Билеты Микробиология. 1. Бактериофаги (фаги)
 Скачать 0.53 Mb.
|
|
Экзотоксины продуцируют как грамположительные, так и грамотрицательные бактерии. По своей химической структуре это белки. По механизму действия экзотоксина на клетку различают несколько типов: цитотоксины, мембранотоксины, функциональные блокаторы, эксфолианты и эритрогемины. Механизм действия белковых токсинов сводится к повреждению жизненно важных процессов в клетке: повышение проницаемости мембран, блокады синтеза белка и других биохимических процессов в клетке или нарушении взаимодействия и взаимокоординации между клетками. Экзотоксины являются сильными антигенами, которые и продуцируют образование в организме антитоксинов. Экзотоксины обладают высокой токсичностью. Под воздействием формалина и температуры экзотоксины утрачивают свою токсичность, но сохраняют иммуногенное свойство. Такие токсины получили название анатоксины и применяются для профилактики заболевания столбняка, гангрены, ботулизма, дифтерии, а также используются в виде антигенов для иммунизации животных с целью получения анатоксических сывороток. Эндотоксины по своей химической структуре являются липополисахаридами, которые содержатся в клеточной стенке грамотрицательных бактерий и выделяются в окружающую среду при лизисе бактерий. Эндотоксины не обладают специфичностью, термостабильны, менее токсичны, обладают слабой иммуногенностью. При поступлении в организм больших доз эндотоксины угнетают фагоцитоз, гранулоцитоз, моноцитоз, увеличивают проницаемость капилляров, оказывают разрушающее действие на клетки. Микробные липополисахариды разрушают лейкоциты крови, вызывают дегрануляцию тучных клеток с выделением вазодилататоров, активируют фактор Хагемана, что приводит к лейкопении, гипертермии, гипотонии, ацидозу, дессиминированной внутрисосудистой коагуляции (ДВК). Эндотоксины стимулируют синтез интерферонов, активируют систему комплемента по классическому пути, обладают аллергическими свойствами. При введении небольших доз эндотоксина повышается резистентность организма, усиливается фагоцитоз, стимулируются В-лимфоциты. Сыворотка животного иммунизированного эндотоксином обладает слабой антитоксической активностью и не нейтрализует эндотоксин. Механизм действия белковых токсинов сводится к повреждению жизненно важных процессов в клетке: повышение проницаемости мембран, блокады синтеза белка и других биохимических процессов в клетке или нарушении взаимодействия и взаимокоординации между клетками. Экзотоксины являются сильными антигенами, которые и продуцируют образование в организме антитоксинов. По молекулярной организации экзотоксины делятся на две группы: • экзотоксины состоящие из двух фрагментов; • экзотоксины, составляющие единую полипептидную цепь. По степени связи с бактериальной клетки экзотоксины делятся условно на три класса. • Класс А - токсины, секретируемые во внешнюю среду; • Класс В - токсины частично секретируемые и частично связанные с микробной клеткой; • Класс С - токсины, связанные и с микробной клеткой и попадающие в окружающую среду при разрушении клетки. Цитотоксины (гистологическое cytus клетка + токсины; синоним цитолизины) — антитела, вызывающие повреждение клеток. В зависимости оттого, с антигенами каких клеток взаимодействуют антитела, различают лейкоцитотоксины (лейколизины), сперматоцитотоксины (спермолизины), гемолизины, гепатоцитотоксины, нефроцитотоксины и др. Цитотоксины образуются при попадании в организм клеток тканей животного другого вида (гетероцитотоксины), того же вида, но другой генетической линии (гомоцитотоксины), а также к тканям той же линии (изоцитотоксины) и к собственным тканям иммунизируемого животного (аутоцитотоксины). Ц., как и другие высокоактивные и специфические препараты антител, получаютпри иммунизации животных; в эксперименте — с помощью гибридомной технологии. Цитотоксины в малых дозах оказывают, как правило, активирующее действие на клетки и органы, в более высоких — токсическое. Этот факт впервые был выявлен в лаборатории И.И. Мечникова, где были получены Ц. к разным клеткам (гемолизины, сперматоцитотоксины, лейкоцитотоксины). Механизм действия Ц. заключается в активации факторов системы комплемента комплексом антиген — антитело; Ц. принадлежат преимущественно к иммуноглобулинам типа G. Цитотоксины применяют в экспериментальных исследованиях для стимуляции (в малых дозах) или цитотоксического подавления (в высоких дозах) функции клеток разных органов в условиях in vivo и in vitro. Ц., специфически взаимодействующие с поверхностными антигенами определенных клеток, используют для идентификации этих клеток в цитотоксическом тесте in vitro в присутствии комплемента, например для идентификации популяций и субпопуляций лимфоцитов. В клинической практике применяют соответствующие Ц. или содержащие их сыворотки либо для стимуляции кроветворения (миелоцитотоксическая, эритроцитотоксическая, лейкоцитотоксическая, тромбоцитотоксическая антисыворотки), либо для достижения иммунодепрессивного эффекта (антилимфоцитарная сыворотка). Экзотоксины: цитотонины (стимулируют гиперсекрецию клетками кишечника жидкости, нарушают водно - солевой обмен и способствуют развитию диареи) и энтероцитотоксины (действуют на клетки стенки кишечника и эндотелия капилляров) Эксфолиатин - эпидермолитический экзотоксин стафилококков. . Эксфолиатины вызывают разрушение десмосом зернистого слоя эпидермиса и отслойку рогового слоя. Синтез токсина А (термостабильного) контролируют хромосомные, а токсина В . (термолабильного) — плазмидные гены. Эти токсины действуют как местно, так и системно, • обусловливая в последнем случае развитие синдрома «ошпаренной кожи». Эксфолиатины проявляют свойства суперантигена. 3.Вирусы полиомиелита Таксономия.: семейство Picornaviridae, род Enterovims, вид Poliovirus. Структура. По структуре полиовирусы — типичные представители рода Enterovirus. РНК-содержащие вирусы. Морфология: мелкие (22-30нм), сферическая форма, состоят из одноцепочечной "+" РНК и кубического капсида. Каписдные белки -4 (3 снаружи группоспецифические , 1- внутри типоспецифические) придают антигенный свойства. Нет суперкапсидной оболочки( нет углеводов и липидов - значит не чувствителен к эфирам и другим растворителям жира). Репродукция: 1. Взаимодействие с рецепторами на поверхности клее тки. 2. Проникновение в клетку эндоцитозом или виропексисом геномной "+" РНК 3. На конце РНК - вирусный протеин Vpg. Геном используется как ирнк для синтеза белка 4. Один большой полипротеин транслируется с вирусного генома, затем расщепляетсяна индивидуальные вирусные протеины, включающие РНК- зависимую полимеризации. 5. Полимеризации синтезирует "-" нить с поверхности "+" нити и реплицировать геном. 6. Vpg ковалентность присоединяется к концу 5' вирусного генома. 7. Вирусные белки собираются в капсид, в него включаются геном, образуется вирион. 8. Выход из клетки путём Ее лизиса. Культивирование: Хорошо репродуцируются в первичных и перевариваемых культурах клеток из тканей человека и сопровождается цитопатическим эффектом. В культуре клеток под агаровым покрытием энтеровирусы образуют бляшки. Можно культивировать в культуре эмбриона. Антигенные свойства: Различают 3 серотипа внутри вида: 1, 2, 3, не вызывающие перекрестного иммунитета. Все серотипы патогенны дл человека. Патогенез и клиника. Естественная восприимчивость человека к вирусам полиомиелита высокая. Входными воротами служат слизистые оболочки верхних дыхательных путей и пищеварительного тракта. Первичная репродукция вирусов происходит в лимфатических узлах глоточного кольца и тонкой кишки. Из лимфатической системы вирусы проникают в кровь, а затем в ЦНС, где избирательно поражают клетки передних рогов спинного мозга (двигательные нейроны). Инкубационный период продолжается в среднем 7—14 дней. Различают 3 клинические формы полиомиелита: паралитическую, менингеальную (без параличей), абортивную (легкая форма). Заболевание начинается с повышения температуры тела, общего недомогания, головных болей, рвоты, болей в горле. Иммунитет. После перенесенной болезни остается пожизненный типоспецифический иммунитет. Иммунитет определяется наличием вируснейтрализующих антител, среди которых важная роль принадлежит местным секреторным антителам слизистой оболочки глотки и кишечника (местный иммунитет). Пассивный естественный иммунитет сохраняется в течение 3—5 недель после рождения ребенка. Микробиологическая диагностика. Материал для исследования - кал, отделяемое носоглотки, при летальных исходах — кусочки головного и спинного мозга, лимфатические узлы. Вирусы полиомиелита выделяют путем заражения исследуемым материалом первичных и перевиваемых культур клеток. О репродукции вирусов судят по цитопатическому действию. Идентифицируют выделенный вирус с помощью типоспецифических сывороток в реакции нейтрализации в культуре клеток. Важное значение имеет внутривидовая дифференциация вирусов, которая позволяет отличить патогенные штаммы от вакцинных штаммов, выделяющихся от людей, иммунизированных живой полиомиелитной вакциной. Различия между штаммами выявляют с помощью ИФА, реакции нейтрализации цитопатического действия вируса в культуре клеток со штаммоспецифической иммунной сывороткой, а также в ПЦР. Серодиагностика основана на использовании парных сывороток больных с применением эталонных штаммов вируса в качестве диагностикума. Содержание сывороточных иммуноглобулинов классов IgG, IgA, IgM определяют методом радиальной иммунодиффузии по Манчини. Лечение. Патогенетическое. Применение гомологичного иммуноглобулина для предупреждения развития паралитических форм ограничено. Профилактика. Основной мерой профилактики полиомиелита является иммунизация. Первая инактивированная вакцина для профилактики – создавала общий гуморальный иммунитет, не формировала местной резистентности слизистых оболочек ЖКТ, не обеспечивала надежную защиту. Пероральная живая культуральная вакцина из трех серотипов штаммов. Используют для массовой иммунизации детей, она создает стойкий общий и местный иммунитет. Вакцина Сэбина (путём холодовой аттенуации( 32градуса) - мутация на 7-8 локусов, мукозальная, вызывает обр - е Ат класса А). Полиомиелитная инактивированная вакцина Дж. Солка, Имовакс Полио, Тетракок. Неспецифическая профилактика сводится к санитарно-гигиеническим мероприятиям. Вопрос 3. Энтеровирусы Энтеровирусные инфекции– острые инфекционные заболевания, вызываемые энтеровирусами, характеризующиеся многообразием клинических проявлений, нередко связанных с поражением центральной нервной системы, мышц, миокарда и кожных покровов. Этиология.Энтеровирусы или кишечные вирусы относятся к родуEnterovirus,семействуPicornaviridae, лишены мембранной оболочки, содержат одну спираль РНК. Вирусы вызывают коксаки типа А и Б. Инкубационный период– от 1 до 14 дней, чаще 5-7 дней. Механизм передачи– аэрозольный, фекально-оральный. Пути и факторы передачи.Аэрозольный механизм передачи чаще реализуется в тех случаях, когда источниками инфекции являются больные. Фекально-оральным механизмом передачи энтеровирусы распространяются преимущественно в окружении вирусоносителей. Факторами передачи при этом являются вода, пищевые продукты, предметы обихода. Восприимчивость и иммунитет.Восприимчивость к энтеровирусным инфекциям обратно пропорциональна возрасту человека. Наиболее восприимчивыми являются дети в возрасте до одного года, особенно находящиеся на искусственном вскармливании. С возрастом восприимчивость уменьшается и взрослые лица мало восприимчивы к энтеровирусам. Перенесенное энтеровирусное заболевание в манифестной или инаппарантной форме оставляет после себя иммунитет к тому типу вируса, которым была обусловлена инфекция. Проявления эпидемического процесса.Энтеровирусные инфекции распространены повсеместно. Заболевания наблюдаются в виде спорадических случаев, локальных вспышек (чаще в детских коллективах) и в виде крупных эпидемий, поражающих ряд стран.Группы риска– наиболее подвержены этим инфекциям дети первого года жизни; велика вероятность заболевания и для детей до 10 лет. У взрослых людей вероятность заболеть энтеровирусными заболеваниями мала.Время риска– энтеровирусные инфекции встречаются в течение всего года, но в странах с умеренным климатом заболеваемость повышается период с июня по октябрь.Территории риска– заболеваемость в городах существенно выше, чем в сельской местности. Факторы риска. Нарушение гигиенических и технологических нормативов на эпидемически значимых объектах (особенно на объектах водоснабжения). Отсутствие условий для выполнения гигиенических требований, недостаточный уровень гигиенических знаний и навыков. Профилактика. Ведущее место в профилактике заболеваемости энтеровирусными инфекциями занимают мероприятия, направленные на разрыв механизмов передачи. Важным разделом санитарно-гигиенических мероприятий является обеспечение населения доброкачественной и эпидемически безопасной питьевой водой. Соблюдение санитарных норм и правил на предприятиях пищевой промышленности и общественного питания, а также в детских учреждениях вносит существенный вклад в профилактику заболеваемости энтеровирусными инфекциями. Необходимо регулярно проводить влажную уборку и проветривание помещений. Следует тщательно мыть и содержать в чистоте детские игрушки. Очень важно соблюдать правила личной гигиены. 32 билет: 1) простые и сложные методы окрасок, все про них; Методы окраски. Окраску мазка производят простыми или сложными методами. Простые заключаются в окраске препарата одним красителем; сложные методы (по Граму, Цилю — Нильсену и др.) включают последовательное использование нескольких красителей и имеют дифференциально-диагностическое значение. Отношение микроорганизмов к красителям расценивают как тинкториальные свойства. Существуют специальные методы окраски, которые используют для выявления жгутиков, клеточной стенки, нуклеоида и разных цитоплазматических включений. При простых методах мазок окрашивают каким-либо одним красителем, используя красители анилинового ряда (основные или кислые). Если красящий ион (хромофор) — катион, то краситель обладает основными свойствами, если хромофор - анион, то краситель имеет кислые свойства. Кислые красители — эритрозин, кислый фуксин, эозин. Основные красители — генциановый фиолетовый, кристаллический фиолетовый, метиленовый синий, основной фуксин. Преимущественно для окраски микроорганизмов используют основные красители, которые более интенсивно связываются кислыми компонентами клетки. Из сухих красителей, продающихся в виде порошков, готовят насыщенные спиртовые растворы, а из них — водно-спиртовые, которые и служат для окрашивания микробных клеток. Микроорганизмы окрашивают, наливая краситель на поверхность мазка на определенное время. Окраску основным фуксином ведут в течение 2 мин, метиленовым синим — 5—7 мин. Затем мазок промывают водой до тех пор, пока стекающие струи воды не станут бесцветными, высушивают осторожным промоканием фильтровальной бумагой и микроскопируют в иммерсионной системе. Если мазок правильно окрашен и промыт, то поле зрения совершенно прозрачно, а клетки интенсивно окрашены. Простые методы окраски Для простого метода окрашивания микропрепаратов чаще всего пользуются основными анилиновыми красителями. Очень широко применяют метиловый синий, основной фуксин, кристаллический фиолетовый, тионин. Простой метод окрашивания может быть применен как для окрашивания убитых микробных клеток в фиксированных микропрепаратах, так и для прижизненной окраски микроорганизмов. Прижизненной окраской следует считать лишь такую, при которой окрашенные организмы длительное время остаются живыми и способными к размножению. Существует несколько способов прижизненной окраски, в том числе и способ Nakanischi. При этом способе чистое предметное стекло обливают насыщенным водным раствором метиленовой сини, высушиваю и обтирают сухой тряпочкой до тех пор, пока налет краски не примет светло – голубого оттенка. На покровном стекле приготовляют мазок из исследуемых микробов, после чего не высохший до конца препарат накладывают на предметное стекло с красителем. При помощи микроскопа можно наблюдать, как микробы, оставаясь живыми, не теряя своей активной подвижности (если таковой обладают), постепенно окрашиваются в синий цвет. Этот метод ценен тем, что при его применении отсутствует опасность образования искусственных продуктов обработки, в возможности выявления некоторых функциональных особенностей микробной клетки. Среди простых методов окраски существуют как позитивные, так и негативные способы окрашивания. К простым позитивным методам окраски относится окраска по методу Лнеффлера, а к негативным – окрашивание по методу Бури. Для окраски по методу Леффлера (Loffler) можно применить раствор метиленового синего (краситель Леффлера), который позволяет выявить многие детали формы и структуры микроорганизмов. Смесь хорошо сохраняется во флаконе с притертой стеклянной пробкой. Для получения более чистых препаратов, краску можно наливать на мазок покрытый фильтровальной бумагой, или использовать фильтровальную бумагу заранее пропитанную красителем и высушенную. В таком случае на фиксированный мазок накладывают полоску сухой пропитанной красилелем фильтровальной бумаги, а затем на бумагу пипеткой наносят несколько дистиллированной воды и пинцетом или шпателем прижимают фильтровальную бумагу к стеклу. Краситель вымывается из бумаги и окрашивает мазок. По истечении времени окрашивания, фильтровальную бумагу снимают, препарат промывают осторожно струей воды, высушивают и микроскопируют. В правильно окрашенном и хорошо промытом препарате поле зрения остается светлым и чистым, а окрашенными будут только микробные клетки. Помимо позитивных способов окраски в некоторых случаях применяются негативные (контрастные) способы. В этом случае микроорганизмы, в которые краситель не проникает, выглядят как светлые частички на равномерно окрашенном фоне. Очень часто для негативного окрашивания микропрепаратов пользуются жидкой черной тушью («негативный способ» Burri). По способу Бури фон препарата заливают жидкой тушью. Тушь не является истинным красителем, поэтому тела микробов остаются неокрашенными; вследствие чего получается как бы негативное их изображение. При этом способе тушь разбавляют водой в соотношении 1:9, 1:1 или 1:2. Поскольку тушь сама по себе может содержать бактерии, ее стерилизуют, добавляя несколько капель формалина или автоклавируют 30 минут при 110 градусах. Перед употреблением подготовленная тушь (разбавленная и стерильная) должна в течение двух – трех недель сохраняться в спокойном состоянии, чтобы осели взвешенные в ней частицы. При приготовлении тушевых препаратов используется верхняя часть отстоявшейся жидкости. Каплю черной туши наносят на предметное стекло и тщательно смешивают с каплей микробной взвеси. Смесь тонким слоем размазываю по поверхности предметного стекла краем покровного стеклышка. Когда темный слой высохнет, препарат фиксируют и исследуют с помощью микроскопа. Микробные клетки видны в виде бесцветных телец а темном фоне препарата. – для выделения капсул Сложные методы окраски применяют для изучения структуры клетки и дифференциации микроорганизмов. Окрашенные мазки микроскопируют в иммерсионной системе. Последовательно нанести на препарат определенные красители, различающиеся по химическому составу и цвету, протравы, спирты, кислоту и др. Существуют несколько основных окрасок: по Граму, по Цилю-Нельсону, по Ауески, Нейссера, Бури-Гинса. Механизм и этапы окраски по Граму 1. На фиксированный мазок нанести карболово-спиртовой раствор генцианового фиолетового через полоску фильтровальной бумаги. Через 1-2 мин снять ее, а краситель слить. 2. Нанести раствор люголя на 1-2 мин (йод) 3. Обесцветить этиловым спиртом в течении 30-60 с до прекращения отхождения фиолетовых струек красителя. 4. Промыть водой 5. Докрасить водным р-ом фуксина в течении 1-2 мин, промыть водой, высушить и микроскопировать. * Грамположительные бактерии окрашиваются в темно-фиолетовый цвет, грамотрицательные - в красный. тодика окраски по Бурри-Гинсу.Некоторые виды бактерий продуцируют слизистое вещество, которое концентрируясь вокруг тела микробной клетки, образует капсулу. Данная окраска служит для выявления у бактерий капсул. 1. На середину предметного стекла наносят капельку туши и смешивают ее петлей с каплей культуры. 2. Делают мазок ребром покровного стекла, дают высохнуть и фиксируют над пламенем горелки. 3. Затем промывают дистиллированной водой и красят 5-10 мин фуксином. 4. Затем вновь мазок промывают водой и высушивают. При микроскопии бактерии окрашиваются в красный цвет, фон черный, а капсулы неокрашенные. Методика окраски по Ожешко.Этот метод служит для выявления у бактерий спор. Споры имеют вид круглых или овальной формы образований, находящихся в теле микробной клетки. Различают три вида расположения спор по отношению к длинной оси палочки: центральное – спора находится в центре тела микроба, субтерминальное – спора расположена ближе к одному из ее концов, терминальное – спора располагается на конце палочки. 1. На высушенный нефиксированный мазок наливают 0,5% раствор хлористоводородной кислоты и подогревают 1-2мин над пламенем горелки до закипания. 2. Остывший препарат промывают водой, высушивают и фиксируют над пламенем спиртовки. 3. Затем на мазок наносят раствор фуксина Циля( фуксин +карболовая кислота) и нагревают над пламенем спиртовки до отхождения паров. 4. После того как препарат остынет, обесцвечивают его 5% раствором серной кислоты, промывают водой и докрашивают метиленовым синим в течении 3-5 мин, затем промывают водой и подсушивают. Споры, окрашенные фуксином имеют красный цвет, тело микробной клетки – синий цвет. Методика окраски по Цилю-Нильсенудля кислотоустойчивых бактерий (возбудители туберкулеза и проказы). Особенностью микробов этой группы является то, что они плохо воспринимают окраску. Для того чтобы окрасить кислотоустойчивые микроорганизмы, приходится применять более концентрированные растворы красителя в подогретом состоянии с протравами и удлиненным сроком окраски. Механизм и этапы окраски по Цилю-Нельсону ( для кислотоустойчивых бактерий) 1. На фиксированный мазок нанести карболовый р-р фуксина через полоску фильтровальной бумаги и подогреть до появления паров в течении 3-5 мин 2. Снять бумагу, провыть мазок водой 3. Нанести 5% р-р серной кислоты или 3% р-р смеси спирта с хлороводородной кислотой на 1-2 мин для обесцвечивания. 4. Промыть водой 5. Докрасить мазок водным р-ом метиленового синего в течении 3-5 мин 6. Промыть водой, высушить и микроскопировать * Некислоустойчивые – обесцвечиваются и окр. метиленовым синим в голубой цвет, а кислоустойчивые остаются окрашенными фуксином в красный. пути передачи инфекци, входные ворота и тд, а Путь передачи - совокупность факторов передачи(), обеспечивающие перенос патогенного агента от больного, или носителя к здоровому. Механизм передачи- способ перемещения возбудителя от источника в организм. Имеет 3 этапа: 1)Выведение возбудителя из источника в окружающую среду. 2)Пребывание возбудителя в окружающей среде и её объектах(В факторах передачи). 3)Проникновение возбудителя в организм. В зависимости от механизма различают пути: 1)Фекально-оральный механизм имеет алиментарный (через еду), водный, контактно-бытовой пути передачи. 2)Кровяной(трансмиссивный) - парентеральный, половой, через укусы насекомых. 3)Аэрогенный - воздушно-капельный, воздушно-пылевой. 4)Контактный- раневой и контактно-половой . |