрической точкой (ИЭТ). В ИЭТ растворы белков неустойчивы и белки легко выпадают в осадок особенно в присутствии водоотнимающих веществ (этиловый спирт, ацетон и т.д.). Реактивы. Уксусная кислота, 0,2 М раствор; ацетат натрия, 0,2 М раствор; этиловый спирт, 96%-ный. Оборудование. Пипетки вместимостью 1 и 2 мл; штатив с пробирками. Материал. Казеин, 0,1%-ный раствор. Метод основан на способности растворенного белка (казеина) в изоэлектрической точке переходить в неустойчивое состояние и выпадать в осадок, что проявляется в выраженном помутнении раствора. При добавлении этилового спирта (водоотнимающее средство) процесс осаждения белка ускоряется. Ход определения. В шести пронумерованных пробирках готовят буферные смеси с разным значением рН. Содержимое пробирок взбалтывают и в каждую добавляют по 0,5 мл раствора казеина. Приготовление буферных систем для определения ИЭТ казеина
| ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||