Саидов М.С. и соавт. Практикум по мед. микробиологии и вирусолог. Исследование при стафилококковых инфекциях(по Борисову Л. Б., 2001)
 Скачать 1.14 Mb.
|
|
Схема 5. Микробиологическое исследование при стафилококковых инфекциях(по Борисову Л.Б., 2001) гной, экссудат, мокрота, слизь из зева, носа и др. кровь при сепсисе   Бактериоскопическое Бактериологическое исследование исследование  Мазок, окраска по Посев    Граму на ЖСА на кровяной агар посев в сахарный бульон1   -й этап Ответ Характер и Гемолиз пигментация колоний мазок, окраска по Граму  Ответ  Лецитиназнаяактивность Мазок, окраска по Граму На скошенный питательный  агар (чистая культура)3-й этап П    осев на средыпестрого ряда с глюкозой Определение плазмокоагулазы маннитом в анаэробных условиях Фаготипирование Определение чувствительности к антибиотикам
 Схема №7. Микробиологическое исследование при менингококковой инфекции и бактерионосительстве (по Борисову Л.Б., 2001 г.)
 
Бактериоскопическое Бактериологическое Серодиагностика    исследование исследование1 этап Мазок, окраска Посев на сыво- В реакции РПГА по Граму роточный пита- встречного сыворотками тельный агар иммуноэлектрофореза   Люминесцентная преципитирующимимикроскопия мазков, антименингококковыми обработанных сыворотками
иммунной сывороткой 2 этап Характер Посев на сывороточный колоний питательный агар  (чистая культура)3  этап Мазок, Определение окраска по Посев на Серотипи- чувствительности Граму «пестрый» рование к антибиотикам ряд культуры
Схема №8. Микробиологическое исследование при гонорее и бленнорее
Бактериоскопи- Бактериологические Серодиагностика  ческие исследования исследования 1 этап Мазок, окраска по Посев на сыворо- РСК Ответ Граму и мети- точный питатель- Ответ  леновым синим ный агар и КДС в чашки Петри  2  этап характер колоний, пересев на Мазок, окраска по сывороточныйГраму питательный   агар (чистая культура)3 этап посев на определение «пестрый ряд» чувствительности к антибиотикам
 хема 9. Микробиологическая диагностика дифтерии С  хема10.Микробиологическая диагностика коклюшаТаблица 18 Препараты для специфической профилактики и терапии дифтерии, коклюша
Вопросы для самоконтроля Латинское название, морфологические и тинкториальные свойства возбудителя дифтерии. Назовите биовары дифтерийной палочки. По каким признакам их дифференцируют? Материал для исследования, методика его забора при подозрении на дифтерию и при обследовании на бактерионосительство. Отличия возбудителя дифтерии от других коринебактерий (ложнодифтерийной палочки, дифтероидов) Дифтерийный токсин, его свойства. Методы определения токсичности дифтерийной палочки. Иммунитет при дифтерии. Какие бактерии относятся к роду Bordetella. Методы микробиологической диагностики коклюша. Препараты для специфической профилактики и терапии дифтерии и коклюша. Занятие 13 ТЕМА: МИКРОБИОЛОГИЧЕСКАЯ ДИАГНОСТИКА ТУБЕРКУЛЕЗА Цель: 1. Изучить методы микробиологической диагностики туберкулеза. 2. Изучить препараты для специфической диагностики, профилактики и терапии туберкулеза. Туберкулез (от лат. tuberculum – бугорок) – хроническое инфекционное заболевание человека и животных, сопровождающееся поражением многих органов и систем. Наиболее чаще возникает туберкулез органов дыхания, но нередко встречается туберкулез костей и суставов, мозговых оболочек, лимфатических узлов, мочеполовой системы и т.д. Возбудители туберкулеза человека – Mycobacterium tuberculosis, M.bovis и M. africanum. Другие виды микобактерий, как M.avium, M.kansassi, M.xenopii и др. могут также вызывать заболевания, объединяющее название которых микобактериозы. Микобактериозы характеризуются образованием патологических процессов во внутренних органах, лимфоузлах. Микобактерии туберкулеза – длинные, тонкие, слегка изогнутые палочки. Спор, капсул не образуют, неподвижны. Отличаются высоким содержанием липидов в клеточной стенке в связи с чем они устойчивы к кислотам, щелочам, спиртам и плохо окрашиваются обычными анилиновыми красителями. Для их окраски требуется специальный метод – Циля – Нильсена. Требовательны к питательным средам. Для их культивирования применяют глицериново-картофельный агар, яичные среды, синтетически среды. Оптимальной средой для их культивирования признана среда Левенштейна – Йенсена – яичная среда с добавлением глицерина. На этих средах микобактерии растут медленно и дают видимый рост через 3-4 недели. На плотных средах образуются морщинистые, сухие, с неровными краями, не сливающиеся друг с другом колонии. Факторами вирулентности возбудителей туберкулеза являются токсические компоненты клеточной стенки – миколевая, фтионовая кислоты, эндотоксин, корд-фактор. Основной источник заболевания больной человек с активной формой туберкулеза, который выделяет бактерии в окружающую среду. Источником заражения могут быть и больные домашние животные. Пути передачи: воздушно-капельный, воздушно-пылевой, возможен и контактно-бытовой. При инфицировании, обычно в детском возрасте, в легких формируется первичный туберкулезный комплекс с образованием очага в ткани легкого, с лимфангоитом, регионарным лимфаденитом. Со временем первичный комплекс инкапсулируется, вокруг откладываются соли извести и может быть случайной находкой рентгенолога (очаг Гона). Этот процесс не завершается освобождением организма от микобактерий (нестерильный иммунитет). Клиника туберкулеза характеризуется хроническим течением с образованием воспалительного процесса в различных органах, чаще всего в легких. По локализации, кроме туберкулеза легких, различают так называемые внелегочные формы заболевания: туберкулез почек, костно-суставной туберкулез, туберкулезный менингит и др. Иммунитет при туберкулезе: - нестерильный, поддерживается бактериями, персистирующими в организме; - антитела не играют существенной роли в противотуберкулезном иммунитете, они являются лишь «свидетелями» наличия в организме бактерий; - основную роль играет клеточный механизм, реализуемый через ГЗТ. Для микробиологической диагностики используют разные методы: бактериоскопический, бактериологический, биологический, серологический и аллергический, которые имеют различную диагностическую ценность. Бактериоскопический метод, кроме микроскопии окрашенных по Цилю – Нильсону мазков, включает методы обогащения – гомогенизации, флотации, а также люминисцентную микроскопию мазков, обработанных флюорохромами. Основным является бактериологический метод, при котором исследуемый материал засевают на питательные среды. Недостатком метода является медленный рост микобактерий на питательных средах. Для диагностики туберкулеза применяют также методы иммуноиндикации, серодиагностики, молекулярно-генетические методы. При массовых исследованиях наиболее широко применяется аллергический метод. Для лечения туберкулеза применяются: - препараты I ряда – изониазид, тубазид, фтивазид, ПАСК, стрептомицин, ГИНК; - препараты II ряда – этионамин, циклосерин, канамицин, рифампицин, виомицин. Специфическая профилактика проводится живой ослабленной вакциной БЦЖ. Первичная вакцинация проводится на 3-5-й день после рождения. Самостоятельная работа студентов Разобрать схему микробиологической диагностики туберкулеза. Приготовить мазок из мокроты больного туберкулезом, окрасить по Цилю – Нильсону, промикроскопировать, зарисовать в тетрадь. Изучить характер роста туберкулезных микобактерий на питательных средах (демонстрация). Препараты для диагностики и профилактики туберкулеза: туберкулин сухой очищенный (РРД), вакцина БЦЖ. Указания к самостоятельной работе 1. Бактериоскопический метод Исследуемый материал: мокрота, моча, спинномозговая жидкость. Мокроту помещают в чашки Петри. Петлей выбирают гнойный комочек, переносят на предметное стекло ближе к одному из концов и, растирая между двумя стеклами, готовят мазок. Ликвор отстаивают в холодильнике и готовят мазки из нежной пленки фибрина, в которой находятся микобактерии туберкулеза и клеточные элементы. Мочу центрифугируют и делают мазки из осадка. Мазки окрашивают по Цилю-Нильсену и микроскопируют, просматривая до 100 полей зрения в препарате. Микобактерии туберкулеза располагаются поодиночке или небольшими скоплениями и окрашиваются в ярко-красный цвет. Единичные микобактерии можно обнаружить в мокроте, если их содержание не менее 105 в 1 мл мокроты. Для обнаружения микобактерий в мокроте при их меньшем содержании в 1 мл применяются методы «обогащения» - гомогенизации и флотации. Метод гомогенизации: К суточной порции мокроты добавляют равный объем 1% раствора КОН (NaOH), флакон плотно закрывают пробкой и энергично встряхивают до образования однообразной массы (гомогената) в течение 10-15 минут. После центрифугирования и нейтрализации кислотой из осадка готовят мазки и окрашивают по способу Циля – Нильсена. Метод флотации. Гомогенизированную мокроту прогревают при 550С в течение 30 минут на водяной бане. Затем добавляют 1-2 мл ксилола, дистиллированную воду и повторно встряхивают в течение 10 минут и отстаивают 20 минут при комнатной температуре. Из образовавшейся «сливкообразной» пены готовят мазок, несколько раз наслаивая материал на предметное стекло по мере его высыхания. Мазок обезжиривают эфиром, фиксируют нагреванием и окрашивают по Цилю – Нильсену. РИФ. Окраска флюорохромом основана на способности липидов микобактерий воспринимать эти красители. В зависимости от красителя (родамин или аурамин) M.tuberculosis дают ярко-красное или золотисто-желтое свечение на темно-зеленом фоне. 2. Бактериологическое исследование. Исследуемый материал перед посевом в течение нескольких минут подвергают действию 10% H2SO4 или 5% раствора NaOH для освобождения от сопутствующей микрофлоры, затем тщательно встряхивают и центрифугируют. Обработанный материал засевают на несколько пробирок со средой Левенштейна-Йенсена (или с другими элективными средами). Посевы инкубируют в термостате при температуре 370С в течение 3-4 недель. Вирулентные культуры дают бородавчатые, морщинистые колонии (R-форма) через 21-28 дней. Из них готовят мазки, окрашивают по Цилю-Нильсену и проводят идентификацию по морфологическим, культуральным и биохимическим свойствам. Из биохимических свойств, чаще всего определяют способность исследуемой культуры синтезировать никотиновую кислоту (ниациновая проба Коно). Для определения ниацина к культуре микобактерий в жидкой питательной среде добавляют 1 мл раствора KCN и 1 мл 5% раствора хлорамина. При наличии ниацина через несколько минут появляется ярко-желтая окраска. Это один из важных признаков с помощью которого удается отличить M.tuberculosis, хорошо синтезирующие никотиновую кислоту, от M.bovis, образующих ее в минимальных качествах. Ускоренный метод диагностики туберкулеза – метод микрокультур по Прайсу. Для этого на нескольких предметных стеклах готовят толстые мазки из исследуемого материала. Мазки обрабатывают 2-6% серной кислотой, при этом сопутствующая микрофлора погибает, а микобактерии сохраняют жизнеспособность. Затем мазки тщательно промывают стерильным физиологическим раствором и помещают во флаконы с жидкой питательной средой (цитратная кровь) – сохранившиеся жизнеспособные микобактерии размножаются. Через 7-14 дней извлекают стекла, фиксируют препарат, окрашивают по Цилю-Нильсену и микроскопируют. Вирулентные штаммы микобактерий образуют микрокультуры, имеющие вид жгутов или кос (корд-фактор). Определение чувствительности к антибиотикам и химиопрепаратам проводят методом серийных разведений. 3. Биологический метод применяется для выделения чистой культуры возбудителя из органов лабораторного животного, а также для определения вирулентности микобактерий. Исследуемый материал предварительно обрабатывают серной кислотой для освобождения от посторонней микрофлоры, нейтрализуют и вводят подкожно морской свинке и кролику с отрицательными туберкулиновыми реакциями. Через 4 месяца, если животное не погибнет, его забивают и проводят макро-микроскопическое исследование органов, делают посевы. К M.tuberculosis восприимчивы морские свинки и не восприимчивы кролики. M.bovis высокопатогенны для кроликов. 4. Серологическая диагностика применяется с целью обнаружения антител. С этой целью могут быть использованы различные реакции иммунитета: РСК, РПГА, РИФ, ИФА. Положительные результаты отмечаются не только при активном туберкулезе, но и при инфицировании микобактериями туберкулеза, а также при вакцинации. 5. Кожно-аллергическая проба ставится с туберкулином – очищенной белковой фракцией (РРД), полученной из микобактерий туберкулеза. Туберкулин вводят внутрикожно (проба Манту). Результат учитывают через 24-48-72 ч по образованию гиперемии и папулы. Аллергическая проба Манту применяется для выявления инфицированных лиц, для оценки напряженности иммунитета, отбора контингентов, подлежащих ревакцинации. Таблица 19 Диагностические и профилактические препараты при туберкулезе
Вопросы для самоконтроля Назовите возбудителей туберкулеза и проказы. Каковые морфологические и тинкториальные особенности возбудителей туберкулеза? На каких питательных средах и как растут туберкулезные палочки? Каковы пути заражения и особенности патогенеза туберкулеза? Какие микробиологические методы применяют для диагностики туберкулеза? Как осуществляется бактериоскопическая диагностика туберкулеза? В чем заключается метод обогащения исследуемого материала? Как осуществляется ускоренная диагностика туберкулеза (метод микрокультур)? Какие лабораторные животные наиболее чувствительны к туберкулезной палочке? Какова природа иммунитета при туберкулезе? 10. Какая вакцина используется для активной профилактики туберкулеза? Кем и как она была создана? Каково значение туберкулиновых проб в диагностике туберкулеза? Расшифруйте что такое «РРД»? Какие микробиологические методы используют для диагностики проказы? Занятие 14 |
иквор
ной из мочеполовых органов, осадок мочи, гной из конъюктивы глаза при бленнорее