|
Деньковский - судебная медицина. Программа поддержки книгоиздания СанктПетербурга авторы руководства проф ар. Деньковскии в. С. Житков, доц кн. Калмыков
Изосерологическая система Р В
1927 г. открыли в эритроцитах антиген Р, и всех людей подразделили еще на 2 группы в зависимости от наличия или отсутствия этого антигена. В настоящее время установлены 5 групп в этой системе Pi, Рг, Рг, Р, р. В распоряжении экспертов имеется только одна сыворотка анти-Pi. Хотя антиген Pi малоустойчив, его все же можно выявлять в пятнах крови небольшой давности. Для этого обычно используют реакцию абсорбции-элюции.
Изосерологическая система резус. В 1940 г. установили, что эритроциты большинства людей имеют антиген, присущий также крови обезьян, поэтому он получил название резус-фактора. На основании наличия или отсутствия его, всех людей можно подразделить на две группы Rho (D + ) и Rho (D—) или rh(d). Дальнейшими исследованиями было установлено, что существует несколько разновидностей резус-факто
ра: D, С, C
w
, E, d, се и некоторые другие. Для выявления антигена Rh
0
(D) в пятнах крови оказалась пригодной только специально разработанная модификация реакции абсорбции-элю
ции [Гальцева ЕЕ, 1974]. Другие изосерологические системы Открытие резус-фактора повлекло за собой усиленное изучение антител, возникающих при повторных пе
реливаниях крови, а также у женщин при беременности. Таким способом были открыты изосерологические системы Ласерен, Льюис, Келл, Даффи,
Кидд, Диего. Названия этих систем даны по фамилии лицу которых впервые были выявлены антитела на антигены этих систем. Наибольшее судебно-медицинское значение имеет система Льюис, антигены которой можно выявлять в пятнах крови реакциями количественной абсорбции и абсорбции-элюции. Сывороточные системы (группы. При изучении белковых компонентов сыворотки крови человека были выявлены различия в сывороточных белках разных людей. Оказалось, что всех людей можно подразделить на группы по белкам сыворотки также, как это можно сделать по антигенам эритроцитов. Полиморфизм белков сыворотки проявляется, главным образом, в различной электрофоретической подвижности ив различии антигенных свойства иногда в сочетании того и другого. В настоящее время хорошо изучены сывороточные системы иммуноглобулинов (Gm, InV или Km), гапто- глобина (Нр), группоспецифического компонента (Gc), липопротеинов (Ag,
Lp, Ld), протеазного ингибитора (Pi), трансферрина (Tf), различных компонентов комплемента (Сз, С, фактора пропердина (Bf) и др. Исследование сывороточных систем, наряду с эритроцитарными изо- серологическими системами, может быть использовано для решения вопроса о возможности или невозможности происхождения следов крови от определенных лиц. Особенно большое значение приобрели системы иммуноглобулинов с которыми связаны антигены Gm и InV. Антигены Gm и InV очень устойчивы к внешним воздействиями могут быть выявлены через месяцы и даже годы после образования пятен крови. Для их выявления необходимо очень небольшое количество материала пятна. Кроме того, система Gm отличается большим полиморфизмом, в
15 Под ред. А. А. Матышева
449
СУДЕБНО-БИОЛОГИЧЕСКАЯ ЭКСПЕРТИЗА ней известны около 20 различных антигенов. Сейчас широко используются антигены G m ( l ) , Gm(2), Gm(3). В последние годы в экспертной практике все чаще стали определять в пятнах крови группы гаптоглобина. По системе гаптоглобина всех людей делят на 3 группы Нр 1-1, Нр 2-1 и
Нр 2-2. Определение проводят при помощи электрофореза в крахмальном, агар-крахмальном и полиакриламид- ном гелях. После разделения фракций гаптоглобина в геле их проявляют бензидиновой реакцией. Лучшие результаты дает электрофорез в полиакриламидном геле. При этом возможно получать хорошие результаты с пятнами крови давностью до 1 мес. Убедительных результатов по выявлению в пятнах крови других сывороточных факторов пока не получено. Австралийский антиген (антиген
НВ). В 1965 г. в сыворотке жителя Австралии был выявлен антиген, который позднее стали находить и у других лиц. Его частота в средних широтах — 1—2%, в жарких странах — до
10%. В отличие от других сывороточных антигенов, австралийский антиген не передается но наследству, так как он связан с вирусным гепатитом В. Устойчивость антигена в пятнах крови (до 5—7 мес) позволяет использовать его для установления возможности происхождения следов крови оттого или иного лица. Разработана методика одновременного обнаружения антигена гепатита В и установления видовой принадлежности крови в следах [Кисин МВ. и др, 1981). Ферментные системы крови. В
1957—1959 гг. было установлено, что наследственный полиморфизм свойствен многим эритроцитарным и сывороточным ферментам человека. Доказано, что многие ферменты у разных людей встречаются в виде изоферментов. Они катализируют одни и те же реакции, но отличаются электрофоретической подвижностью и активностью своих фракций. Наибольшее судебно-медицинское значение имеют эритроцитарные ферментные системы кислая фосфатаза (КФ), фос- фоглюкомутаза (ФГМ), аденилатки- наза ( А Ка де но з инд е зам и наз а АДА, глутаматпируватаминотранс- фераза (ГПАТ), 6-фосфоглюконатде- гидрогеназа (6-ФГД), эстераза D
(3cD) и некоторые другие. По каждой системе изоферментов всех людей можно разделить на группы, аналогичные изосерологическим, сывороточными лейкоцитарным группам. Методика определения изоферментов состоит из двух этапов. Напер вом этапе гемолизаты исследуемых эритроцитов подвергают электрофоретическому разделению в крахмальном или полиакриламид ном геле первый считается более щадящим по отношению к лабильным ферментам. На втором этапе проводят выявление в геле фракций фермента. К сожалению, только некоторые изоферменты хорошо сохраняются в пятнах крови. Наибольшей устойчивостью отличается АК (до 11 мес. Удовлетворительно сохраняются и выявляются ФГМ и КФ (до 1—2 мес. При исследовании пятен крови вместо гемолизатов берут вытяжки из пятен. Оценка результатов имеет дополнительные трудности, так как некоторые фракции выявляются нечетко. Это не ведет к ошибочному заключению, если имеется для сравнения достаточное число контролей. В экспертной практике изоферменты пока определяют лишь в некоторых лабораториях. Система лейкоцитарных антигенов (HLA). Эта самая полиморфная наследственно детерминированная система включает около 90 антигенов. Они имеются на мембранах всех ядро- содержащих клеток человека и играют большую роль при пересадках органов и тканей (антигены гистосовместимо- сти). Раскрытие законов наследования антигенов этой системы позволило использовать ее при экспертизе спорного происхождения детей. Попытки
450
СУДЕБНО-МЕДИЦИНСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ КРОВИ И ЕЕ СЛЕДОВ выявления антигенов в пятнах крови еще не вышли из стадии экспериментального изучения. Выявление групповых антигенов, белков, ферментов позволяет исключить происхождение следов крови от определенного лица, если выявленные в пятне факторы не совпадают с групповой характеристикой этого человека. При совпадении набора факторов, выявляемых в пятне и у конкретного лица, можно лишь не исключить происхождения крови от последнего, так как все факторы и их сочетания имеют лишь групповой, а не индивидуальный характер. Широкие перспективы установления индивидуального происхождения следов крови открывает метод геномной дактилоскопии который основан на исследовании гипервариабельных участков ДНК (см. гл. 47). Объектами судеб
но-медицинского исследования этим методом могут быть не только следы крови, но и следы спермы, влагалищного секрета, а также вырванные волосы и частички органов и тканей. Подобные экспертизы уже внедрены в практику. РЕШЕНИЕ ДРУГИХ ВОПРОСОВ ПРИ ИССЛЕДОВАНИИ ПЯТЕН КРОВИ Установление половой принадлежности крови в пятнах Для решения вопроса о возможной принадлежности крови тому или иному лицу может быть использовано установление половой принадлежности крови в тех случаях, когда обвиняемый в преступлении и его жертва являются представителями неодинакового пола. Метод основан на выявлении полового хроматина цитологическим исследованием (см. гл 44). Определение беременности по пятнам крови При расследовании преступлений против жизни и здоровья беременных женщина также по делам о криминальных абортах и детоубийствах, установление происхождения следов крови и некоторых других объектов от беременной женщины имеет важное значение. Для решения этого вопроса может быть использован препарат «гравидадиагностикум», который применяется в клинической практике для быстрой диагностики беременности по моче. Методика исследования объектов судебно-медицинской экспертизы разработана МИ. Потаповым, ЛИ. Ба- риновой и ПЕ. Шиковым (1977). В основе методики лежит определение возникающего при беременности хо- рионгонадотропного гормона (ХГГ) при помощи иммунной сыворотки анти-ХГГ. Исследуемый объект, содержащий ХГГ, нейтрализует сыворотку анти-ХГГ и вызывает задержку агглютинации бараньих эритроцитов, сенсибилизированных гормоном. При отсутствии в объекте ХГГ наступает агглютинация сенсибилизированных эритроцитов под влиянием сыворотки анти-ХГГ. Реакция не является вполне специфичной для беременности, так как в редких случаях положительный результат может наблюдаться с объектом, происходящим от пожилых мужчин и женщина также при некоторых заболеваниях лиц обоего пола. Поэтому при положительном результате реакции эксперт делает вывод, что не исключается происхождение объекта исследования от беременной женщины. При отрицательном результате от выводов воздерживаются, так как ХГГ, несмотря на свою устойчивость, может разрушаться при неблагоприятных воздействиях. В судебно-медицинской литературе известны работы по диагностике беременности и бывших родов на основании особенностей электрофоре- грамм лейцинаминопептидазы и ок- ситоциназы крови беременных женщин и родильниц. Эта методика пока не вошла в практику работы судебно- медицинских лабораторий. Установление регионального происхождения крови. В некоторых слу-
15- 451
СУДЕБНО-БИОЛОГИЧЕСКАЯ ЭКСПЕРТИЗА чаях возникает необходимость определить, произошло ли кровотечение в результате ранения кожи или имело место менструальное, носовое, желудочное, легочное, геморроидальное или какое-нибудь иное кровотечение. Определение регионального происхождения крови основывается, главным образом, на обнаружении при морфологическом исследовании различных примесей, свойственных тому или иному источнику кровотечения. Так, например, обычно указывают, что менструальное кровотечение можно доказать обнаружением в пятнах клеток маточного эпителия. Однако проведенные СИ. Любинской сравнительные исследования цитологической картины менструальной крови и выделений из влагалища в межменст
руальный период показали невозможность достоверной дифференциации менструальной крови и крови, излившейся из половых органов женщины при дефлорации, гинекологических заболеваниях и т. д. Возможно лишь установление происхождения крови из половых органов женщины (в том числе и менструальной. Такое заключение основывается на определении половой принадлежности крови в пятне выявлении клеток влагалищного эпителия, обладающих большим количеством гликогена в протоплазме и характерным для женщин половым хроматином в ядрах обнаружении характерной палочковой микрофлоры. К сожалению, этот метод нельзя использовать при исследовании тех предметов женского туалета, на которых могут быть следы вагинальных выделений, так как при попадании крови на участок одежды, загрязненной такими выделениями, ее можно принять за кровь, излившуюся из половых органов женщины. Определение давности образования пятен крови помогает установить или исключить связь кровяных следов с определенным происшествием. Этот вопрос нередко ставят перед экспертами лабораторий, однако в большинстве случаев он не может быть решен. Объясняется это тем, что степень определенных изменений пятна зависит не только от давности его образования, но и от условий, в которых находились кровяные пятна (температура, свет, влажность, свойства предмета-носите
ля пятна и т. д, которые почти никогда не могут быть учтены. В практической работе вопрос о давности следов крови обычно не решается. Определение количества жидкой крови, образовавшей пятно. Решение этого вопроса производится на основании определения сухого остатка крови и последующего пересчета его на жидкую кровь. Сухой остаток определяют либо сравнением одинаковых по площади участков пятна крови и предмета-носителя, либо путем извлечения крови из пятна щелочными растворами. Все эти методики позволяют производить определение лишь сиз вестной степенью точности. Установление принадлежности крови в пятнах младенцу или взрослому человеку. При расследовании случаев детоубийства, криминальных абортов может возникнуть необходимость определить, принадлежит ли кровь в следах на вещественных доказательствах плоду (младенцу) или взрослому человеку. Это определение может быть основано на различной устойчивости гемоглобина плода и взрослого человека к действию щелочей гемоглобин взрослых менее устойчив к щелочной денатурации, чем гемоглобин плода. Положительный результат исследования возможен только при небольшой давности следов крови. Гемоглобин плода и взрослого человека можно различать и другими методами, например, электрофорезом или применением специальных иммунных сывороток, способных дифференцировать стадиоспецифические формы гемоглобина. Эти методы пока не получили практического применения.
452
СУДЕБНО-МЕДИЦИНСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ ВЫДЕЛЕНИЙ. ЧАСТИЦ ТКАНЕЙ И ОРГАНОВ Для установления происхождения крови в пятнах от плодов, новорожденных и детей первых 2—5 нед жизни рекомендуют определять а-фетопро- теин Потапов МИ, Соловьева НА,
1981]. Это белок сыворотки крови, который вырабатывается в желточном мешке и печении который с й недели постнатального периода в сыворотке людей не обнаруживается. Вы-
ИССЛЕДОВАНИЕ ПЯТЕН СПЕРМЫ Исследование следов спермы занимает значительное место в работе судеб
но-медицинских лабораторий. Для выявления следов спермы чаще всего поступают одежда потерпевших и обвиняемых, несколько реже — разнообразные предметы с места происшествия, атак же мазки и тампоны из влагалища, ротовой полости и прямой кишки потерпевших. Исследование пятен, подозрительных на сперму, производится для решения двухосновных вопросов установления наличия спермы в пятнах и определения групповой специфичности для исключения или подтверждения возможности происхождения спермы от определенных лиц. Установление наличия спермы в пятнах На вещественных доказательствах не всегда легко обнаружить пятна спермы. Исследование в ультрафиолетовых лучах облегчает эти поиски. Пятна спермы дают бледно-голубую флюоресценцию, которая, однако, не является специфичной. Многие синтетические ткани обладают яркой бледно-го
лубой или почти белой флюоресценцией, что делает невозможным отыскание на них подозрительных на сперму пятен при помощи этого метода. являют этот белок реакцией преципитации в агаре с использованием Им- мунодиагностикума для первичного рака печении тератобластом». Уже название препарата показывает, что фе- топротеин может встречаться и у взрослых при ряде редких заболеваний. В заключении эксперта это обстоятельство должно быть учтено. Для обнаружения пятен спермы были предложены многочисленные микрокристаллические реакции, но затем оказалось, что они также неспе
цифичны. Широкое распространение получила реакция Флоранса, которая сейчас применяется редко. Для обнаружения следов, подозрительных на сперму, предложено использовать реакцию с соком из клубней картофеля [Барсегянц Л.О., 1965]. Картофельный сок вызывает агглютинацию эритроцитов человека любой группы. Вытяжка из пятна спермы инактивиру- ет соки тормозит реакцию агглютинации стандартных эритроцитов. Проба с картофельным соком получила широкое практическое применение. Однако неспецифичность реакции не позволяет использовать ее в качестве метода, доказывающего наличие спермы в пятнах. Для доказательства присутствия спермы в пятнах применяют морфологическое исследование обнаружение сперматозоидов. Для выявления их предложено многоразличных способов, которые можно подразделить в основном на две группы методы избирательной окраски сперматозоидов без извлечения их из пятна и методы окраски сперматозоидов после извлечения их из пятна. Из первой группы чаще всего употребляют метод окраски по Корен — Глава 42 СУДЕБНО-МЕДИЦИНСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ ВЫДЕЛЕНИЙ, ЧАСТИЦ ТКАНЕЙ И ОРГАНОВ 453
СУДЕБНО-БИОЛОГИЧЕСКАЯ ЭКСПЕРТИЗА
Стокису. Для этого вырезку из пятна препаровальными иглами расщепляют в капле раствора аммиака на предметном стекле. Затем препарат окрашивают эритрозином или другими красителями, отмывают от избытка краски и рассматривают под микроскопом при увеличении не менее чем враз. Для извлечения сперматозоидов из пятен чаще применяют способ А. К. Се- ропяна (1957). Был предложен способ выявления сперматозоидов в отпечатках семенных пятен насте кл е ЛИ. Девяткина, ГС. Юдина). Эти методики очень просты и во многих случаях дают хорошие результаты. Трудоемкость микроскопического исследования пятен спермы для обнаружения в них сперматозоидов, атак же возможность отсутствия сперматозоидов (азооспермия и лизис) заставляют судебных медиков не прекращать усилий по разработке новых методов, доказывающих наличие спермы в пятнах. Внимание многих исследователей привлекает метод определения кислой фосфатазы. Этот фермент в организме вырабатывается в основном предстательной железой и содержится в эякуляте в больших количествах, значительно превышающих содержание его в других жидкостях и выделениях человека. Количественное определение кислой фосфатазы в пятнах может быть при некоторых условиях использовано для доказательства семенного характера пятна [Чарный В.И., 1966]. Качественная реакция на кислую фос- фатазу может быть использована только как предварительная проба. Ряд исследователей пытаются использовать то обстоятельство, что винная кислота при определенных условиях может подавлять активность кислой фосфатазы многих биологических объектов, кроме спермы. На этом принципе разработана методика, которую можно использовать для доказательства наличия спермы в пятнах
[Зарецкая Е.Ф., Ачеркан Н.Н., 1980]. Однако специфичность этой реакции признается не всеми судебными медиками [Open J., 1982]. Для доказательства наличия спермы в пятнах без установления в них сперматозоидов можно использовать хроматографию на бумаге [Джала- лов Д.Д., 1974]. Обнаружение в пятне кислой фосфатазы, холина, спермина и аминокислот по отдельности не доказывает наличия спермы, однако в совокупности они могут подтвердить семенное происхождение пятна. После разделения компонентов спермы одну и туже хроматограмму последовательно обрабатывают для выявления холина и спермина, аминокислот, кислой фосфатазы. Методика применяется в практической работе, хотя и не отличается высокой чувствительностью и легкой воспроизводимостью результатов. В настоящее время изучают и другие методы для доказательства наличия спермы в пятнах. Делают попытки получить иммунные сыворотки, специфичные для спермы человека. При доказательстве наличия спермы морфологическим исследованием специально определять ее видовую принадлежность нет необходимости, так как при этом одновременно по форме и размерам сперматозоидов устанавливается принадлежность их человеку. Если же наличие спермы доказывается иным путем, то обязательно определение видовой специфичности любым вариантом реакции преципитации. Определение групповой специфичности спермы в пятнах. Групповую специфичность определяют почти во всех случаях исследования пятен спермы для решения вопроса о возможности или невозможности их происхождения от определенных лиц. Для этого пользуются реакцией абсорбции в тех же модификациях, что и для исследования пятен крови. Еще в 1924 г. было установлено, что групповые антигены Аи В содер-
454
СУДЕБНО-МЕДИЦИНСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ ВЫДЕЛЕНИИ. ЧАСТИЦ ТКАНЕЙ И ОРГАНОВ жатся в семенной жидкости. Позднее в сперме был выявлен антиген Н. Было также доказано присутствие антигенов АВН в слюне, носовой слизи, в выделениях из матки и влагалища, слезной жидкости, моче, молоке, желчи, поте и других жидкостях человеческого тела. Затем появились данные о том, что выделения некоторых людей различных групп крови не содержат агглютиногены. Таких людей назвали «невыделителями». Большинство же людей относятся к «вы делителям» (70—80%). Более поздние исследования показали, что резкой границы между этими группами людей провести нельзя, и что в выделениях «не выделителей» имеются слабовыраженные антигены, которые можно выявить более чувствительными методами. Для решения вопроса о возможности или невозможности происхождения спермы от определенного мужчины необходимо, помимо определения его группы, установить, является он «выде лителем» или «невыделителем». Для этого берут его слюну, высушивают на марле и затем определяют в ней агглютино гены количественной реакцией абсорбции. При выявлении в образце слюны агглютиногенов человека относят к категории «выделителей». При отрицательном результате нужно обязательно исследовать образец спермы прежде, чем отнести данное лицо к категории «невы делителей». Это обосновано тем, что в сперме агглютиногены могут быть выражены сильнее, чем в слюне. Категорию «выделительства» можно в некоторых случаях определить по крови, исследуя в ней антигены системы Льюис. Известно, что люди с группой Le (ab*) являются «выделителя ми», ас группой Le (a*b) — «невыде лителями». При группе Le (a - b) категория «выделительства» остается неустановленной. Этот способ определения «выделительства» может быть использован и при вскрытии трупов. В последнем случае можно также воспользоваться определением антигенов АВН в желчи и моче по методике Т.М.Масис(1971). Установление категории «выдели тельства» очень важно для правильного вывода о возможности происхождения следов спермы от определенного лица. Если группа спермы в пятне совпадает с группой крови подозреваемого мужчины, но последний является «невыделителем», можно исключить возможность происхождения спермы отданного лица. Для пояснения этого положения можно привести следующий случай из практики. Гр. К. заявила в милицию, что се изнасиловал находившейся у нее в гостях гр. П. При судебно-медицинском освидетельствовании потерпевшей на се белье были найдены пятна, подозрительные на следы спермы. Одежда потерпевшей была изъята следователем и направлена в судебном ед и ц и нс кую лабораторию, где было установлено, что на белье К. имеются следы спермы группы В(Ш). Кровь подозреваемого относилась к группе В(Ш), а потерпевшей к группе 0(1). На первый взгляд, результаты экспертизы не позволяли исключить происхождение спермы на одежде потерпевшей от гр. П. Однако исследование образцов слюны, а затем и спермы подозреваемого не выявило антигена В. На основании полученных результатов, было дано заключение, что пятна спермы, обнаруженные на белье гр. К, не могли произойти от гр. П, так как он является «невыдслителем». В последнее десятилетие для выявления антигенов АВН в пятнах спермы стали применять реакцию абсорбции- элюции, которая позволяет исследовать небольшие пятна и выявлять антигены не только у «выделителей», но и у «невы делителей». Однако выяснилось, что эта реакция нередко дает ложноотрицатель- ный результат, те. не выявляет сильные антигены «выделителей» из-за образования прочных недиссоциирующих комплексов антиген — антитело. Кроме того, эта реакция не позволяет использовать категорию «выделительства» для исключения возможности происхождения спермы от «невыделителей», так как она является качественной и не позволяет судить о силе антигена в пятне. В практической работе целесообразно использовать обе реакции по определенному плану [Гальцева ЕЕ, Чарный В.И., 1981]. Первоначально антигены в пятне исследуют количест- 455 СУДЕБНО-БИОЛОГИЧЕСКАЯ ЭКСПЕРТИЗА венной реакцией абсорбции, причем с минимальным количеством материала (1—2 ниточки из пятна. При этом могут быть выявлены сильные шггигены. Если они выявлены, то исследование на этом заканчивается. Если какой-либо антиген не установлен, то с теми же объектами проводят реакцию абсорбции-элюции для выявления слабых антигенов. Такая схема позволяет исследовать малые следы спермы, полностью устраняет опасность лож- ноотрицательного результата и расширяет экспертные возможности, благодаря суждению о силе выявленного антигена. Выводы о возможности или невозможности происхождения спермы от определенного лица во всех случаях делают на основании сопоставления результатов исследования групповой специфичности образцов слюны (а иногда и спермы) причастных к делу лиц и следов спермы на вещественных доказательствах. При этом обязательно учитывают возможное присутствие в пятнах спермы влагалищных выделений и крови. В сперме, помимо антигенов АВН, имеются независимо от категории вы- делительства» антигены изосерологиче- ской системы Льюис. Эти антигены могут быть выявлены в пятнах спермы, а также в пятнах влагалищных выделений и мочи количественной реакцией абсорбции. Следует иметь ввиду, что групповые характеристики различных выделений и крови одного итого же человека по системе Льюис могут между собою не совпадать. Поэтому в качестве образцов нужно обязательно исследовать те же выделения, что ив следах на вещественных доказательствах. ИССЛЕДОВАНИЕ ПЯТЕН ДРУГИХ ВЫДЕЛЕНИЙ Исследование пятен слюны Объектами экспертизы являются в подавляющем большинстве случаев окурки папирос и сигарет, найденные на месте происшествия. Иногда исследованиям подвергаются носовые платки, тряпки и другие предметы, которыми преступник закрывал рот жертве. Реже исследуют следы слюны на почтовых марках и клапанах конвертов. Возможно обнаружение слюны на посуде, использованной для питья, и даже на остатках пищи. Для доказательства наличия слюны в пятнах применяют методики, основанные на выявлении амилазы (птиалина, которая содержится в слюне в значительно больших количествах, чем в других биологических объектах. К пятну и контрольному участку пред мета-носителя прибавляют крахмал и инкубируют в термостате. Амилаза расщепляет крахмал и при последующем добавлении йода изменения окраски не наблюдается. В контрольном опыте происходит посинение за счет йод-крахмальной реакции. Условия реакции подобраны таким образом, что амилаза выявляется только в пятнах слюны [Барсегянц Л.О., 1961]. На окурках папирос и сигарет доказательства наличия слюны не требуется. В этих случаях уточняют лишь границы пятна наблюдением его в ультрафиолетовых лучах. Необходимость определения видовой принадлежности слюны возникает редко. Для этого используют чувствительный метод встречного иммуно- электрофореза. Для решения вопроса о возможности происхождения слюны от определенного лица проводят определение групповой специфичности по системе АВО. В слюне «выделителей» групповые антигены АВН легко выявляются количественной реакцией абсорбции. В слюне «невыделителей» антигены, как правило, можно выявить только реакцией абсорбции-элюции. Экспериментально доказано, что в следах слюны можно выявлять антигены изосерологической системы Льюис. Антигены Gm в слюне выявляются непостоянно. Исследования пятен пота Следственное значение имеют не столько сами по себе пятна пота, сколько связанное сними установление возможной 456
СУДЕБНО-МЕДИЦИНСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ ВЫДЕЛЕНИЙ, ЧАСТИЦ ТКАНЕЙ И ОРГАНОВ принадлежности разнообразных предметов (одежды, обуви, расчесок и др) определенному лицу по содержащимся в пото-жировых выделениях человека групповым антигенам АВН. Кроме того, следы пота необходимо учитывать как частый источник загрязнения пред
мета-носителя при исследовании следов крови и спермы на одежде. Для установления наличия пота в пятнах предложена биохимическая реакция на аминокислоту серии, которая в поте содержится в значительных количествах. Принцип реакции — окисление серина перйодатом натрия с образованием формальдегида, дающего цветную реакцию с хромотроповой кислотой [Барссгянц Л.О., 1963]. Эта методика не получила большого распространения из-за своей сложности. Гораздо проще серии в пятнах пота выявлять методом тонкослойной хроматографии по методике, предложенной М.В.Кисиным (1974). Техника аналогична исследованию следов крови. В качестве красителя применяют раствор нингидрина. Результаты специфичны только при использовании целых пластинок силуфола. Определять видовую принадлежность пота нет необходимости, хотя это и возможно методом встречного иммуноэлектрофореза. Выявление групповых антигенов
АВН в пятнах пота проводят как количественной реакцией абсорбции, таки реакцией абсорбции-элюции. Разработаны модификации реакции аб
сорбции-элюции для выявления антигенов системы АВО в пото-жировых следах рук непригодных для дактилоскопии, что дает дополнительное подтверждение возможности пребывания определенных лиц на месте преступления. Однако не все признают результаты такого определения достоверными из-за невозможности исключить влияние различных загрязнений рук. Исследование пятен мочи. Это — редкий объект экспертизы, исследуемый обычно в связи с половыми преступлениями. Следы мочи также должны приниматься во внимание при исследовании других объектов, так как содержащиеся в моче антигены АВН могут быть причиной ошибочных трактовок результатов. Установить наличие мочи в следах можно при помощи выявления креа- тинина путем образования нитрозо- креатинина и перевода его в берлинскую лазурь [Барсегянц ЛОВ практической работе чаще используют более чувствительный метод тонкослойной хроматографии, выявляя мочевину раствором парадиметилами- нобензальдегида Кисни МВ, 1974]. Видовую принадлежность мочи установить практически невозможно, так как она не содержит видоспецифиче- ских белков Групповую специфичность мочи по системе АВО устанавливают реакциями количественной абсорбции и абсорбции-элюции в зависимости от количества исследуемого материала и выраженности антигенов. Установление происхождения следов мочи от беременной женщины проводят путем выявления хорионго- надотропного гормона серологическим методом. Положительные результаты можно наблюдать с пятнами давностью в несколько лет. Исследование пятен секрета влагалища. Установление наличия секрета влагалища в пятнах производится путем выявления клеток влагалищного эпителия цитологическими методами см. гл. 44). В секрете влагалища содержатся групповые антигены АВН. Количество их в жидкой части секрета зависит от категории выдел ительства», выраженность антигенов в клеточных элементах не связана с этой категорией. Секрет влагалища нередко находится в пятнах спермы (так называемые смешанные пятна. Цитологическими методами можно подтвердить наличие выделений влагалища в пятнах спермы, но нельзя исключить их присутствия. Это обстоятельство затрудняет определение групповой специфичности спермы. Дифференцирование антигенов различных выделе
СУДЕБНО-БИОЛОГИЧЕСКАЯ ЭКСПЕРТИЗА нии возможно методом иммуно- флюоресценции. В этих случаях эксперт может сделать вполне обоснованные выводы о возможности или невозможности происхождения спермы и влагалищных выделений от определенных лиц. В пятнах секрета влагалища можно обнаружить хорионгонадотропный гормон, если они произошли от женщины со сроком беременности от 6 до 12— 16 нед. Доказана также возможность выявления антигенов системы Льюис, сывороточных систем Gm и InV. Исследование пятен кала. Необходимость в исследовании таких пятен чаще всего возникает в связи с расследованием половых преступлений. Наличие кала в пятнах устанавливается микроскопическим исследованием по обнаружению остатков переваренной и непереваренной пищи, характерной микрофлоры (Е. coli, энтерококки и др, яиц гельминтов. Установить видовую и групповую принадлежность калане удается из-за получения не специфических результатов. Исследование пятен молока и молозива, .10X1111, ОКОЛОПЛОДНОЙ ЖИДКОСТИ, сыровидной смазки, мекония производится чрезвычайно редко в связи с установлением беременности, бывших родов, аборта и при смерти новорожденных. Происхождение этих пятен устанавливают цитологическим исследованием путем обнаружения характерных для каждого объекта морфологических элементов. ИССЛЕДОВАНИЕ ЧАСТИЦ ТКАНЕЙ И ОРГАНОВ Ткани и органы являются сравнительно редким объектом судебно-ме дицинской экспертизы. При этом решают следующие вопросы установление органно-тканевой и видовой принадлежности тканей и органов, определение их групповой специфичности, определение половой принадлежности клеток, установление возможности происхождения органов и тканей от беременной женщины. Объектом экспертизы могут быть части расчлененных трупов или крупные останки при авиационных катастрофах, принадлежность которых человеку не вызывает сомнения. В таких случаях целью экспертизы является установление возможности происхождения отдельных частей от одного трупа или принадлежности останков конкретному человеку. Для этого проводят определение групповой специфичности и половой принадлежности объектов экспертизы, а также, при необходимости, их происхождение от беременной женщины. На экспертизу могут быть представлены мелкие частички тканей, а также органно-тканевые и клеточные наложения на орудиях травмы, природа которых не может быть установлена без специального исследования. В таких случаях перед экспертизой стоят все или почти все перечисленные выше вопросы. В редких случаях объектом экспертизы являются кулинарные изделия из мясных продуктов при их фальсификации, а также в связи с браконьерством, незаконным убоем или хищением скота. При этом решается вопрос о их видовой принадлежности. Установление органно-тканевой и половой принадлежности частичек тканей, органов и клеточных элементов производится цитологическими методами (см. гл. 44). Остальные вопросы решаются серологическими исследованиями. Определение видовой принадлежности тканей и органов. Исследуемые объекты измельчают (мягкие ткани — ножницами, кости — напильником) и экстрагируют изотоническим раствором натрия хлорида. При достаточном количестве материала вытяжки исследуют в реакции преципитации в агаре. Если размеры объекта ограничены, то целесообразно применять более чувствительную методику встречного им- муноэлектрофореза. 458
СУДЕБНО-МЕДИЦИНСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ ВОЛОС Определение групповой специфичности тканей и органов Антигены изосерологической системы АВО в тканях и органах человека впервые обнаружили в 1927 г. В последующем было установлено, что групповые антигены можно выявить практически во всех органах и тканях. Это используется в судебной медицине для решения вопроса о возможности или невозможности происхождения соответствующих объектов экспертизы от определенных лиц. В отношении выявления антигенов других систем данные различных авторов противоречивы. Однако в нео- бескровленных частях органов и тканей можно выявлять групповые факторы многих изосерологических и сывороточных систем. Доказана возможность выявления в тканях некоторых групповых изоферментов. В настоящее время в органах и тканях выявляют, главным образом, антигены системы АВО. Для этого используют количественную реакцию абсорбции. Однако при этом не всегда получаются отчетливые результаты из-за возможного невыявления слабых антигенов. Более чувствительной является реакция абсорбции-элюции. Значительные трудности возникают при определении групповой специ-
Волосы значительно реже исследуют в судебно-медицинских лабораториях, чем пятна крови и спермы. Почтив трети всех экспертиз волос исследуют объекты, изъятые с автомашин и других транспортных средств. Часто доставляются в лабораторию волосы, обнаруженные на месте различных происшествий, на одежде обвиняемых и потерпевших, на различных предметах, служивших орудиями травмы. Исследование волос в судебно-ме
дицинской лаборатории производится фи ч нос т и гнило ст но- измененных тканей. При этом происходит ослабление или разрушение антигенов и возникает опасность неспецифических явлений из-за микрофлоры. Некоторые исследователи считают, что предварительная фиксация объектов в формалине с тщательным последующим его отмыванием способствует повышениюдостоврености результатов исследования. Для выявления групповых антигенов АВН в гистологических и цитологических препаратах лучшие результаты обеспечивает реакция смешанной агглютинации [ Колы ш М.Ш.,
1977]. Для определения групповой специфичности изолированных клеток применяют метод иммунофлюо- ресценции. Установление происхождения органов и тканей от беременной женщины основывается на выявлении хори- онгонадотропного гормона серологическим методом. Этот гормон может быть выявлен в необескровленных тканях и органах, имеющих хорошую васкуляризацию. В незагнивших высохших тканях гормон выявляется в течение 3—4 нед, при загнивании — не более 1 нед. Методика мало чем отличается от исследования крови. для установления, являются ли присланные объекты волосами определения видовой принадлежности волос определения их регионального происхождения (с какой части тела человека волосы установления способа отделения волос от тела человека (вырваны они или выпали, отделены тупыми или острыми предметами, оборваны быстрым или медленным движением определения повреждений и изменений волос установления возможности или невозможности происхож-
Глава 43
СУДЕБНО-МЕДИЦИНСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ ВОЛОС
459
СУДЕБНО-БИОЛОГИЧЕСКАЯ ЭКСПЕРТИЗА дения волос от определенного лица определение сходства волос. Иллюстрацией значения судебно-меди цинского исследования волос для органов расследования служит следующий пример из практики. Со склада была совершена кража. Вор проник в помещение через окно. При осмотре места происшествия на металлической решетке окна был обнаружен небольшой пучок волосков, которые при исследовании оказались волосами с головы человека, сходными с волосами обвиняемого в краже Н. В процессе следствия Н. признался в совершении преступления и рассказал, что, вылезая из окна, он зацепился волосами за решетку. Исследование волос в судебно-ме дицинской лаборатории начинают с осмотра невооруженным глазом. При этом отмечают их форму, цвет, длину и другие особенности. Затем каждый волос изучают под микроскопом. Устанавливают характер и выраженность сердцевины, цвет, количество и распределение глыбок пигмента в корковом слое, особенности корневого и периферического концов, повреждения и изменения волоса. Изучают характер оптического края волоса. С помощью винтового окулярного микрометра измеряют его максимальную толщину. Для изучения характера расположения клеток кутикулы делают отпечатки волос на желатиновом слое фотопластинок, полистироле и т. п. На этом же отпечатке подсчитывают число линий рисунка кутикулы на определенном отрезке длины волоса. Форму поперечного среза волос, характер и расположение пигмента изучают также на поперечных срезах, которые изготавливают путем резки на микротоме целлоидиновых блоков с заключенными в них исследуемыми волосами. При необходимости проводят другие дополнительные методы исследования обесцвечивание пигмента, удаление воздуха из сердцевины, приготовление дисков сердцевины. Для решения вопроса о возможности происхождения волос человека оттого или иного лица проводят сравнительное исследование. В последние годы предложены новые разнообразные методики исследования волос определение прочности и эластичности гидравлическим динамометром определение относительной плотности гравиметрическим способом изучение флюоресценции в ультрафиолетовых лучах определение рефракции изучение степени пропускания света различными частями волос при помощи микрофотометрии; спектрографическое исследование изучение результатов химических и физико-химических воздействий на волосы определение групповой специфичности (по изосерологической системе АВО); установление половой принадлежности вырванных волос и некоторые другие Розанов АА., Туманов А.К., 1966; Кишиневский АН, 1968; Намоконова АН, 1977, и др. Большинство перечисленных методик находятся в стадии экспериментального изучения, некоторые из них внедряются в практику экспертизы. Являются ли присланные на экспертизу объекты действительно волосами определяют путем их микроскопического исследования. Волос имеет характерное строение, отличающее его от волокон растительного или искусственного происхождения. Он состоит из кутикулы, коркового вещества и сердцевины (мозгового вещества. Установив, что присланные на экспертизу объекты являются волосами, определяют принадлежат они человеку или животному. Волосы человека отличаются от волос животных строением сердцевины, коркового слоя и кутикулы. У человеческого волоса клетки кутикулы прилежат плотно, поэтому оптический край его имеет слабую зубча тость; линии рисунка кутикулы волнисты, сближены корковый слой более широкий, чем сердцевина сердцевина узкая, неравномерной ширины, часто прерывается, в тонких волосах отсутствует. У волос животных — заметное черепицеобразное расположено
СУДЕБНО-МЕДИЦИНСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ ВОЛОС
ние клеток кутикулы, оптический край имеет выраженную зубчатость; рисунки кутикулы более разнообразны корковый слой узкий, сердцевина широкая, равномерной ширины (рис. 159). В подавляющем большинстве экспертиз удается осуществить дифференцирование волос человека и животных. Однако определить вид животного, от которого произошли волосы, удается далеко не всегда (примерно в половине всех экспертиз. Для этого проводят сравнительное исследование с волосами из коллекции, которая должна быть в каждой лаборатории. Если установлено, что исследуемые объекты являются волосами человека, то необходимо определить, какой части тела они принадлежат. При этом учитывают все данные, полученные при их исследовании. В некоторых случаях приходится решать вопрос вырван волос или выпал. У вырванного волоса луковица жизнеспособная, состоит из жизнедеятельных клеток, на корневой части, как правило, сохраняются обрывки влагалищных оболочек. Выпавший волос имеет сухую, атрофированную луковицу без влагалищных оболочек. У отживающих волос на атрофированной луковице имеются остатки влагалищных оболочек. Различные повреждающие факторы оставляют на волосах своеобразные изменения. Наиболее часто приходится определять воздействие механических и температурных факторов. При ударах тупыми предметами в местах повреждения волоса может обнаруживаться его раздавливание, при этом он утолщается и разволокняется. Волосы, разрезанные острым орудием, имеют ровную или слегка зазубренную поверхность. Если волос разорван быстрым движением, то поверхность разрыва ровная, если медленным — то ступенчатая. Весьма характерны изменения волос при воздействии температурных факторов. Опаленная часть волоса буреет,
159. Микроскопическое строение и отпечаток кутикулы волоса человека (аи кролика (б. колбообразно вздувается, под микроскопом в ней видны пузырьки воздуха. При более продолжительном воздействии высокой температуры волосы обугливаются. Искусственно обесцвеченный волос (например, перекисью водорода) можно распознать по сохранившемуся в корневой части пигменту. По ряду признаков можно отличить также искусственно окрашенный волос. Важными нередко сложным является решение вопроса ос ход ст в е волос. Определяется именно сходство, а не тождество волос, так как волосы разных людей могут быть очень похожими. Для сравнения нужно брать волосы с одинаковых частей тела. При определении сходства волос учитывают все их характерные данные и особенности (длину,
461
СУДЕБНО-БИОЛОГИЧЕСКАЯ ЭКСПЕРТИЗА форму, цвет, толщину и др. В последние годы предложено использовать для этого результаты разнообразных физических, химических и биологических методик (например, количество линий рисунка кутикулы, результаты воздействия на волосы различных ОБЩИЕ СВЕДЕНИЯ Отдельные цитологические исследования уже давно применяют при су
дебно-медицинской экспертизе вещественных доказательств. Выявляя клеточные элементы в следах крови, пытались решать вопросы о ее региональном происхождении. Установление наличия спермы еще с прошлого века производится путем обнаружения сперматозоидов. Тем не менее, систематическое использование цитологических методов при экспертизе вещественных доказательств началось сравнительно недавно, когда появилась возможность по половому хроматину в ядрах клеток определять их половую принадлежность. В связи с этим резко возросло судебно-медицинское значение цитологических исследований. В настоящее время судебно-цитоло
гическая экспертиза является особой разновидностью экспертизы вещественных доказательств биологическими методами. В большинстве судебно-биолоппе- ских отделений судебно-медицинских лабораторий имеются эксперты-цитоло
ги, получившие специальную подготовку. В некоторых лабораториях организованы судебно-цитологические отделения. Вопросы, решаемые судебно-цн- толотческим исследованием
— установление половой принадлежности крови в следах на одежде обвиняемых и потерпевших, на разнообразных предметах с места происшествия слюны в следах, главным образом, химических веществ, групповую специфичность и половую принадлежность волос и т. да также признаки, присущие наиболее распространенным болезням волос человека трихоптилозу, узловатой ломкости, бифуркации, трихонодозу
[Юсуфов Р.М.Б., 1985]. на окурках папирос и сигарет, на почтовых конвертах и марках вырванных волос с клеточными элементами наружного корневого влагалища кусочков органов и тканей от расчлененных трупов частиц тканей и органов, клеточных элементов на орудиях механической травмы
— выявление на разнообразных предметах, главным образом, орудиях травмы, частиц определенных тканей и органов или клеточных элементов животного происхождения
— определение наличия вагинальных клеток в пятнах крови и спермы на одежде лиц, подозреваемых в совершении полового преступления, в под- ногтевом содержимом и отпечатках с половых органов этих лиц
— выявление сперматозоидов в пятнах для установления наличия спермы. Объектами судебно-цитологиче- ского исследования могут быть также ворсины плаценты для определения пола ребенка при поступлении роженицы в больницу с неотделившейся плацентой и клетки слизистой оболочки ротовой полости улиц с аномальным половым развитием для установления их генетического пола. Обычно цитологическое исследование вещественных доказательств проводится после судебно-биологиче- ской экспертизы, за исключением микрочастиц на орудиях травмы, которые должны изыматься экспертом- цитологом и рационально распределяться для исследования цитологическими и серологическими методами. Глава 44 СУДЕБНО-ЦИТОЛОГИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ 462 СУДЕБНО-ЦИТОЛОГИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ ХРОМОСОМНОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ ПОЛА Генетика пола Генетический пол человека определяется одной из 23 пар хромосом — половыми хромосомами. У женщин имеются две идентичные половые хромосомы, называемые Х-хро- мосомами. Мужчины имеют одну X- хромосому и вторую, меньшую по размерам, хромосому. При формировании половых клеток (гамет) парные хромосомы расходятся и попадают в разные гаметы. Поэтому все яйцеклетки получают по одной Х-хромосоме. При образовании сперматозоидов половина их имеют Х-хромосому, а другая половина — хромосому. Таким образом, пол ребенка зависит оттого, какой именно сперматозоид оплодотворил яйцеклетку. Оплодотворение сперматозоидом, содержащим Х-хромосо
му, ведет к образованию женской зиготы XX. Слияние сперматозоида, содержащего хромосому, с яйцеклеткой дает мужскую зиготу XY. На окрашенных срезах клетки, находящейся в состоянии покоя, хромосомы неразличимы, видна лишь сеть из темных тяжей и зернышек, в совокупности называемых хроматином. Перед началом деления клеточного ядра эти тяжи уплотняются и образуют хромосомы. В этот период возможна половая дифференцировка клеток по набору хромосом (кариотипу). Однако этот метод не получил распространения в судебной медицине из-за своей сложности и трудоемкости. Только открытие Хи хроматина в ядрах клеток, находящихся в покое, предопределило возможность определения пола на клеточном уровне сравнительно несложными методиками.
|
|
|
Скачать 7.99 Mb.