Главная страница

практикум по биохимии. Практикум по биологической химии, изданный в 1986 году, подвергся существенной переработке, а также дополнен новыми лабораторными работами в разделах белки, липиды,


Скачать 1.79 Mb.
НазваниеПрактикум по биологической химии, изданный в 1986 году, подвергся существенной переработке, а также дополнен новыми лабораторными работами в разделах белки, липиды,
Анкорпрактикум по биохимии.docx
Дата02.05.2017
Размер1.79 Mb.
Формат файлаdocx
Имя файлапрактикум по биохимии.docx
ТипПрактикум
#6494
страница7 из 39
1   2   3   4   5   6   7   8   9   10   ...   39

Рис. 5. Диализатор в рабочем состоянии



Через час после начала диализа берут две пробы (по 10 капель) наружной жидкости (диализат). С одной стороны из них проводят биуретовую реакцию на белок, а с другой – реакцию на сульфаты, добавляя 2-3 капли хлорида бария.

Проделывают пробы на белок и сульфаты с жидкостью внутри мешочка.

Оформление работы. Результаты оформить в виде таблицы, отметив знаками «плюс» или «минус» наличие реакции:


Определяемые компоненты

До диализа

После диализа


внешняя жидкость

внутренняя жидкость

внешняя жидкость

внутренняя жидкость

Белок SO42-













В выводах отметить, какое свойство белка демонстрирует метод диализа и возможность его применения.

Практическое значение работы. Метод анализа используется для отделения низкомолекулярных органических примесей и неорганических ионов при очистке белков, нуклеиновых кислот, полисахаридов и т.д. в биохимических исследованиях или при получении лечебных препаратов (например, белковых). Способ диализа положен в основу работы аппарата «искусственная почка», который применяется для очищения крови от природных низкомолекулярных «шлаков» и токсических соединений.


Работа 5. Определение изоэлектрической точки белка



Белок как амфотерный полиэлектролит содержит положительные и отрицательные заряды, соотношение которых определяется количеством кислых и основных аминокислот в его макромолекуле. Заряженность молекулы белка является одним из факторов его устойчивости в растворах, так как мешает слипанию белковых частиц и выпадению их в осадок. На общий заряд макромолекулы белка влияет рН среды. Для каждого белка существует значение рН, при котором сумма положительных и отрицательных зарядов его равна нулю. Это состояние белка называется изоэлектрическим, а соответствующее такому состоянию значение рН называется изоэлектрической точкой (ИЭТ). В ИЭТ растворы белков неустойчивы и белки легко выпадают в осадок особенно в присутствии водоотнимающих веществ (этиловый спирт, ацетон и т.д.).
Реактивы. Уксусная кислота, 0,2 М раствор; ацетат натрия, 0,2 М раствор; этиловый спирт, 96%-ный.

Оборудование. Пипетки вместимостью 1 и 2 мл; штатив с пробирками.

Материал. Казеин, 0,1%-ный раствор.
Метод основан на способности растворенного белка (казеина) в изоэлектрической точке переходить в неустойчивое состояние и выпадать в осадок, что проявляется в выраженном помутнении раствора. При добавлении этилового спирта (водоотнимающее средство) процесс осаждения белка ускоряется.

Ход определения. В шести пронумерованных пробирках готовят буферные смеси с разным значением рН. Содержимое пробирок взбалтывают и в каждую добавляют по 0,5 мл раствора казеина.

Приготовление буферных систем для определения ИЭТ казеина





№ пробирки

Состав буферной смеси, мл


рН смеси

0,2 М CH3COOH

0,2 М CH3COONa

1

1,9

0,1

3,4

2

1,8

0,2

3,8

3

1,4

0,6

4,4

4

1,0

1,0

4,7

5

0,6

1,4

5,1

6

0,2

1,8

5,7
1   2   3   4   5   6   7   8   9   10   ...   39


написать администратору сайта