Подагра. Диссертация Мишко МЮ. 2 оглавление введение глава обзор литературы значение внешнесредовых и генетических факторов в развитии гиперурикемии и подагры
 Скачать 5.03 Mb.
|
|
С421А (rs2231142) × APEX1 T444G Комбинация генотипов повышенного риска ABCG2 С421А (rs2231142)*CA – APEX1 T444G*TG 10 (12,5%) 1 (2,2%) χ2=3,91 р 6,43 [0,79-51,9] Комбинация генотипов пониженного риска ABCG2 С421А (rs2231142)*CA – APEX1 T444G*TT 31 (38,75%) 28 (60,87%) χ2=5,74 р 0,4 [0,19-0,86] Трехлокусная модель MTHFR C677T × MTRR A66G × ABCG2 С421А (rs2231142) Комбинация генотипов пониженного риска MTHFR C677T*CT – MTRR A66G*AG – ABCG2 С421А (rs2231142)*CA 5 (6,25%) 9 (19,57%) χ2=5,24 р 0,27 [0,08-0,88] Трехлокусная модель MTHFR АС ABCG2 С421А (rs2231142)×APEX1 T444G Комбинация генотипов повышенного риска 87 Продолжение таблицы 23 MTHFR A1298C *AA – ABCG2 С421А (rs2231142)*CC – APEX1 T444G*GG 13 (16,25%) 2 (4,3%) χ2=3,94 р 4,27 [0,92-19,84] Комбинация генотипов пониженного риска MTHFR A1298C *AA – ABCG2 С421А (rs2231142)*CC – APEX1 T444G*TT 6 (7,5%) 9 (19,57%) χ2=4,05 р 0,33 [0,11-1,00] Четырехлокусная модель MTHFR C677T ×MTRR A66G×ABCG2 С421А (rs2231142)×APEX1 T444G Комбинация генотипов пониженного риска MTHFR C677T*CT – MTRR A66G*AG – ABCG2 С421А (rs2231142)*CA – APEX1 T444G*TT 2 (2,4%) 9 (19,6%) χ2=10,67 р 0,11 [0,02-0,51] Пятилокусная модель MTHFR C677T ×MTR A2756G ×MTRR A66G×ABCG2 С421А (rs2231142)× APEX1 Комбинация генотипов пониженного риска MTHFR C677T*CT – MTR A2756G*AA – MTRR A66G*AG – ABCG2 С421А (rs2231142)*CA – APEX1 T444G*TT 1 (1,25%) 6 (13%) χ2=7,74 р 0,08 [0,009-0,73] Примечание р – уровень статистической значимости различий по сравнению с контрольной группой 2 – тест OR – отношение шансов Cl – 95%-ный доверительный интервал (confidence interval). В предыдущей главе не выявлено ассоциации полиморфизма генов MTHFR A1298C и MTRR A66G с риском развития подагры в популяции русских Забайкальского края, но, согласно полученным нами данным, в сочетании с другими полиморфными локусами данные гены принимают участие в 88 детерминации риска развития подагры. Можно предположить, что это основано на эпистатических взаимодействиях данных генов, заключающихся во влиянии генотипов других локусов на влияние каждого генотипа какого-то определенного локуса на риск развития заболевания. Для двухлокусной модели генотипом повышенного риска развития подагры является ABCG2 С421А (rs2231142)*CA – APEX1 T444G*TG (χ2=3,91, р, OR=6,43, CI95%=0,79- 51,9); генотипом пониженного риска – ABCG2 С421А (rs2231142)*CA – APEX1 T444G*TT (χ2=5,74, р, OR=0,4, CI95%=0,19-0,86), для трехлокусной модели АС С421А (rs2231142)×APEX1 T444G комбинацией генотипов повышенного риска является MTHFR A1298C*AA –ABCG2 С421А (rs2231142)*CC–APEX1 T444G*GG (χ2=3,94, р, OR=4,27, CI95%=0,92-19,84) ; гаплотипом пониженного риска – MTHFR A1298C*AA –ABCG2 С421А (rs2231142)*CC – APEX1 T444G*TT (χ2=4,05, р, OR=0,33, CI95%=0,11- 1,00). Для трехлокусной модели MTHFR C677T×MTRR A66G ×ABCG2 С421А (rs2231142), четырехлокусной и пятилокусной моделей генотипами пониженного риска являются MTHFR C677T*CT – MTRR A66G*AG – ABCG2 С421А (rs2231142)*CA (χ2=5,24, р, OR=0,27, CI95%=0,08-0,88), MTHFR C677T*CT – MTRR A66G*AG – ABCG2 С421А (rs2231142)*CA – APEX1 T444G*TT ( χ2=10,67, р, OR=0,11, CI95%=0,02-0,51) и MTHFR C677T*CT – MTR A2756G*AA – MTRR A66G*AG – ABCG2 С421А (rs2231142)*CA–APEX1 T444G*TT ( χ2 =7,74, р, OR=0,08, CI95%=0,009-0,73) соответственно. Для данных моделей не было выявлено ни одной комбинации генотипов, статистически значимо ассоциированных с повышенным риском развития подагры. Наиболее вероятно это связано с небольшим объемом исследуемой выборки. Наследующем этапе с целью анализа статистически значимых моделей использован алгоритм принудительного поиска (Forced search algorithm) для оценки характера связей генотипов полиморфных локусов. При анализе двухлокусной модели ABCG2 С421А (rs2231142)× APEX1 T444G обнаружено, что оба гена вносят практически одинаковый вклада взаимоотношение обоих генов характеризуется слабовыраженным синергизмом рисунок 7). Рисунок 7. Межгенные взаимодействия полиморфных локусов генов, предрасполагающих к развитию подагры в популяции русских Забайкальского края (двухлокусная модель. Красный цвет – высокая степень синергичного взаимодействия. При анализе трехлокусной модели MTHFR C677T×MTRR A66G×ABCG2 С421А (rs2231142) обнаружено, что ведущую роль играет ген ABCG2 С421А (rs2231142 ). Взаимоотношения генов MTHFR C677T и MTRR A66G характеризуются выраженным синергизмом и слабым антагонизмом в отношении гена ABCG2 С421А (rs2231142) (рисунок 8). 90 Рисунок 8. Межгенные взаимодействия полиморфных локусов генов, предрасполагающих к развитию подагры в популяции русских Забайкальского края (трехлокусная модель. Красный цвет (толстая линия) – высокая степень синергичного взаимодействия коричневый – промежуточный этап между синергизмом и антагонизмом (отсутствие связи или независимость эффектов отдельных локусов); зеленый цвет – антагонизм эффектов. В трехлокусной модели (рисунок 9) MTHFR АС С421А (rs2231142 )×APEX1 T444G взаимоотношения генов характеризуются различной степени выраженности синергизмом (ABCG2 C421A и APEX1 T444G характеризуются выраженным синергизмом, взаимодействие же данных генов в отношении гена MTHFR АС – слабовыраженным синергизмом. 91 Рисунок 9. Межгенные взаимодействия полиморфных локусов генов, предрасполагающих к развитию подагры в популяции русских Забайкальского края (трехлокусная модель. Красный цвет (толстая линия) – высокая степень синергичного взаимодействия коричневый – промежуточный этап между синергизмом и антагонизмом (отсутствие связи или независимость эффектов отдельных локусов). Как видно из диаграммы в формирование четырехлокусной модели наибольший вклад вносят гены ABCG2 С421А (rs2231142) и APEX1 Взаимоотношения генов MTHFR C677T и MTRR A66G характеризуются выраженным синергизмом, взаимодействие остальных локусов антагонизмом различной степени выраженности (рисунок 10). 92 Рисунок 10. Межгенные взаимодействия полиморфных локусов генов, предрасполагающих к развитию подагры в популяции русских Забайкальского края (четырехлокусная модель. Красный цвет (толстая линия) – высокая степень синергичного взаимодействия коричневый – промежуточный этап между синергизмом и антагонизмом (отсутствие связи или независимость эффектов отдельных локусов). При сравнении двух методов определения межгенных взаимодействий (MDR и GMDR) получаются сопоставимые результаты. Однако программа GMDR позволяет более достоверно оценить значимость мультилокусных моделей, включающих более трех взаимодействующих друг с другом локуса. Далее нами были изучены гендерные различия межгенных взаимодействий при помощи программ MDR и GMDR (таблица 24). В группе женщин, вероятно ввиду малого объема выборки, достоверно значимых моделей выявлено не было. 93 Таблица 24 Значимые модели изучаемых генов, предрасполагающих к развитию подагры в группе мужчин Оптимальные модели межгенных взаимодействий Опытная взвешенная точность (CV Training) Контрольная взвешенная точность (CV Testing) Воспроизводимость модели (CV consistency) Тест на значимость (p) MTHFR C677T × MTRR A66G 0,6599 0,6131 10/10 9 (0,0107) MTHFR C677T × APEX1 T444G 0,6646 0,6571 10/10 9 (0,0107) MTHFR C677T × ABCG2 С421А (rs2231142) 0,6730 0,6250 10/10 8 (0,05) MTHFR A1298C × ABCG2 С421А (rs2231142 )× APEX1 T444G 0,7434 0,6738 10/10 9 (0,0107) MTHFR C677T × ABCG2 С421А (rs2231142 )× APEX1 T444G 0,7538 0,6740 10/10 8 (0,05) Примечание получено с помощью метода GMDR. Исходя из максимальных значений коэффициента перекрестной проверки и точности предсказания наиболее оптимальными межгенными моделями являются двухлокусные модели MTHFR C677T×MTRR коэффициент перекрестной проверки 10/10, опытная взвешенная точность − 0,6599, контрольная взвешенная точность – 0,6131, точность предсказания 61%, p=0,0107) и MTHFR C677T ×APEX1 T444G (коэффициент перекрестной проверки 10/10, опытная взвешенная точность − 0,6646, контрольная взвешенная точность – 0,6571, точность предсказания 65%, p=0,0107), трехлокусная модель MTHFR A1298C× ABCG2 С421А (rs2231142)×APEX1 T444G (коэффициент перекрестной проверки 94 10/10, опытная взвешенная точность – 0,7434, контрольная взвешенная точность – 0,6738, точность предсказания 67%, p=0,0107). Для двухлокусной модели MTHFR C677T ×ABCG2 С421А (rs2231142) и трехлокусной модели MTHFR C677T×ABCG2 С421А (rs2231142)×APEX1 T444G характерны пограничные значения статистической значимости (p=0,05). 1.1. 95 Рисунок 11. Получено методом GMDR. Графическое представление моделей межгенных взаимодействий генов-кандидатов, предрасполагающих к развитию подагры в группе мужчин. 1.1, 1.2 – двухлокусные модели, 2 – трехлокусная модель (ячейки темно-серого цвета – генотипы повышенного риска, ячейки светло-серого цвета – генотипы пониженного риска (в каждой ячейке слева – группа больных, справа – группы контроля, ячейки белого цвета – сочетания генотипов отсутствуют. 96 При попарном сравнении частот встречаемости генотипов для каждой модели были определены наиболее значимые сочетания генотипов, ассоциированных с пониженным риском развития подагры (таблица 25). Гаплотипов, детерминирующих развитие подагры выявлено не было, что, вероятно, связано с небольшим объемом исследуемой выборки. Таблица 25 Генотипы повышенного и пониженного риска развития подагры у мужчин Комбинация генотипов, n (%) Мужчины, больные подагрой Контрольная группа χ2, р OR [Cl] Мужчины (подагра/контроль – 69/25) Двухлокусная модель MTHFR C677T ×MTRR A66G Комбинация генотипов пониженного риска MTHFR C677T*CT – MTRR A66G*AG 3 (4,3%) 6 (24%) χ2=8,18 р 0,14 [0,03-0,63] MTHFR С MTRR A66G*GG 2 (2,9%) 5 (20%) χ2=7,78 р 0,12 [0,02-0,66] Двухлокусная модель MTHFR C677T ×APEX1 T444G Комбинация генотипов пониженного риска MTHFR C677T*CC – APEX1 T444G*TT 5 (7,2%) 7 (28%) χ2=7,09 р 0,2 [0,06-0,71] MTHFR C677T*CT – APEX1 T444G*TG 5 (7,2%) 9 (36%) χ2=11,97 р 0,14 [0,04-0,47] Трехлокусная модель MTHFR A1298C ×ABCG2 С421А (rs2231142)× APEX1 T444G Комбинация генотипов пониженного риска 97 Продолжение таблицы 25 MTHFR A1298C*AA – ABCG2 С421А (rs2231142)*CC – APEX1 T444G*TT 1 (1,4%) 5 (20%) χ2=10,57 р 0,06 [0,006-0,53] MTHFR С – ABCG2 С421А Ар Примечание получено с помощью метода GMDR; р – уровень статистической значимости различий по сравнению с контрольной группой 2 – тест OR – отношение шансов Cl – 95%- ный доверительный интервал (confidence interval). Далее нами была предпринята попытка анализа рисковой значимости в развитии подагры генетических и средовых факторов на модели больных подагрой на фоне избыточной массы тела и ожирения (в группу включены пациенты с ожирением 1 и 2 степени по классификации ВОЗ – ИМТ = 30-39,9 кг/м 2 ). При анализе в группе больных подагрой с ожирением (метаболический вариант подагры) выявлено три модели, предрасполагающие к развитию заболевания. Среди всех n-локусных моделей наиболее значимыми оказались двухлокусная модель MTHFR A1298C ×ABCG2 С421А воспроизводимость модели 10/10, опытная взвешенная точность − 0,6128, контрольная взвешенная точность – 0,6059, точность предсказания 60%, p=0,0107), двухлокусная модель ABCG2 С421А (rs2231142)×APEX1 воспроизводимость модели 10/10, опытная взвешенная точность − 0,6552, контрольная взвешенная точность – 0,6118, точность предсказания 61%, p=0,0107) и трехлокусная модель MTHFR АС T444G×ABCG2 С421А воспроизводимость модели 10/10, опытная взвешенная точность − 0,6943, контрольная взвешенная точность – 0,6385, точность предсказания 63%, p=0,001). 98 Таблица 26 Значимые модели изучаемых генов, предрасполагающих к развитию подагры у больных с ожирением Оптимальные модели межгенных взаимодействий Опытная взвешенная точность (CV Training) Контрольная взвешенная точность (CV Testing) Воспроизводимость модели (CV consistency) Тест на значимость (p) MTHFR A1298C × ABCG2 С421А (rs2231142) 0,6128 0,6059 10/10 9 (0,0107) ABCG2 С421А (rs2231142 )× APEX1 T444G 0,6552 0,6118 10/10 9 (0,0107) MTHFR АС APEX1 T444G × ABCG2 С421А (rs2231142) 0,6943 0,6385 10/10 10 (0,001) Примечание получено с помощью метода GMDR. Для каждой модели межгенных взаимодействий проведено сравнение частот встречаемости генотипов взаимодействующих генов в выборке больных подагрой и у здоровых респондентов. На рисунке 12 представлено распределение моделейсочетаний генотипов полиморфизмов, ассоциированных с повышенными пониженным риском развития подагры у больных, страдающих ожирением. 99 1.1. 1.2. 1.2. 100 2. Рисунок 12. Получено методом GMDR. Графическое представление моделей межгенных взаимодействий генов-кандидатов, предрасполагающих к развитию подагры в группе мужчин. 1.1 –1.2 – двухлокусные модели, 2 – трехлокусная модель (ячейки темно-серого цвета – генотипы повышенного риска, ячейки светло-серого цвета – генотипы пониженного риска (в каждой ячейке слева – группа больных подагрой с ожирением, справа – группа больных без ожирения, ячейки белого цвета – сочетания генотипов отсутствуют. Две из этих моделей аналогичны моделям, полученным в общей группе больных. Это может быть свидетельством, подтверждающим мультифакториальную природу заболевания и тот факт, что и развитие метаболического варианта подагры может быть ассоциировано со сложными ген- средовыми ваимодействиями. Таким образом, анализ межгенных взаимодействий позволил выявить ключевые ген-генные взаимодействия, предрасполагающие к развитию подагры у индивидов русской этнической принадлежности в популяции Забайкальского края [21]. Также был показан возможный сочетанный вклад внешнесредовых ожирения) и генетических факторов в развитие заболевания у пациентов с метаболическим вариантом подагры. 101 3.3 . Влияние генетических факторов на особенности клинического течения подагры и генетически детерминированная резистентность к аллопуринолу При анализе клинического течения подагры в зависимости от носительства полиморфных вариантов генов фолатного цикла (MTHFR СТАС А MTRR A66G),апуриновой/апиримидиновой эндонуклеазы 1 человека T444G) и гена Снами были выявлены ряд характерных особенностей течения подагры у носителей полиморфизма гена СВ таблице 27 представлены клинические особенности течения подагры у носителей разных генотипов ABCG2 С. Средний возраст пациентов и возраст дебюта заболевания были сопоставимы. Нами установлено, что в группе пациентов с гетерозиготным генотипом А подагра имеет более тяжелое течение с частыми рецидивами артрита, с вовлечением в процесс большего количества суставов и высокой частотой формирования тофусов (у 58% пациентов многосуставное поражение ив тофусы против 28,8 и 32% соответственно у носителей генотипа С/С). Таблица 27 Клиническая характеристика пациентов с различными генотипами С Генотипы, n (частота) n=79 С (1) n=59 С/А (2) n=20 p Возраст пациентов 54,0 [45,0; 65,0] 62,0 [45,25; 68,75] 0,062 Уровень МК сыворотки крови, мкмоль/л 504,0 [424,5; 594,5] 693 [411,1; 694,5] 0,001 Уровень МК мочи, мкмоль/л 3852,0 [2923,0; 4747,5] 3631,0 [3319,0; 4286,25] 0,07 Возраст дебюта подагры 45,0 [40,0; 53,0] 42,0 [34,77; 47,25] 0,82 Медиана длительности течения подагры 7,0 [4,5; 13,5] 6,5 [4; 18,5] 0,024 102 Продолжение таблицы 27 Количество вовлеченных суставов 2 [1; 3] 6 [4; 8] 0,008 Количество атак в год 2 [1; 3] 7 [5; 8] 0,007 Рецидивирующее течение 33 (56%) 6 (30%) 0,013 Хроническая подагра 26 (44%) 14 (70%) 0,021 Тофусная подагра 18 (31%) 9 (45%) 0,043 Интенсивность боли по ВАШ, мм 56,0 [48,5; 67,0] 69,0 [56,5; 76,0] 0,032 Средняя доза аллопуринола, мг/сут 119,9±57,4 178,5±69,9 0,03 Примечание МК – мочевая кислота ВАШ – визуальная аналоговая шкала р – уровень статистической значимости различий между 1 и 2 группой. При проведении корреляционного анализа была установлена средней силы положительная корреляционная взаимосвязь между генотипами ABCG2 Си уровнем МК крови (r=0,49, р) (таблица 28, рисунок 13). При сравнении больных с генотипами С/С, С/А, А/А с нарастанием копий минорного аллеля отмечалось достоверное увеличение уровня мочевой кислоты – 504,2 мкмоль/л, 634, 4 мкмоль/л и 669,9 мкмоль/л соответственно (p<0,05). Статистически достоверных взаимосвязей между генотипами ABCG2 Си уровнем МК мочи получено не было (таблица 26). Также выявлена слабая корреляционная связь между геном ABCG2 Си уровнем ХС сыворотки крови (таблица 28). Таблица 28 Ранговые корреляции Спирмена (ABCG2 С rs2231142) Показатели Число наблюдений R Спирмена t p С ×МК крови |