уч пособие. Учебное пособие Общая микробиология. Великий новгород

• Название: Великий новгород
• Анкор: уч пособие
• Дата: 23.09.2020
• Размер: 0.68 Mb.
• Имя файла: Учебное пособие Общая микробиология.doc
• Тип: Учебное пособие; #139322
• страница: 5 из 6

ТЕМА 7

САНИТАРНАЯ МИКРОБИОЛОГИЯ.

САНИТАРНО-МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ ВОДЫ, ВОЗДУХА, ПИЩЕВЫХ ПРОДУКТОВ, ЛЕКАРСТВЕННЫХ ПРЕПАРАТОВ.

Цель занятия: осветить основные санитарно-микробиологические методы исследования воды и воздуха; ознакомиться с методами исследования пищевых продуктов и лекарственных препаратов; оценить значение санитарной микробиологии в работе врача.
Основные вопросы темы

1. Цели и задачи санитарной микробиологии, ее значение в работе врача.

2. Методы санитарно-бактериологического исследования воды. Оценка воды по коли-титру, коли-индексу и микробному числу для воды водопроводной и открытых водоемов. Принцип ускоренного определения показателей.

3. Методы санитарно-бактериологического исследования воздуха, определение микробного числа и содержания санитарно-показательных микробов (приборы Кротова и пробоотборник аспирационный бактериологический - ПАБ).

4. Принципы санитарно-микробиологического исследования пищевых продуктов, молока и молочных продуктов. Методы стерилизации пищевых продуктов

5. Пути инфицирования лекарственных препаратов. Принципы определения микробной обсемененности лекарственных препаратов, не обладающих антибактериальным действием.

6. Особенности микробиологического контроля лекарственных препаратов, обладающих антибактериальным действием.

7. Санитарно-микробиологическое обследование предметов окружающей среды на наличие санитарно-показательных микробов.

8. Обследование персонала лечебных, пищевых учреждений и других декретированных контингентов на носительство патогенных кокков и кишечных бактерий.
БЛОК ДОПОЛНИТЕЛЬНОЙ ИНФОРМАЦИИ.
Патогенные микроорганизмы, содержащиеся у больных и бактерионосителей, могут попадать в окружающую среду, инфицируют ее и делают фактором передачи инфекций иногда в течение длительного времени. В связи с этим санитарно-бактериологическая оценка среды имеет важное эпидемиологическое значение. Прямое обнаружение патогенных бактерий связано с определенными трудностями, так как они содержатся в окружающей среде в низкой концентрации, в основном не размножаются во внешней среде и иногда трудно культивируются. Поэтому в практике чаще применяют методы обнаружения санитарно-показательных бактерий, которые в основном представляют собой нормальную микрофлору организма человека и могут попадать вместе с патогенными бактериями во внешнюю среду, где они сохраняются в течение таких же сроков, что и патогенные бактерии.

Санитарно-показательные микробы фекального загрязнения принадлежат к семейству Enterobacteriaceae. Так обнаружение E. Coli и фекального стрептококка считается показателем свежего фекального загрязнения.

Для оценки санитарного состояния среды определяют количественное содержание микробов – микробное число (в 1,0 мл воды, 1,0 г почвы, 1 м³ воздуха, в 1,0 г лекарственных препаратов) и титр санитарно-показательных бактерий, т.е. минимальную массу или объем в котором еще обнаруживаются эти бактерии. Титр позволяет определить индекс, т.е. количество, число бактерий в 1 литре воды.
1. Санитарно-бактериологическое исследование водопроводной воды.
В водопроводной воде исследуют микробное число, коли-титр и коли-индекс.

Для определения микробного числа 1,0 мл воды вносят в пустую стерильную чашку Петри и заливают расплавленным и остуженным до 50^оС мясопептонным агаром (МПА), осторожно перемешивают с внесенной водой и после застывания агара чашки инкубируют в термостате 2 суток, затем подсчитывают все выросшие колонии, что и соответствует количеству микробов в 1,0 мл воды (в чистой воде оно не превышает 100).

Для определения коли-титра воды (минимального количества воды, в котором обнаруживаются бактерии группы кишечной палочки - БГКП) используют бродильный метод. Делают посев 3 проб по 100 мл и 3 проб по 10 мл в концентрированную глюкозопептонную среду с поплавком, инкубируют в течение суток при 37^о С и отмечают брожение по наличию пузырька газа в поплавке. Из забродивших проб делают высевы на среду Эндо и идентифицируют выросшие колонии по морфологии (грамотрицательные палочки), оксидазному тесту и вторичной бродильной пробе. Чистая водопроводная вода не дает роста, ее коли-титр не менее 333 по ГОСТу (для водопроводной воды).

Для водопроводной и другой питьевой воды разработана новая методика применения мембранных фильтров (Владипор MFА-МАI MY-1998). 300,0 мл воды фильтруют по 100,0 мл через 3 фильтра, которые затем помещают в глюкозо-пептонную среду (ГПС) или на дифференциально-диагностическую питательную среду, и отмечают рост. Для определения микробного числа производят посев 0,1 мл воды в расплавленный МПА.
Вода открытых водоемов.

Определение коли-титра и микробного числа производят по аналогичной схеме, но так как эта вода более загрязнена делают посев меньших объемов воды. Для определения коли-титра - 100,0 мл,10,0 мл, 1,0 мл, 0,1 мл и 0,001 мл, а для микробного числа делают посев 1,0 мл воды, стерильно разведенной 1:100, что учитывают при подсчете колоний.
2. Санитарно-бактериологическое исследование воздуха.
Санитарно-показательными микробами воздуха помещений и находящихся там предметов являются микробы, попадающие при орально-капельном загрязнении. Это в основном гемолитические стрептококки и золотистый стафилококк, одновременное обнаружение которых является показателем высокой степени загрязнения воздуха.

Критерием оценки чистоты воздуха является микробное число (общее количество микробов в 1 м³ воздуха) и количество санитарно-показательных микробов. Для определения его используются различные методы.

Седиментационный метод.

Две чашки Петри с МПА открывают на 60 минут, затем инкубируют в термостате при 37^о С и подсчитывают число выросших колоний, а микробное число определяют, используя положение Омелянского, что на чашку площадью в 100 см², в течение 5 минут оседает количество микробов, содержащееся в 10 литрах воздуха. Этот метод недостаточно точен, поэтому чаще применяют аспирационный вариант с использованием приборов (Кротова, ПАБ-1 и др.) позволяющих более точно определить объем воздуха при посеве.

Для выделения стрептококков применяют кровяной агар, а для стафилококков желточно-солевой агар.

В больничных условиях в операционных микробное число воздуха должно быть не выше 500 при отсутствии стафилококков и стрептококков.

Хорошие результаты уменьшения микробного числа воздуха дает использование бактерицидных ламп, о также применение лазерных установок.
3. Санитарно-бактериологическое исследование молока.
Молоко является широко используемым пищевым продуктом и основным продуктом для питания детей (особенно до 1 года). Вместе с тем молоко представляет собой хорошую питательную среду для развития многих микроорганизмов, в том числе и патогенных. Кроме того молоко имеет “первичную” микрофлору, которая проходит фазы развития: бактерицидную, переходную, молочнокислую, дрожжеплесневую и гнилостную. Условно-патогенные микроорганизмы при размножении в молоке вызывают “пороки молока” со значительным нарушением органолептических свойств продукта. Особенно опасным является попадание в молоко патогенных кишечных бактерий и стафилококка, которые, размножаясь в молоке, накапливают токсины и могут вызывать тяжелое пищевое отравление.

При употреблении инфицированного молока возникают заболевания: брюшной тиф, дизентерия, сальмонеллез, эшерихиоз, бруцеллез, туберкулез, ящур и др. Поэтому во всех молочных продуктах не допускается содержание патогенных бактерий.

Санитарно-бактериологическое исследование включает:

- определение микробного числа в 1 мл молока при его разведении 1:100 и 1:1000.

- определение титра кишечной палочки.

- обнаружение патогенных бактерий и токсинов.

Для определения титра кишечной палочки делают посев молока на среду Кесслера (пептонная вода, лактоза, желчь и генцианвиолет для подавления роста грамположительных бактерий). В три пробирки вносят по1,0 мл и в три по 0,1 мл молока, инкубируют при 43^о С в течение суток, затем из забродивших проб делают высев на среду Эндо, на вторичную бродильную пробу и среду Козера. Показателем фекального загрязнения считают грамотрицательные палочки, вызывающие брожение при 43^о С и не дающие роста на цитратной среде Козера.

Пастеризованное молоко бутылочное группы А имеет коли-титр 3,0, микробное число до 75.000.

При кипячении молока сохраняется стафилококковый энтеротоксин, но погибают патогенные и условно-патогенные микробы, вместе с тем молоко (особенно женское) теряет почти все защитные иммунные свойства.
4. Микробиологический контроль чистоты лекарственных препаратов.
Проблема микробной загрязненности лекарственных препаратов одна из наиболее важных в медицинской практике. Инфицирование лекарств может происходить на всех этапах их приготовления, в процессе получения из лекарственного сырья, через используемую воду, недостаточно стерильную лекарственную посуду, воздух производственных помещений, руки персонала, нарушения санитарных условий хранения, особенно температурно-влажностного режима. Поэтому необходим тщательный микробиологический контроль на всех этапах получения и хранения препаратов.

Инфицированные препараты могут вызвать заболевания человека, тяжелые пирогенные и аллергические реакции. Микроорганизмы значительно изменяют и свойства самого препарата. Может происходить накопление микробных токсинов и ферментов, расщепление химических структур, появление новых ядовитых свойств.

По технологии получения и санитарным нормам лекарственные препараты могут быть разделены на 3 группы:

1). Стерильные (для парентерального введения, капли в глаза, нос, мази для применения на рану, ожоговую и обмороженную поверхность и все препараты для новорожденных детей).

2). Нестерильные препараты без антимикробного действия.

3). Препараты обладающие антимикробным действием.

Для оценки качества всех препаратов определяют общее число бактерий в 1,0 г.

Количественное определение микроорганизмов производят методом двухслойных агаровых пластинок: лекарственный препарат 10,0 г растворяют в 100,0 мл фосфатного буферного раствора рН-7,0 (получают разведение препарата 1:10). По 1,0 мл растворенного препарата вносят в две пробирки с расплавленным МПА, все перемешивают и выливают на поверхность чашки Петри с МПА, инкубируют 5 суток в термостате и определяют число выросших колоний, делают пересчет на 1,0 г вещества.

По ТУ в препаратах, применяемых через рот, допускается содержание в 1,0 г 1000 бактерий из них 100 клеток дрожжевых и плесневых грибов.

В препаратах, предназначенных для введения в полость уха, носа, интравагинально, допускается содержание в 1,0 г 100 бактерий, в том числе и грибов.

Кроме микробиологического контроля чистоты препаратов по микробному числу, не разрешено содержание в них ряда микроорганизмов, что контролируется высевами на специальные среды.

- для обнаружения анаэробных микроорганизмов делают посев 1,0 мл разведенного препарата на тиогликолевую среду.

- для выделения бактерий семейства Enterobacteriaceae (кишечная палочка, сальмонелла, протей) 10,0 мл препарата вносят в накопительные среды или ГПС, затем делают высев на Эндо и Висмут-сульфитный агар. - для определения Pseudomonas aеruginosa (палочка синезеленого гноя). 10,0 мл вносят в МПБ с глицерином, инкубируют 48 часов и делают высев на МПА с глицерином или глюкозой.

- для обнаружения Staph. aureus. 10,0 мл препарата засевают сначала в мясо-пептонный бульон (МПБ) с маннитом, затем делают высев на МПА с маннитом или ЖСА.

При выделении указанных микроорганизмов лекарственные препараты бракуются и подлежат уничтожению.
5. Исследование препаратов обладающих антимикробным действием.
Антимикробное действие препаратов устраняют, используя метод фильтрации через 4 мембранных фильтра, на которых и оседают бактерии. Фильтры промывают однопроцентной пептонной водой, которую затем высевают на среды для изучения микробного числа бактерий кишечного семейства, золотистого стафилококка, синегнойной палочки, анаэробных микроорганизмов и грибов. Устранение антимикробного действия препаратов можно получить также при использовании ферментов.
Определение обсемененности кишечной палочкой поверхности рук и оборудования лечебных учреждений методом смывов
Стерильным тампоном, смоченным физиологическим раствором, делают смыв с ладонной поверхности руки, затем тампон опускают в среду Кесслера или ГПС (глюкозо-пептонную среду) и инкубируют при 37-43^о С. Если наблюдается брожение делают высев на среду Эндо. При росте красных колоний идентифицируют E. coli обычными методами.

Смывы с поверхности оборудования производят с использованием стерильных трафаретов определенной площади. Для изучения микрофлоры кожи применяют также бакпечатки разового использования, в которые заливают МПА, кровяной МПА или ЖСА, но можно делать отпечатки пальцев рук на МПА, среду Эндо в чашках Петри.
САМОСТОЯТЕЛЬНАЯ РАБОТА СТУДЕНТОВ.
1.Санитарно-бактериологическое исследование водопроводной воды.
Определение коли-титра. Сделан посев водопроводной воды по 100,0 мл в три колбы с 3 %-й средой ГПС и в три пробирки по 10,0 мл После инкубации в термостате брожение отсутствует. Сделать заключение о коли-титре воды.

Определение микробного числа. Дана чашка Петри с посевом 1,0 мл водопроводной воды в расплавленном МПА, инкубация в термостате при 37^о С – 18 часов. Подсчитать число выросших колоний и определить микробное число воды. Сделать заключение о чистоте воды и пригодности ее для питья по результатам микробного числа и коли-титра.

2.Санитарно-бактериологическое исследование воды из открытого водоема
Определение коли-титра. Сделан посев воды на среду ГПС – 100,0 мл, 10,0 мл, 1,0 мл и 0,1 мл. После инкубации в термостате произошло брожение. Выявить забродившие пробы и сделать из них высев на среду Эндо, чашки поставить в термостат.

Определение микробного числа. Дана чашка Петри с посевом 0,1 мл воды в расплавленном МПА. Подсчитать число выросших колоний и оценить микробное число. Сделать заключение о чистоте воды.
3. Определение микробного числа воздуха (количество бактерий в 1 м³).
В две чашки с МПА сделан посев воздуха методом осаждения по Коху в течение 20 и 30 минут, инкубация в термостате 24 часа.

Необходимо подсчитать число выросших колоний и определить микробное число воздуха, используя формулу Омелянского. Оценить качество воздуха.
4.Исследование молока
Определение коли-титра. Сделан посев 3,3 мл молока в 6 пробирок среды Кесслера (0,1; 0,1; 0,1; 1,0; 1,0 и 1,0 мл), инкубация в термостате при 37^о С 18 часов. Определить бродильный титр молока.

Определение микробного числа. Сделан посев в расплавленный МПА 0,01 мл молока, чашка инкубирована в термостате. Определить микробное число молока (на 1,0 мл) и сделать общее заключение о качестве молока.
5. Определение чистоты рук.
Произвести посев смывов с рук на среду Кода (МПБ с лактозой и индикатором). Стерильный тампон смочить средой Кода, сделать смыв с ладони и пальцев и тампон опустить в среду Кода. После инкубации в термостате из забродивших проб сделать высев на среду Эндо.

4. 
   Определение микробной обсемененности нестерильных лекарственных препаратов.
   

Препарат разведен физиологическим раствором 1:10 (100,0 мл) 1,0 мл, внесен в 4 мл расплавленного МПА, и все вылито на чашку Петри с агаром (метод агаровых слоев). Инкубация в термостате 24 часа. Подсчитать число выросших колоний и определить микробное число в 1,0 г препарата.

Просмотреть и оценить высевы препарата на тиогликолевой среде, Сабуро, Эндо, Висмут-сульфитном агаре, МПА с глицерином, ЖСА.

Сделать заключение о пригодности препарата для приема через рот.
Вопросы для рейтингового контроля.
1. Значение санитарной микробиологии в работе врача.

2. Санитарно-бактериологическое исследование водопроводной воды на микробное число, коли-титр и коли-индекс.

3. Санитарно-бактериологическое исследование воды открытых водоемов, значение показателей.

4. Методы ускоренного определения микробного числа и коли-титра водопроводной воды.

5. Санитарно-бактериологическое исследование воздуха. Оценка основных показателей. Методы очистки воздуха в условиях больницы.

6. Использование приборов Кротова и ПАБ для определения микробной обсемененности воздуха.

7. Принципы санитарно-бактериологического исследования пищевых продуктов на фекальное загрязнение и анаэробную флору.

8. Исследование коли-титра и микробного числа молока.

9. Фазы развития микрофлоры молока.

10. Методы стерилизации пищевых продуктов, микробиологический контроль.

11. Пути инфицирования лекарственных препаратов. Значение микробиологического контроля.

12. Принципы определения микробной обсемененности лекарственных препаратов, не обладающих антимикробным действием.

13. Особенности микробиологического контроля препаратов, обладающих антибактериальным действием.

14. Микробиологическая оценка норм содержания бактерий различных видов в лекарственных препаратах.

15.Микробиологический контроль предметов окружающей среды на наличие санитарно-показательных микробов. Определение стерильности предметов ухода за ребенком.

16. 
    Значение обследования декретированных контингентов лиц на носительство патогенных кокков и кишечных бактерий.
    

Практические навыки.

1. Определение микробного числа водопроводной воды и коли-титра.

2.Определение микробного числа воздуха.

3.Микробиологическая оценка чистоты лекарственных препаратов.

4.Санитарно-бактериологическое исследование рук и поверхности предметов методом смывов.

5.Оценка качества воды по результатам бактериологического исследования.

ТЕМА 8

Нормальная микрофлора тела человека, ее возрастные особенности, значение для организма. Дисбактериоз.
Цель занятия: изучить нормальную микрофлору тела человека, провести бактериологическое исследование микрофлоры, оценить ее количественные показатели, выявить наличие дисбактериоза.
Основные вопросы темы

1. Понятие облигатной и факультативной микрофлоры тела человека, ее значение для организма.

2. Микрофлора кожи, методы ее исследования.

3. Микрофлора полости рта, носа, носоглотки.

4. Возрастные особенности микрофлоры желудочно-кишечного тракта.

5. Дисбактериоз. Количественное бактериологическое исследование микрофлоры желудочно-кишечного тракта, выявление степени дисбактериоза, методы лечения.
Блок дополнительной информации.
1. Нормальная микрофлора человека.
Микрофлора тела человека формируется во взаимодействии с внешней средой. Возникают биологически необходимые связи взаимозависимого существования микроорганизмов, животных и человека, которые составляют биоценозы. Основой межвидовых взаимоотношений в биоценозах являются пищевые потребности и пространственные связи. Некоторые виды микроорганизмов приспособились к существованию в организме человека и животных в результате использования готовых питательных веществ.

Микроорганизмы, характерные для человека и животных, составляют облигатную резидентную флору, которая представлена, в основном, условно-патогенными бактериями.

Нормальная микрофлора - это микроорганизмы, живущие и размножающиеся в здоровом организме, не причиняя ему явного вреда, но способные вызвать заболевания при нарушении баланса микроб-хозяин или экологических взаимоотношений.

Факультативная флора – случайные паразиты или условно-патогенные бактерии, которые могут автономно размножаться во внешней среде (сапрофитическая фаза) и в организме человека (гастральная фаза). Эта флора проявляется в основном при снижении реактивности организма.

Несмотря на то, что человек живет в тесном контакте с микробами, внутренняя среда организма и некоторые его полости остаются стерильными (кровь, внутренние органы, плод, матка). В то же время кожа, полость рта, носа, желудочно-кишечный тракт, мочеполовые органы имеют обильную, но достаточно постоянную микрофлору.

Первое появление микрофлоры у человека происходит во время родов из родовых путей матери. Через 10-12 часов после родов у ребенка можно выделить различные, чаще случайные, микроорганизмы с кожи, из носа, ротовой полости, кишечника.
2. Микрофлора кожи.
У взрослых людей облигатная микрофлора кожи обнаруживается в глубинных слоях, в протоках потовых и сальных желез, в волосяных мешочках. Основным является белый стафилококк (Staph. epidermidis), в небольшом количестве присутствуют сарцины, стрептококки, дифтероиды. На поверхности кожи может быть случайная флора попадающая в основном из воздуха и с одежды. У детей различают флору: доползункового периода, ползункового периода, с 1 года жизни (как у взрослых).

Исследование микрофлоры кожи проводят методом смывов, отпечатков пальцев рук на МПА и с использованием бакпечаток, заполненных разными питательными средами.

3. Микрофлора полости рта.
В полости рта создаются хорошие условия для размножения микробов: наличие пищевых остатков, термостатные условия, достаточная влажность, слабощелочная реакция среды, поэтому микрофлора этой полости многочисленна.

Первая микрофлора полости рта у новорожденного ребенка случайная, она связана с характером его питания, это в основном молочнокислые бактерии, анаэробные бактерии появляются в период роста зубов и образования десневых карманов. Микрофлора качественно изменяется с возрастом. У взрослого человека облигатная флора значительно разнообразнее, чем у детей, встречаются почти все группы микроорганизмов: бактерии, грибы, спирохеты, простейшие и вирусы. Наибольшее количество бактерий находится между зубами и в десневых карманах. Бактерии различны по форме, способу питания и дыхания, имеются кокки, палочки и извитые формы.

Стафилококки (сапрофитный и кожный) встречаются у 30 % людей, они образуют ферменты, расщепляющие остатки пищи. Стрептококки обнаруживают у всех людей (St. saliarius, St. mitis, St. mutans и др. - 10⁸ в 1 мл слюна). Они выделяют большое количество молочной кислоты и подавляют рост гнилостных бактерий, St. mutans способствует образованию зубных бляшек, в которых он активно размножается, это позволяет считать его одним из возможных возбудителей кариеса, хотя в основе этого процесса лежат также нарушения солевого, белкового и минерального обмена веществ. Анаэробные стрептококки обладают протеолитическими ферментами, нейссерии (грамотрицательные диплококки) и вейлонеллы (грамотрицательные анаэробные кокки) встречаются в большом количестве (10⁷), и их содержание значительно увеличивается при воспалительных процессах в пульпе зуба. Среди палочковидных бактерий много молочнокислых (10⁴), выделяющих при ферментации углеводов молочнокислую кислоту. Лептотрихии (Гр+ длинные нити) способствуют образованию зубного камня. Гемофильные бактерии и бактероиды (частота их обнаружения - 10³ в 1 мл) могут вызывать различные воспалительные процессы в полости рта и зева. B. fundiliformis вырабатывают экзотоксин, способны вызывать “фундилиформис – сепсис”.

В полости рта у 50 % людей встречаются грибки: лучистые и дрожжеподобные, рода “кандида”, увеличение количества которых может приводить к заболеванию – кандидозу. В полости рта имеются спирохеты, чаще встречаются Bor. Buccalis и Treponema microdentium, что необходимо учитывать при диагностике сифилиса. Из простейших в основном обнаруживают амебы и трихомонады. Случайная флора - споровые палочки, протеи, энтерококк, кишечная палочка и др. Наличие такой огромной микрофлоры в полости рта сравнительно редко вызывает патологические процессы, так как в этой полости имеются мощные защитные механизмы: лизоцим, липаза, протеазы, иммуноглобулины, гранулоциты (4000 в 1 мл, в сутки около 6 млн. клеток) и др.
Кариес.

Наиболее распространенным заболеванием зубов, в котором участвуют бактерии полости рта, является кариес.

Причины возникновения и развития кариеса до настоящего времени пол­ностью не изучены. Определенную роль играют условия быта, питания, труда, климатические условия, уход за полостью рта, обмена веществ в организме, эн­докринные и вегетативные расстройства.

В течении кариеса выделяются четыре стадии. Первая - стадия пятна - носит название начального кариеса. Развитию кариеса способствует Str. mutans. Он прикрепляется к поверхности зубов благодаря образованию нерастворимых глюканов и фруктанов и формирует зубные бляшки, которые состоят из поли­сахаридного матрикса, связанного с различными видами бактерий: Actinomyces viscosus, Nocardia, Neisseria, а также Саndidа. Начальный кариес характеризует­ся появлением меловидного пятна, которое отражает деструктивные процессы, происходящие в дентине и эмали. На этом участке нормальный блеск эмали от­сутствует. Обычно никаких субъективных ощущений больные не отмечают.

Вторая стадия - поверхностный кариес - отличается от первой тем, что уже имеется дефект твердых тканей. Образуются видимые пятна - структурные изменения эмали, их заселяют микробы, обладающие протеолитическими свой­ствами: Асtinоmусеs viscosus, Bacteroides, Str mutans, Str. mасасае, Str. rattus, Str. femus, Str. cmicetus. Затем пятно изменяет цвет, разрушается слой эмали и к протеолитическим бактериям присоединяются кислотообразующие, такие, как Lactobacillus Veillonella. Параллельно с этими процессами происхо­дит декальцинация дентина. Одонтобласты пульпы синтезируют заместитель­ный дентин, что уменьшает боль. Далее заместительный дентин разрушается и образуется полость. Здесь размножается анаэробная флора: Clostridium perfrin­gens, Enterococcus, Proteus, Spirochaeta. Эта стадия получила название среднего кариеса. При глубоком кариесе к этой флоре присоединяются Bacteroides melaninogellicus, Bacteroides fundiliformis, Actinomyces, В-гемолитический стрептококк. Образуется глубокая полость, дно которой является одновременно сводом пульповой камеры.
Пульпит.

Воспалительный процесс в пульпе возникает в ответ на раздражители, поступающие из кариозной полости, из которых на первом месте находятся микроорганизмы и их токсины, продукты распада органического вещества ден­тина.

Этиологическими факторами, вызывающими пульпит, могут быть хими­ческие вещества (ингредиенты пломбировочных материалов), а также темпера­турные и другие раздражители.

При пульпите действует полиморфная микрофлора с преобладанием ас­социаций стрептококков и других гноеродных кокков, гнилостных бактерий с гноеродными кокками, а подчас грамположительных палочек, спирохет и гри­бов. При острых формах пульпита чаще обнаруживается стрептококковая или стафилококковая, а при хронических - смешанная микрофлора. По данным Л. А. Цвых, при остром течении заболевания микроорганизмы чаще встречают­ся в виде монокультур, при хронических формах пульпита - в ассоциациях из 2-4 видов микроорганизмов.

В. П. Бережной выделил при пульпите 19 видов микроорганизмов: стафи­лококки: (золотистый, белый), стрептококки (Str. mutans, Str. mасасае, Str. sobri­nus, Stг. rattus, Str. ferus, Str.cricetus), кишечную папочку, тетракокки, грибы ро­да Саndidа, микрококки, стрептобациллы, сарцины, плесневые грибы, актиномицеты, дифтероиды, синегнойную палочку, диплобациллы, диплококки. Наи­более часто инфекция проникает из кариозной полости по дентинным каналь­цам, но может проникнуть в пульпу и по артериолам.
Микрофлора миндалин.

На поверхности миндалин много различных стрептококков (Str. Tonsillaris, Micrococcus catarrhalis) и сапрофитных стафилококков. В глубине миндалин, особенно при наличии воспалительных процессов, вегетируют патогенные стафило- и стрептококки, их носительство у 40 % людей бывает длительным.
Микрофлора носа и носоглотки.

У новорожденного ребенка чаще бывает случайная микрофлора, так как носовые ходы у них более прямые и широкие. В них нередко обнаруживают патогенные стафило- и стрептококки.

В полость носа постоянно попадает масса бактерий с воздухом, однако наличие на слизистой мелких волосков (vibrisse) способствует их выведению или обволакиванию слизью, содержащей лизоцим. 43 % всех микробов составляют носовые микрококки, 18 % - дифтероиды, затем стафилококки, пневмококки, грам- палочки.
4. Микрофлора желудочно-кишечного тракта.
Полость желудка и тонкая кишка содержат очень мало микробов. В желудке сохраняются только виды бактерий, устойчивые к кислой среде: молочнокислые бактерии, энтерококки, сарцины и дрожжи. У детей до 1 года кислотность желудочного сока меньше, чем у взрослых (pH – 5,9), микрофлора более богатая, могут сохраняться и заглатываемые патогенные бактерии: сальмонеллы и шигеллы, поэтому у детей чаще, чем у взрослых, возникают кишечные инфекции.

Микрофлора толстого кишечника и фекалий наиболее обильна и имеет существенные возрастные различия. У новорожденного ребенка меконий стерилен в течение 12-20 часов – асептическая фаза, затем появляются B. Bifidum и лактобактерии. После 5-7 месяцев, если прикорм ребенка превалирует над питанием грудным молоком, отмечается смешанная флора – бифидумбактерии сохраняются, но появляются кишечные палочки и энтерококки.

У взрослых людей бесспоровые анаэробные бактерии (бифидобактерии и бактероиды) составляют 95-97 % от общего количества бактерий, 5 % микрофлоры включает почти в равных количествах кишечную палочку, лактобактерии и энтерококки, а также споровые гнилостные бактерии. Соотношение анаэробов и аэробов составляет 10:1. Количественный и качественный состав микрофлоры может изменяться.
5. Значение нормальной микрофлоры тела человека.
Микрофлора имеет как положительное, так и отрицательное значение.

Положительная роль микрофлоры.

Антагонистическое влияние на патогенные бактерии, выделение кислых продуктов обмена, антибиотико-подобных веществ-бактериоцинов. Большое значение имеет витаминообразование, что особенно свойственно кишечным бифидобактериям и молочнокислой флоре, которые синтезируют витамины группы В и К, тиамин, рибофлавин, никотиновую кислоту, фолиевую кислоту и др. Микрофлора имеет также иммунизирующее значение.

Отрицательное значение микрофлоры.

Постоянное содержание большого числа бактерий в полостях тела представляет эндогенный источник инфекций. При снижении защитных реакций организма, стафилококки, стрептококки, нейссерии, вейлонеллы, бактероиды, фузобактерии, кандида могут вызывать воспалительные процессы, сепсис, кандидоз. Кроме того, возможно выделение бактериями ядовитых для организма веществ: ферментов, токсинов, биологически активных аминов, однако все же превалирует положительное значение микрофлоры.


6. Дисбактериоз.
Количественные и качественные изменения состава нормальной микрофлоры организма приводят к заболеванию – дисбактериозу. Это может касаться микрофлоры различных полостей тела, но наиболее часто наблюдаются изменения микрофлоры желудочно-кишечного тракта, которые возникают при длительном приеме антибиотиков широкого спектра действия, частом употреблении алкоголя, длительном голодании, инфекционных заболеваниях (ОКИ).

При дисбактериозе нарушается соотношение между анаэробной и аэробной флорой. На фоне снижения содержания кишечной палочки и бифидобактерий появляются ассоциации условно-патогенных микробов, лактозонегативных эшерихий и других энтеробактерий, обладающих гемолизирующими свойствами, а также золотистый и эпидермальный стафилококки, кандида, протеи и др.

Дисбактериоз первой степени (латентная компенсированная форма).

Бифидофлора не изменена, отмечается уменьшение или увеличение содержания кишечной палочки.

Дисбактериоз второй степени.

На фоне снижения содержания бифидобактерий отмечаются количественные и качественные изменения кишечной палочки и других условно-патогенных микробов. Обследуемый может быть отнесен к группе “риска”

Дисбактериоз третьей степени.

Значительное снижение уровня бифидофлоры до 10⁶-10⁷ в сочетании со снижением и качественными изменениями кишечной палочки.

Дисбактериоз четвертой степени.

Отсутствие бифидофлоры, резкие изменения количества и качества кишечной палочки, появление ассоциаций факультативных и не характерных для здорового человека видов условно-патогенных бактерий.
Для определения степени дисбактериоза проводят бактериологическое исследование количественное и качественное (Прил. 2, 3). Взвешивается 1,0 г фекалий обследуемого, добавляется 9,0 мл физиологического раствора и делается ряд последовательных разведений до 10^-9. После инкубации в термостате (48-72 ч) производят высевы из разведений материала 10^-3, 10^-5, 10^-7 и 10^-9.

Используют питательные среды:

для бифидофлоры – среда Блоурокка (печеночный бульон, пептон, лактоза, цистин, 0,075 % агара).

для E. coli и энтеробактерий – среда Эндо, Плоскирева.

Для стафилококков – ЖСА, кровяной МПА.

Для дрожжеподобных грибов – среда Сабуро.
Лечение дисбактериоза.

Используют биологические препараты – эубиотики, позволяющие восстановить нормальную микрофлору. Для детей до 4-х месяцев – бифидумбактерин, лактобактерин. Для взрослых - кроме этого, колибактерин, бификол, субтиллин и др. Препараты готовят из культур живых бактерий, лучше приживаются, полученные из аутоштаммов.
Тесты для рейтингового контроля (примеры):
1. Положительное значение нормальной микрофлоры тела.

1). ферментативное расщепление пищи.

2). эндогенный источник инфекции.

3). витаминообразование.

4). антагонизм к патогенным бактериям.
2. Основная микрофлора полости рта.

1). бифидобактерии.

2). лактобактерии.

3). кишечная палочка.

4). споровые анаэробы.

5). стрептококки негемолитические.
3. Лечение дисбактериоза.

1). антибиотики.

2). бактериофаги.

3). эубиотики.

4). сульфаниламиды.
4. Нормальная микрофлора толстого кишечника содержит больше всего бактерий.

1). кишечной палочки.

2). стафилококков.

3). бифидобактерий.

4). энтерококков.

5). гнилостных бактерий.

5.Особенности бактериологического исследования на дисбактериоз.

1). посев испражнений в накопительные среды.

2). точный количественный посев испражнений.

3). Разведение испражнений при посеве до 10^-9.

4). Определение чувствительности к антибиотикам выделенных культур.