Учебное пособие. Учебное пособие по дисциплине специализации Болезни птиц Федеральное агентство по образованию
 Скачать 0.84 Mb.
|
|
ИНФЕКЦИОННЫЕ БОЛЕЗНИ ПТИЦ УЧЕБНОЕ ПОСОБИЕ по дисциплине специализации «Болезни птиц» Федеральное агентство по образованию Хакасский государственный университет им. Н.Ф.Катанова ИНФЕКЦИОННЫЕ БОЛЕЗНИ ПТИЦ УЧЕБНОЕ ПОСОБИЕ по дисциплине специализации «Болезни птиц» Абакан 2009 ББК 48я73 В39 Печатается по рекомендации Методического совета и по решению Редакционно-издательского совета Хакасского государственного университета им. Н.Ф. Катанова Рецензенты: Глушков В.В., доцент кафедры инфекционных болезней животных ФВМ ГОУ ВПО «Хакасский государственный университет», директор ГУ РХ «Хакасская республиканская лаборатория»; Ваймер Ю.М., главный ветеринарный врач ОАО «Усть- Абаканская птицефабрика». В 39 Инфекционные болезни птиц: учебное пособие по дисциплине специализации «Болезни птиц» / сост. Т.И. Усикова. – Абакан: Издательство Хакасского государственного университета им. Н.Ф. Катанова, 2009. - с. Учебное пособие подготовлено по дисциплине специализации «Болезни птиц» в части «Инфекционные болезни», требующей оперативного обеспечения учебной литературы, и предназначено для студентов высших учебных заведений по специальности 111201 – Ветеринария, для повышения квалификации ветеринарных специалистов. Учебное пособие включает в себя как теоретический материал, так и лабораторно-практические занятия и рекомендации по их проведению. В нём изложены основы эпизоотологии и описаны инфекционные болезни птиц, а также методы диагностики, профилактики и ликвидации этих болезней. В пособии отражены достижения науки и практики последних лет. © Хакасский государственный университет им. Н.Ф. Катанова, 2009 © Усикова Т.И. 2009 ОГЛАВЛЕНИЕ ВВЕДЕНИЕ………………………………………………………………… РАЗДЕЛ 1. ЭПИЗООТОЛОГИЯ ИНФЕКЦИОННЫХ БОЛЕЗНЕЙ В ИНТЕНСИВНОМ ПТИЦЕВОДСТВЕ ……...............................................
РАЗДЕЛ 2. ПРОФИЛАКТИКА И МЕРОПРИЯТИЯ ПО ЛИКВИДАЦИИ ЗАРАЗНЫХ БОЛЕЗНЕЙ У ПТИЦ……………………………… 2.1. Диагностика инфекционных болезней птиц ………… Лабораторно-практическое занятие. Эпизоотологическое обследование. Эпизоотологический анализ…………………………………………… 2.2. Эпизоотологическое прогнозирование…………… 2.3. Профилактический контроль в промышленном птицеводстве Лабораторно-практическое занятие. Охрана птицеводческих хозяйств от заноса возбудителей инфекции……………………………. Лабораторно-практическое занятие. Анализ противоэпизоотических мероприятий…….
РАЗДЕЛ 3. ПЛАНИРОВАНИЕ И ЭКОНОМИКА ВЕТЕРИНАРНЫХ МЕРОПРИЯТИЙ В ПТИЦЕВОДСТВЕ…………………………………… 3.1. Планирование ветеринарных мероприятий… Лабораторно-практическое занятие. Учёт и отчётность на птицеводческом предприятии……. РАЗДЕЛ 4. ИНФЕКЦИОННЫЕ БОЛЕЗНИ ПТИЦ………………………… 4.1. Вирусные болезни птиц ……………………………… Лабораторно-практическое занятие. Диагностика, профилактика и ликвидация гриппа птиц …………… 4.2. Бактериальные болезни птиц…………………………………… Лабораторно-практическое занятие. Диагностика, профилактика и ликвидация пуллороза птиц ………………………………… Лабораторно-практическое занятие. Диагностика, профилактика и ликвидация пастереллёза птиц …………………………… 4.3. Инфекционные болезни эмбрионов……………………………… Лабораторно-практическое занятие. Диагностика инфекционных болезней эмбрионов….. Краткий словарь основных терминов ……………………… РЕКОМЕНДУЕМАЯ ЛИТЕРАТУРА………………………………………… ВВЕДЕНИЕ Интенсивные способы содержания птицы, лишение их многих источников естественной природной защиты (инсоляция, движение и др.) предрасполагают к снижению неспецифической сопротивляемости их организма, резкому возрастанию микробного давления и возникновению условий, благоприятных для усиленного размножения и повышения болезнетворности микроорганизмов, паразитирующих на птице или сосуществующих с ней. Повышают опасность распространения инфекции межхозяйственные связи, использование возвратной тары, скопление больших масс помета и др. Проникновение в птицеводческое хозяйство острозаразной болезни нередко сопровождается почти молниеносным распространением ее на все поголовье и одновременным формированием чрезвычайно опасного стационарного очага инфекции. В настоящее время при данном уровне интенсификации птицеводства на некоторых птицефабриках инфекционные болезни птиц приносят серьёзный экономический ущерб как от снижения продуктивности птицы, гибели молодняка, так и вследствие проведения ликвидационных мероприятий, в том числе вынужденного забоя всего поголовья птицы. Наряду с экономическим ущербом, ряд инфекций у птиц представляет реальную опасность для людей – грипп птиц, сальмонеллёз, аспергиллёз, орнитоз и др. Основным элементом в комплексе мер борьбы является профилактика. Для предотвращения распространения заболевания следует строго соблюдать общие профилактические меры, включая вопросы ветеринарной санитарии. Возникновение и распространение заболеваний обусловливается рядом причин, среди которых главными являются нарушение карантинно-ограничительных мероприятий. Всё это резко снижает эффективность рекомендуемых санитарно-профилактических мероприятий. Изучение инфекционных болезней птиц ведётся в основном в двух направлениях: изучение этиологии и биологии возбудителей, и на основе этого – разработка диагностических, профилактических и противоэпизоотических мероприятий. Дисциплину специализации «Болезни птиц» студенты изучают после того, как ими были освоены микробиология, вирусология, клиническая диагностика, патологическая анатомия и другие специальные дисциплины. Материал данного учебного пособия включает четыре раздела, в каждом из которых имеется как теоретическая часть, так и практическая, представленная в виде лабораторно-практических занятий. Изучение инфекционных болезней ведётся комплексно: от характера и течения болезни до освоения навыков ориентирования в эпизоотологической ситуации, постановки диагноза, умения применять инструкции о мероприятиях по борьбе с болезнями, составлять план противоэпизоотических мероприятий и т.д. Отдельным разделом представлен материал по планированию ветеринарных противоэпизоотических мероприятий, учёту и отчётности на птицеводческих предприятиях. Таким образом, изучение причин возникновения и распространения инфекционных заболеваний и предотвращение их в условиях всё возрастающей интенсификации, умение быстро ориентироваться в эпизоотологической ситуации имеет большое значение в общей проблеме повышения сохранности птицы. Ветеринарному врачу необходимо постоянно совершенствовать свои знания в области инфекционной патологии птиц. РАЗДЕЛ 1. ЭПИЗООТОЛОГИЯ ИНФЕКЦИОННЫХ БОЛЕЗНЕЙ В ИНТЕНСИВНОМ ПТИЦЕВОДСТВЕ
Инфекция как процесс взаимодействия микробов и организма птиц. Механизм и факторы передачи инфекции Инфекция, или инфекционный процесс – это эволюционно сложившееся взаимодействие патогенного микроорганизма и восприимчивого организма, проявляющееся явно или скрыто. Вероятность и развитие инфекционного процесса и формы его проявления зависят от свойств возбудителя (его вирулентности), видовых и индивидуальных свойств восприимчивого макроорганизма (его адаптационного защитного механизма), от условий, в которых находится макроорганизм и при которых произошло проникновение возбудителя, от способов внедрения возбудителя и других, сопутствующих этому процессу условий. В результате взаимодействия патогенного организма с организмом хозяина происходит непрерывный процесс распространения заразных болезней (от доноров к реципиентам), называемый эпизоотическим процессом. Эпизоотический процесс возникает и развивается при взаимодействии трех элементов – звеньев эпизоотической цепи: - источника возбудителя инфекции; - механизма передачи его; - восприимчивых животных и птиц. Разрыв этой цепи является главной задачей в борьбе с заразными болезнями животных и птиц. Характерная особенность эпизоотического процесса – его непрерывность, благодаря которой обеспечивается сохранение патогенных микроорганизмов как биологических видов. Механизм передачи возбудителя инфекции представляет собой эволюционно закрепленную приспособленность каждого вида патогенных микроорганизмов к определенным путям перемещения от источника возбудителя (больных животных) к здоровым восприимчивым животным и птице. Особенностью такого биологического паразитизма является необходимость постоянной смены «хозяина». Поскольку в организме животного, птицы, пораженных инфекцией, происходит иммунобиологическая перестройка, возникают защитные приспособительные реакции и создаются условия, неблагоприятные для возбудителя. Преодолеть эти неблагоприятные условия для возбудителя можно только путем перехода в другой организм с благоприятными для его жизнедеятельности условиями. Механизм передачи возбудителя – сложный процесс, состоящий из трех самостоятельных моментов жизнедеятельности микроорганизма: - выделение патогенного микроорганизма во внешнюю среду; - пребывание во внешней среде; - внедрение микроорганизма в другой восприимчивый организм. Выделение микроорганизма во внешнюю среду предопределяется местом обитания (локализации) его в зараженном организме. Чаще всего выделение происходит через органы пищеварения, дыхания, кровообращения, наружные покровы, слизистые оболочки. Для возбудителя каждой инфекционной болезни существует обязательное соответствие специфической локализации возбудителя и механизма его передачи. Факторами передачи возбудителя инфекционной болезни являются все те же элементы внешней среды, участвующие в передачи возбудителя – корма, вода, помещение, предметы ухода и т.д. Переносчиками возбудителя инфекции являются все живые организмы – посредники в передаче возбудителя от больного животного к здоровому; это насекомые, клещи, домашние и дикие животные, человек. Локализация возбудителя инфекции в организме животного, основные пути его выделения во внешнюю среду и механизм передачи от одного вида животного другому эволюционно закреплены и соответствуют друг другу. Эпизоотологический процесс (эпизоотология) любой инфекционной болезни со временем может измениться, если изменяется экономическая (хозяйственная) деятельность общества (например, изменение характера ведения птицеводства в современных условиях, условий обитания диких птиц и т.д.). Современное птицеводство характеризуется высокой степенью концентрации поголовья и максимальной механизацией и автоматизацией производственных процессов. Концентрация птице – мест достигает 1 – 1,5 млн. и даже 3 млн. (бройлеров). Птица содержится в замкнутых, изолированных системах. В таких условиях резко уменьшился контакт птицы с человеком и внешней средой. Птица унифицирована в генетическом отношении, по кормовым рационам и т.п. В экономическом отношении в отличие от сельскохозяйственных животных других видов, птица отнесена к оборотным средствам. Ремонт поголовья осуществляется группами (залами, птичниками, зонами), независимо от индивидуальной продуктивности особей. Поэтому каждое конкретное стадо птиц практически является единым биологическим объектом, и оценку состояния птицы делают по всему стаду в целом: продуктивность, сохранность, здоровье, диагноз, оплата корма и т.д. Перевод птицеводства на индустриальную основу повлек за собой использование принципов обычного промышленного предприятия, которые не учитывают особенности живого организма: концентрация большого числа особей на ограниченной территории птицефабрик, непрерывность технологического процесса получения птицеводческой продукции, постоянное перемещение птицы. И, как следствие, - повышенные стрессовые воздействия на организм птицы. Существует даже такое понятие, как «болезни индустриализации». Все это привело к резкому возрастанию микробного давления и возникновению условий, благоприятных для усиленного размножения и повышения болезнетворности микроорганизмов, паразитирующих на птице или сосуществующих с ней. Повышают опасность распространения инфекции межхозяйственные связи, использование возвратной тары, скопление больших масс помета и др. Все это повлекло за собой коренные изменения как в эпизоотической ситуации, так и в характере течения эпизоотических процессов. Проникновение в птицеводческое хозяйство остро заразной болезни нередко сопровождается почти молниеносным распространением ее на все поголовье и одновременным формированием чрезвычайно опасного стационарного очага инфекции. Сдерживающими (угнетающими) инфекционный процесс факторами являются организационно-хозяйственные, санитарные и специфические ветеринарные мероприятия. Среди них ведущими являются регулярная профилактическая диагностика и вакцинация. Внедрение в птицеводство диагностикумов, вакцин, химиопрепаратов и других терапевтических средств позволяет достаточно эффективно предупреждать и лечить известные на сегодняшний день заразные болезни птиц. С другой стороны, систематическая вакцинация поголовья одной или несколькими вакцинами на фоне одновременно протекающих хронических инфекций обусловливает появление стертых, атипичных форм той или иной болезни. Особенности работы и задачи ветеринарной службы в птицеводстве Огромные размеры предприятий, максимальная напряженность производственных процессов, предъявляют жесткие требования к экономической эффективности ветеринарных решений. Любая неточность оборачивается огромными убытками. Такая специфика сказалась на характере организации ветеринарного обслуживания отрасли, возникла необходимость: - совершенствования системы управления ветеринарной службой; - разработка и применение средств и методов массовой обработки птицы; - контроля уровня специфического иммунитета и неспецифической резистентности стада и т.д. Ветеринарно-санитарные мероприятия превратились в составляющую часть (и часто решающую) технологии производства птицеводческой продукции. Развитие методов и средств проведения научных исследований, совершенствование технологии выращивания, кормления и содержания сельскохозяйственной птицы поставили перед ветеринарными специалистами целый ряд новых задач по созданию эпизоотологического благополучия: 1. наибольшую потенциальную опасность на сегодняшний день представляют вирусные болезни - Ньюкаслская болезнь, грипп, инфекционный ларинготрахеит, инфекционный бронхит, болезнь Марека и некоторые другие. Для них характерны сильная контагиозность и широкое распространение. Они причиняют огромный ущерб птицеводству, вызывая массовый падеж птиц и снижение продуктивности;
4. в промышленных птицеводческих хозяйствах все большую роль в патологии птиц начинают играть или новые, или мало изученные заболевания, которым ранее уделялось недостаточное внимание. Возникла необходимость в разработке диагностических средств, изучении эпизоотологических особенностей этой группы инфекций, создании эффективных средств и методов лечения и профилактики. Успешное решение поставленных задач возможно только на основе глубоких, научных знаний о возбудителях, их биологии, формах взаимодействия с макроорганизмом; 5. наряду с вирусными заболеваниями у птиц часто регистрируют бактериальные инфекции и болезни, вызываемые микроскопическими грибами: микозы, микотоксикозы. При исследованиях патологического материала и органов вынужденно убитых птиц удается обнаружить большое количество энтерококков, стафилококков, кишечной палочки, пастерелл, микоплазм, сальмонелл и др. Значительный отход птицы вызывает колисептецимию и респираторный микоплазмоз молодняка; 6. с развитием промышленного птицеводства все больше появляется сообщений о возрастающей роли в этиологии респираторных болезней птиц ассоциации различных инфекционных агентов вирусной и бактериальной природы (вирус болезни Ньюкасла, инфекционный ларинготрахеит, инфекционный бронхит, хронический респираторный микоплазмоз, колибактериоз). При этом довольно часто бывает трудно поставить точный диагноз и своевременно осуществить противоэпизоотические мероприятия;
Диагностика эмбриональной смертности позволяет не только выяснить причины низкой выводимости, но и дает врачу возможность контролировать состояние родительских стад. Систематические наблюдения за патологическими отклонениями у эмбрионов дают возможность проведения ранней диагностики нарастающих заболеваний родительского стада. Болезни эмбрионов далеко не полностью изучены и не всегда удается найти причину гибели зародыша. Однако, уже известны многие аномалии развития, синдромы и нозологические единицы, по которым можно проводить дифференциальную диагностику причин эмбриональной смертности. Особенности передачи инфекции в условиях промышленного птицеводства В промышленном птицеводстве самое большое значение имеет алиментарный путь передачи возбудителя инфекции, т.е. через корм, воду. А местом специфической локализации является желудочно-кишечный тракт. Чаще всего таким путем заражается птица при напольном ее содержании. Наиболее постоянным фактором передачи возбудителей болезней является воздух – патогенные микроорганизмы, находящиеся в нем, постоянно инфицируют птицу через органы дыхания. Существует опасность и трансовариальной (через яйцо) передачи возбудителя инфекции. Так передаются возбудители пуллороза–тифа, микоплазмоза, колибактериоза, стрептококковых инфекций. Передача возбудителя возможна также чисто механически: через подстилочный материал (сальмонелла, патогенные грибы), яичную, местную тару, автотранспорт, технологическое оборудование, ввозимое племенное яйцо, а также – обслуживающий персонал. Люди могут быть, кроме того, бактерио - и вирусоносителями патогенных для птицы микроорганизмов (сальмонелл, аденовирусы, вирус гриппа, инфекционный ларинготрахеит). Влияние стрессовых ситуаций на активизацию эпизоотического процесса Промышленная технология выращивания птиц сопряжена со значительными физиологическими нагрузками организма: птица сконцентрирована на ограниченной территории, постоянное перемещение птицы, проведение массовых ветеринарно-диагностических и профилактических мероприятий. В таких условиях различные нарушения в кормлении, содержании птиц часто приводит к возникновению стрессовых состояний. Стресс – совокупность стереотипных реакций организма, возникающих в ответ на воздействие раздражителей различной природы. Состояние стресса у птицы может быть вызвано резкой сменой кормового рациона, увеличение плотности посадки, внезапные шумовые эффекты, перепадом температуры (некоторые исследования особенно выделяют температурный стресс), вакцинацией и т.д. Стресс приводит не только к снижению продуктивности – яйценоскости, приросту массы, но и оказывает свое влияние на формирование иммунитета у птицы. В состоянии стресса организм мобилизует свои потенциальные возможности на сохранение внутренней среды, или гомеостаза. Это приводит к снижению метаболических процессов, истощению или чрезвычайному напряжению физиологических защитных сил, в том числе и иммунологической системы. В таких условиях у птиц формируется недостаточно напряженный иммунитет. Т.е., если стрессор воздействует на организм птицы непосредственно перед или в момент вакцинации, то можно ожидать угнетения иммунного ответа. Птица разного возраста по-разному реагирует на стресс. Наиболее чувствительны к воздействию стрессоров цыплята в первые недели и месяцы постэмбрионального развития и птица в начальный период яйцекладки. РАЗДЕЛ 2. ПРОФИЛАКТИКА И МЕРОПРИЯТИЯ ПО ЛИКВИДАЦИИ ЗАРАЗНЫХ БОЛЕЗНЕЙ У ПТИЦ 2.1. Диагностика инфекционных болезней птиц Методы диагностики Диагностика играет одну из решающих ролей в системе мероприятий по борьбе с болезнями инфекционной природы. Она складывается из наблюдений и исследований болезней птицы, исследований патологического материала, анализа и оценки результатов исследований, выводов и заключений о причинах и форме болезни, о состоянии больного организма. Быстро и правильно поставленный диагноз обеспечивает успех ликвидации вспышек эпизоотий и эффективность оздоровительных мероприятий, так как позволяет четко оценить конкретную эпизоотологическую ситуацию и своевременно принять целенаправленные меры по оздоровлению птицы с наименьшими потерями. И, наоборот, ошибочный диагноз или задержка с его постановкой может повлечь за собой распространения вспыхнувшей болезни, усложнение мероприятий по ее ликвидации и, как результат, - значительные экономические потери. Это особенно касается вспышек быстро распространяющихся или тяжело протекающих инфекций (болезнь Ньюкасла, грипп и т.д.). Поэтому диагноз на инфекционные заболевания должен быть поставлен как можно быстрее и точнее. Обычно диагноз ставят, используя эпизоотологический, клинический, патоморфологический методы и лабораторную диагностику. Как правило, постановка диагноза состоит из двух этапов:
Эпизоотологический метод диагностики представляет собой систему изучения проявлений эпизоотического процесса и предполагает в каждом конкретном случае сбор точной информации о восприимчивых видах, источнике и резервуаре возбудителя болезни, механизме его передачи, воротах инфекции, интенсивности проявления эпизоотического процесса, сезонности, предрасполагающих факторах заболеваемости, смертности, летальности. Особое внимание обращают на выполнение противоэпизоотических мероприятий в хозяйстве и условий внешней среды. Клинический метод предполагает клиническое исследование птицы, подозреваемой в заболевании инфекционной болезнью. При этом необходимо соблюдать правила работы, предусмотренные соответствующей инструкцией. Исследование начинают с осмотра птицы в естественных условиях содержания, изучения ее реакции на различные раздражители, прием корма, воды, характер фекалий и т.д. Клинические признаки инфекционной болезни зависят от вида и локализации возбудителя, течения, формы проявления болезни и т.д. Патоморфологический метод включает в себя патологоанатомический и гистологический методы. Некоторые инфекции проявляются довольно характерными патологоанатомическими признаками, которые обнаруживаются при вскрытии: туберкулы – в органах при туберкулезе, кровоизлияния на границе мышечного и железистого желудка у кур при болезни Ньюкасла. Гистологический метод является как правило, вспомогательным, при котором обнаруживают патоморфологические изменения в тканях, и иногда одним из основных (болезнь Марека). Лабораторная диагностика и её принципы При инфекционных болезнях птиц особенно велика роль лабораторной диагностики, так как при многих из них наблюдают сходные эпизоотологические данные, клинические симптомы и патологоанатомические изменения. Нередки в настоящее время случаи атипичных и латентных форм течения болезней, а также наличие смешанных инфекций, когда болезнь вызвана не одним, а двумя и более этиологическими агентами (например, двумя вирусами или вирусом и бактериями и т.д.). Окончательный диагноз на вирусную болезнь в большинстве случаев может быть поставлен только с учетом результатов лабораторных исследований. Лабораторная диагностика основывается на ряде принципов: - первый принцип диагностики – составление исчерпывающих записей по наблюдаемым в хозяйстве болезням птиц. - второй принцип – максимально использование доступных методических приемов исследования больной птицы (изготовление мазков крови, кляч-препаратов, мазков из измененной ткани внутренних органов, содержимого трахеи, желудка, разных отделов кишечника, помета и т.д.). Прямое микроскопическое исследование таких препаратов позволяет получить данные об изменении картины крови, присутствии в мазках и кляч-препаратах клеточных включений, гельминтов, ооцист кокцидий, бактерий, грибов и т.д. Второй принцип диагностики предусматривает использование прямого и непрямого вариантов МФА при исследовании мазков из патологического материала от больной птицы или зараженных куриных эмбрионов (КЭ) и культуры клеток. Зачастую сначала заражают КЭ или культуру клеток, затем материал, взятый из нее, исследуют с помощью МФА. Обнаружение специфического антигена подтверждается результатами гистологического и электронно-микроскопического исследований. После этого решают вопрос о дальнейшем исследовании с целью выделения и идентификации вирусов. - третий принцип диагностики сводится к выделению и идентификации возбудителя болезни. При реализации этого принципа следует учитывать следующее: выделенный и идентифицированный вирус при вспышке болезни не обязательно является возбудителем болезни; окончательный результат получают при выделении этого вируса от аналогичного хозяина, зараженного ранее выделенным возбудителем. Далее необходимо провести специфическую идентификацию повторно выделенного вируса и определить его связь с клинической картиной болезни. Чаще для идентификации применяют иммуносерологические тесты. - четвертый принцип. Для постановки правильного диагноза необходимо учитывать наличие в образцах патологического материала смешанной инфекции (аденовирусной, ИББ, лейкоз, респираторный микоплазмоз), т.е., дифференцирование возбудителей. - пятый принцип – серологические исследования вирусных инфекций с целью обнаружения специфических антител – наиболее доступный метод лабораторной диагностики. Систематические исследования парных проб сыворотки (т.е. пробы берутся в разные сроки, 2-3 недели, от одних и тех же особей) с заведомо известными стандартными антигенами при учете комплекса других данных способствует своевременному выявлению и принятию мер борьбы с инфекцией. Лабораторная диагностика вирусных инфекций птиц Все методы лабораторной диагностики вирусных инфекций можно разделить на три группы: 1. Экспресс-методы, основанные на обнаружении в патматериале следов пребывания вирусов, позволяют относительно быстро установить наличие вируса. Для обнаружения вирусных антигенов и их следов пребывания в организме птиц используют: – серологические реакции с заведомо известными специфическими сыворотками (РИФ, РСК, РРП в агаровом геле, ИФА (ELISA), РГА, РТГА); - генетические методы – ПЦР, ДНК-зондов; - обнаружение специфических вирусных телец-включений; - микроскопию – электронная (хотя и не имеет практического значения) и вирусоскопия при оспе птиц (оспенный вирус – единственный, который обнаруживается в световом микроскопе). Положительная вирускопия в сочетании с биопробой достаточна для постановки диагноза на оспу. - биопробу - её тоже можно отнести к экспресс-методам, особенно, если можно надеяться на получение характерной клинической картины или характерных патологоанатомических изменений. После проведения экспресс-исследований диагноз ставят предварительно в течении 1-2 суток и в этом их главное достоинство. Но высокой достоверностью они не отличаются, поэтому нуждаются в подтверждении другими методами. 2. Вирусологический метод – основан на обнаружении и изоляции активных форм вирусов из патматериала и их идентификации в серологических реакциях. Метод отличается длительными и трудоемкими исследованиями, но дает точный и уверенный ответ о возбудителе болезни. Индикацию и изоляцию обычно осуществляют путем биопробы на чувствительных лабораторных объектах. Поэтому при исследовании патматериала от больных птиц для заражения используют цыплят или куринные эмбрионы (КЭ), или культуру клеток (КК). Главным показателем размножения вируса служит: - в КЭ – гибель его и характерные патологоанатомические признаки (кровоизлияния на ХАО, оспины, мумифмцирование плода, скручивание шеи и т.д.); - в КК – ЦПЭ (ЦПД) – бляшки, тельца включения, дегенерация монослоя. Для идентификации выделенного вируса используют серологические реакции с диагностическими специфическими сыворотками. Выбор реакции определяется в основном свойствами самого вируса – это может быть РТГА, если вирус проявил гемагглютирующую активность, РТГАд – если вирус проявил гемадсорбирующие свойства. Применяют для идентификации вируса также РН, РДП в агаровом геле, ИФА, в том числе метод ELISA, основанный на использовании ферментов в качестве метки антигенов и антител. Этот метод применяют также и для ранней диагностики инфекционных, опухолевых болезней птиц, и для контроля эпизоотической ситуации в птицеводстве, и для контроля уровня поствакциннальных антител. После идентификации вируса необходимо доказать его этиологическую роль в заболевании. Так, выделение от погибших кур вируса Ньюкаслской болезни не всегда свидетельствует о его этиологической роли – это может быть непатогенный, к примеру, вакциный штамм. Этиологическая роль выделенного вируса может считаться доказанной, если будет установлено нарастание титра антител к вирусу в парных сыворотках от птиц, послуживших источником получения патматериала. 3. Серологический метод (иммунологический) – основан на установлении динамики титра антител в парных сыворотках от группы птиц, которые исследуют с интервалом в 2-3 недели. Основанием для предположения, к каким вирусам искать антитела, служит предварительный диагноз, поставленный по данным эпизоотологических и эпизоотологических наблюдений, клинических и патологоанатомических симптомов. Наличие в сыворотках антител и их титры определяют в серологических реакциях с использованием антигенов предполагаемых вирусов. Наиболее достоверные результаты практически к любым вирусам дает РН. Результат нейтрализации эталонного вируса антителами исследуемой сыворотки устанавливают на цыплятах, в культуре ткани и эмбрионах по феномену утраты ими биологической активности. Важным методом диагностики большого количества вирусных болезней является постановка РДП в агаровом геле. Но условие ее методики - довольно высокий титр антител (в противном случае полосы преципитации получаются не яркие). Наиболее проста по технике исполнения и быстроте реакция торможения гемагглютинации (РТГА); её применяют в случаях, если вирус обладает гемагглютицирующими свойствами. Используют и другую методику – ИФА (в т.ч. ELISA). После установления титра антител в парных сыворотках результаты интерпретируют, исходя из динамики титра. Считается, что нарастание титра антител во второй сыворотке в 4 и более раз по сравнению с первой уверенно свидетельствует об активном инфекционном процессе у птицы в период взятия у них крови. При этом болезнь была вызвана тем возбудителем, к которому было найдено повышение титра антител в парных сыворотках. Поставленный серологическим методом диагноз дает уверенное представление о болезни и важное значение для мероприятий ликвидации вспышки эпизоотий. Недостатком его является – ретроспективность, т.к. к моменту установки диагноза птицы, от которой получены сыворотки, уже или выздоровела, или пала. Лабораторная диагностика бактериальных инфекций птиц Для диагностики бактериальных инфекций птиц применяют бактериологическое исследование, а также – экспресс-методы и серологические исследования, реже - аллергические исследования (чаще при туберкулезе, орнитозе). Экспресс-методы и серологические методы диагностики в основе своей аналогичны таковым при диагностике вирусных инфекций. Из экспресс-диагностики чаще применяются различные методы МФА, генетические методы – ПЦР. Из серологических методов – РА, РСК, РИД (РДП), РН. Бактериологический метод исследования основан на обнаружении возбудителя в патологическом материале, изоляции чистой культуры и его идентификации. Для обнаружения бактерий используют световую, люминисцентную микроскопию, для чего готовят бактериологические препараты, изучая морфологию бактерий в живом состоянии («раздавленная капля», «висячая капля») и неживом состоянии (в окрашенных бактериальных препаратах). При этом способы окраски подразделяют на ориентировочные и дифференциальные, а в некоторых случаях и диагностические. Для изоляции чистой культуры и идентификации бактерий используются питательные среды, которые различают общеупотребительные и специальные, т.е. созданные либо для определенных видов микробов (микобактерий, микоплазм, микроскопических грибов, дрожжей и т.д.), либо для изучения различных биохимических свойств, либо для дифференциации одних видов бактерий от других. При бактериологическом методе применяют биопробу - чаще на цыплятах, КЭ, с целью обнаружения возбудителя в патологическом материале, выделения его в чистой культуре и определения патогенных свойств чистой культуры микроорганизма. Некоторые особенности имеет микоплазмотическое исследование (респираторный микоплазмоз) и микологическое (микотоксикологическое) исследование заболеваний, вызываемых микроскопическими грибами или их токсином (микозы, микотоксикозы). Правила отбора патологического материала от птиц Отбор материала для различных методов исследования – один из важных этапов диагностической работы. Материал берут для лабораторного исследования с учетом предварительного диагноза. Необходимо взять его как можно раньше, после гибели птицы (не более 1-2 часов) и быстро транспортировать в лабораторию. От этого зависит достоверность результатов исследования. Труп в состоянии разложения не пригоден для лабораторного исследования. Материал берется с учетом характерных изменений у птиц 3-х групп: - птиц, погибших в результате болезни; - птиц, находящихся в разгаре болезни; - внешне нормальных особей. Отбирают органы в достаточном количестве, наиболее пораженные возбудителем болезни, с учётом клинической картины болезни и соблюдением требований целевых исследований: патологоанатомического, гистологического, гематологического, вирусологического, бактериологического, серологического, токсикологического. Материал можно консервировать, учитывая свойства возбудителя и методы исследования. Для бактериологического, вирусологического исследования можно консервировать в смеси 100 весовых частей льда и 33 части поваренной соли или заморозкой. Из химических консервантов используют смесь равных объемов стерильного глицерина и 0,85% NaCl. Для исследования в МФА – консервация материала глицерином не допускается. Для гематологии кровь берут в пробирку с антикоагулянтом – 10% раствором трилона Б, гепарина. При несоответствии качества отобранного материала утвержденным требованиям лаборатория может потребовать его повторную доставку. Нужно помнить, что некоторые вирусы быстро разрушаются в крови, моче, смывах с носоглотки, а некоторые – и в замороженном состоянии. В лаборатории исследования присланного материала должно быть начато как можно скорее. Патматериал освобождают от консервантов, делят на 2-3 порции, при необходимости - часть отдают для других видов исследований. Приняв во внимание содержание сопроводительного письма, качество материала, составляют план исследований. Предусматривают изучение материала не менее, чем двумя методами, с расчетом, чтобы получить по возможности быстрый ответ. Готовят из патматериала срезы, отпечатки, мазки, суспензию, в зависимости от предполагаемых методов исследования. О нахождении инфекционного очага в организме птицы могут свидетельствовать как бактерии и вирусы или вирусные тельца включения, так и специфические антитела. Взятие и пересылка патологического материала для разных видов исследований При необходимости подтвердить или исключить причину заболевания или падежа птицы, при подозрении на инфекционную или инвазионную болезнь или отравление ветеринарные работники птицеводческих хозяйств обязаны взять соответствующий патологический материал и направить его в ветеринарную лабораторию для исследования. Патологический материал для бактериологических и серологических исследований должен быть взят как можно раньше после смерти птицы, особенно в теплое время года, так как труп в состоянии разложения не пригоден для лабораторных исследований. Патологический материал можно отправлять в ветеринарную лабораторию в не консервированном виде, в том случае, если возможна быстрая доставка его нарочным. Однако летом патологический материал, направляемый в лабораторию, рекомендуют перекладывать льдом (лучше сухим). Трупы птиц нужно посылать целыми в непроницаемой таре. Если патологический материал нельзя быстро доставить в лабораторию, его посылают в консервированном виде. Для этого кусочки органов, взятые стерильными инструментами в стерильную посуду, консервируют 30-40 %-ным стерильным раствором глицерина, приготовленным на физиологическом растворе. Объем консервирующей жидкости должен в 5-10 раз превышать объем взятого материала. Трубчатые кости посылают в лабораторию целыми (с неповрежденными концами), предварительно очищенными от мышц и сухожилий, в полотняной ткани, смоченной (5%-ным раствором карболовой кислоты). Помет для исследования берут прокаленным пинцетом (скальпелем) и отправляют в стерильных пробирках, флаконах, стаканах, которые плотно закрывают пергаментной бумагой, от трупов птиц – отправляют в отрезках невскрытого кишечника, завязанных с обоих концов. Кровь, слизистую, экссудат посылают в запаянных стерильных пастеровских пипетках, стерильных пробирках или флаконах, плотно закрытых стерильными резиновыми пробками. Желчь можно отправлять в желчном пузыре, вырезанном вместе с долей печени. Из крови и экссудата иногда делают мазки, а с пораженных слизистых и органов – препараты-отпечатки. Мазки готовят на предметных стеклах, высушивают на воздухе или во избежание попадания на них пыли – под стеклянным колпаком. Для приготовления препаратов-отпечатков вырезанный острым скальпелем или лезвием безопасной бритвы кусочек пораженного органа захватывают пинцетом и свободной поверхностью кусочка делают на стекле несколько тонких отпечатков. Высушенные мазки фиксируют в метиловом спирте (метаноле) в течение 15-20 мин. Непосредственно в мазке, ближе к краю предметного стекла, отмечают дату приготовления мазка и номер птицы. Материал для патологогистологического исследования берут от свежих (не позднее 1 часа после гибели) трупов или от только что убитых птиц (не менее 5 голов). Пробы берут из тех органов и тканей, в которых обнаружены патологические изменения. Из пораженных органов вырезают небольшие тонкие пластинки или кубики не более 1-2 см толщиной. Вместе с пораженными участками органов захватывают граничащую с ним нормальную ткань. Для вирусологических и бактериологических исследований пробы помещают в стерильную ёмкость, укупоривают и замораживают или транспортируют при + 4◦С в термосе со льдом, смешанным с поваренной солью, с сухим льдом. Вместе с пробами материала необходимо направлять пробы нативной сыворотки крови от больных, подозреваемых в заболевании и условно здоровых птиц (по 10 проб каждой категории). На банку с кусочками органов и тканей наклеивают этикетку с указанием номера птицы и номера птичника. Этикетку из плотной бумаги или картона с написанными данными можно опускать внутрь банки. В этом случае надпись делают простым (не химическим) карандашом. Перечень патологического материала для исследования в ветеринарной лаборатории представлен в таблице 1. Таблица 1 Патологический материал, направляемый в ветеринарную лабораторию для разных видов исследования инфекционных болезней птиц
Упаковка и пересылка патологического материала. Трупы павшей птицы и отдельные органы, направляемые в свежем (нефиксированном) виде для исследования в лаборатории, доставляют только нарочным. Посылаемый материал должен быть тщательно упакован в плотный деревянный или металлический ящик, чтобы предотвратить всякую возможность рассеивания возбудителей инфекции в пути. Перед упаковкой трупы завертывают в ткань (холст, мешковину), смоченную дезинфицирующим раствором, и укладывают в ящик со стружкой или опилками. Если патологический материал получен от птиц, подозреваемых в заболевании особо опасными болезнями (чума, НБ, ИБК, оспа, хламидиоз и др.), его, после заключения в стеклянную посуду, помещают в металлическую коробку, которую запаивают, пломбируют или опечатывают, а затем упаковывают в деревянный ящик. На лицевой стороне ящика вверху делают надпись: «Осторожно, стекло» и «Верх». В сопроводительной записке для ориентации направлений исследований необходимо кратко и чётко изложить эпизоотическую ситуацию: динамику заболеваемости, летальности, поражаемый возраст, скорость распространения болезни, клинический и патологоанатомические признаки, сроки вакцинации и против каких болезней. Ориентировать ветлабораторию только на подозреваемую болезнь. Лабораторное занятие | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||