Саидов М.С. и соавт. Практикум по мед. микробиологии и вирусолог. Исследование при стафилококковых инфекциях(по Борисову Л. Б., 2001)
 Скачать 1.14 Mb.
|
|
ТЕМА: МИКРОБИОЛОГИЧЕСКАЯ ДИАГНОСТИКА ГЕРПЕСВИРУСНЫХ ИНФЕКЦИЙ ЧЕЛОВЕКА. ОНКОГЕННЫЕ ВИРУСЫ. Цель: 1. Изучить методы диагностики герпес-вирусных инфекций человека. 2. Ознакомиться с онкогенными вирусами. Герпесвирусы представлены, морфологически на отличимых друг от друга, группой крупных ДНК-содержащих вирусов, патогенных для человека. Вирион герпесвирусов имеет сферическую форму (рис. Схема вириона герпеса). Геном представлен двунитевой ДНК и состоит из 80 генов, которые кодируют вирусные белки. Капсид состоит из 162 капсомеров, расположенных по кубическому типу симметрии, окружен суперкапсидом, содержащим липиды, что делает вирусы чувствительными к эфиру. Антигенными свойствами обладают гликопротеиды суперкапсида и белки нуклеокапсида. Первые обладают свойствами вариантспецифического, вторые – группоспецифического антигенов. Семейство герпес-вирусов (Herpesviridae) включает 8 типов ДНК-содержащих вирусов, которые вызывают различные заболевания человека. Эти вирусы объединены в 3 подсемейства: подсемейство альфа-герпесвирусов, которое включает ГВЧ-1,; ГВЧ-2; ГВЧ-3; подсемейство бета-герпесвирусов, которое включает ГВЧ-5; ГВЧ-6; ГВЧ-7; подсемейство гамма-герпесвирусов, которое включает ГВЧ-4; ГВЧ-8. Таблица №36 Герпесвирусы человека
Альфа-герпесвирусы. Подсемейство альфа-герпесвирусов включает вирусы простого герпеса 1 и 2-го типов, а также вирус ветряной оспы (вирус герпес зостер). Вирусы простого герпеса первого типа (ВПГ-1) вызывают стоматиты, кератоконъюктивиты, поражение глаз, ЦНС. После первичной острой инфекции в виде стоматитов, чаще у детей, возможно длительная персистенция вируса в организме. При снижении защитных сил организма отмечается обострение инфекции в виде носогубного герпеса (herpes labialis). Вирус простого герпеса 2 типа (ВПГ) вызывает генитальный герпес и герпес новорожденных, инфицирование которых происходит черед родовые пути. Не исключена возможность онкогенного действия ВПГ-2. Источником инфекции является больной и вирусоноситель. Пути передачи: контактный через предметы обихода, половой путь, а также вертикальный путь передачи от матери к плоду. Вирус широко распространен. У 80-90% взрослых людей обнаруживаются антитела к ВПГ. Инкубационный период от 2-х до 12 дней. Заболевание начинается с появления на пораженных участках зуда, пузырьков, наполненных жидкостью. При ВПГ-1 пузырьки появляются преимущественно на коже, слизистых рта, глотки, глаз, ЦНС, а при ВПГ-2 типа пузырьки локализуются в области гениталий. В месте появления пузырьков больные чувствуют сильную, жгучую боль. Вирус Herpeszoster вызывает у детей острую воздушно-капельную инфекцию – ветряную оспу. Ветряной оспой обычно болеют дети от 2-х месяцев до 10 лет. Болезнь характеризуется лихорадкой, появлением папуловезикулярной сыпи на коже туловища, лица, шеи, конечностей, иногда половых органов и полости рта. Заболевание очень заразно, но у большинства протекает доброкачественное. Тяжело протекает у детей до 1 года – возможны осложнения в виде пневмоний, отитов, пиодермий, энцефалитов. В организме беременных женщин, особенно в ранние сроки, обладает тератогенным действием на плод. Вирус Herpeszoster у взрослых вызывает опоясывающий герпес – заболевание характеризующееся образованием везикулезной сыпи по ходу нервов. Опоясывающий герпес обычно встречается у людей перенесших ветряную оспу в детстве. Бета – герпесвирусы. К группе бета-герпес вирусов относятся цитомегаловирусы (ГВЧ-5), а также ГВЧ-6 и ГВЧ-7. Цитомегаловирус (ЦМВ) размножаясь в культуре фибробластов и диплоидных клеток легких эмбриона человека вызывает образование гигантских клеток с внутриядерными включениями, что и дало название вирусам. В зараженных клетках организма, особенно в клетках слюнных желез и почек обнаруживают внутриядерные включения. Вызываемая ЦМВ инфекция имеет латентное течение, часто развивается иммунодефицитное состояние, т.к. вирусы обладают лимфопролиферативным и иммунодепрессивным действием. Источник инфекции – больной или вирусоноситель. Инфицирование может быть при половых контактах, переливании крови, пересадке органов. Возможен вертикальный путь передачи – от матери к плоду. Около 1% новорожденных инфицируется трансплацентарно. У новорожденных – гепатоспленомегалия, желтуха, поражение ЦНС. К бета-герпесвирусам относятся также ГВЧ-6 и ГВЧ-7. ГВЧ-6 был выделен Р.Галло с сотрудниками из лимфоцитов крови ГВЧ-6 может постоянно инфицировать слюнные железы и выделять из них. ГВЧ-6 вызывает внезапную экзантему младенцев от 6 мес до 3 лет с внезапным подъемом температуры до 400С и с таким же спадом на фоне сыпи через 3 дня. Считают также, что ГВЧ-6 является причиной синдрома хронической усталости с субфебрильной температурой, потливостью, артралгией, слабостью. Гамма – герпесвирусы. К этой группе относятся ВГЧ-4 и ВГЧ-8. Для этих вирусов характерна способность размножаться в В-лимфоцитах. Морфологически эти вирусы не отличаются от ВПГ, но отличаются антигенным строением и рядом биологических свойств. ГВЧ-4 – вирус Эпштейн-Барр был выделен из биопсийного материала взятого у африканца с лимфомой Беркитта в 1964 году канадскими учеными М.Эпштейн и У.Барр. Вирус Эпштейн-Барр вызывает: - инфекционный мононуклеоз, характеридующийся высокой лихорадкой, недомоганием, фарингитом, лимфаденопатией. - «волосатую» оральную лейкоплакию – поражение слизистой при СПИДе. - лимфопролиферативные болезни. Вирус является митогеном для В-лимфоцитов, способствует развитию опухолей – лимфомы Беркитта, назофарингеальной карциномы. - ГВЧ-8 был выделен из ткани саркомы Капоши у больных СПИдом – герпес-вирус, ассоциированный с саркомой Капоши. Микробиологическая диагностика герпесвирусных инфекций Материалом для исследования при ВПГ-1 и ВПГ-2 служат содержимое везикул, кровь, а при ЦМВ – инфекции также слюна, моча, ликвор. Методы диагностики герпесвирусных инфекций делятся на прямые и непрямые. К прямым методам относятся: 1) цитологические исследования с обнаружением гигантских многоядерных клеток с внутриядерными включениями; 2) вирусологические исследования путем заражения культур клеток с последующей индикацией; 3) методы иммуноиндикации с обнаружением антигена методом прямой РИФ, ИФА 4) методы генной диагностики, в частности ПЦР. К непрямым относятся серологические методы диагностики, которые заключаются в обнаружении нарастания титров антител в РСК, РН, РНИФ, ИФМ. Четырехкратное нарастание титров антител отмечается при первичном заболевании, а при рецидивах инфекции оно отмечается не более в 5% случаев. Для ранней диагностики ЦМВ инфекции у новорожденных значение имеет обнаружение специфических антител – IgM в диагностических титрах. Диагностическая ценность лабораторных методов герпесвирусных инфекций отражена в таблице. Таблица №37 Лабораторная диагностика герпетической инфекции
Примечание. Чувствительность прямых методов детекции зависит от стадии заболевания, локализации и времени сбора образца: везикула – 90%, пустула – 80-90%, язвы (≤ 5 дней) – до 75%, язвы (<5 дней) – около 50%, корки – 20-30%, а также от длительности доставки материала и условий его хранения. Самостоятельная работа Изучить методы диагностики герпетической инфекции (табл. 37). Зарисовать в тетради вирион герпесвируса. Изучить под микроскопом препарат, приготовленный из материала больного с подозрением на герпетическую инфекцию методом прямой РИФ (Демонстрация). Оценить результаты ИФА для диагностики герпетической инфекции по демонстрационному материалу. Ознакомиться с препаратами для диагностики, лечения и профилактики герпесвирусных инфекций. Указания к самостоятельной работе Прямой метод иммунофлюоресценции обладает достаточно высокой чувствительностью и специфичностью (соответственно 80 и 90%). Материал берут из содержимого везикул, а также из уретры, цервикального канала, шейки матки, прямой кишки и т.д. Материал наносят на чистое обезжиренное стекло, фиксируют ацетоном (или метанолом), препарат обрабатывают флюоресцентномечеными антителами и микроскопируют под люминисцентным микроскопом. При учете результатов обращают внимание на характер и количество антигенсодержащих клеток, локализацию специфического ярко зеленого свечения и его интенсивность. Для вируса герпеса свойственно многообразие в характере свечения: от очагов в виде «глыбок» в ядрах и свечения околоядерного участка цитоплазмы до диффузного свечения всей клетки. Возможно обнаружение многоядерных гигантских клеток. Результат считается положительным при наличии не менее 3 морфологически неизменных клеток эпителия с интенсивным ярко-зеленым специфическим свечением типичной локализации. Иммуноферментный метод. Для серологической диагностики герпес вирусной инфекции, обусловленной ВПГ-1 и ВПГ-2 применяются разнообразные варианты ИФМ. Для определения антител к вирусам простого герпеса в практических лабораториях наиболее широко применяется метод твердофазного иммуноферментного анализа. У обследуемого берут 3-5 мл крови в сухую стерильную пробирку. Для постановки реакции испытуемые и контрольные сыворотки вносят в лунки планшета с сорбированным герпетическим антигеном и инкубируют в течение 30 минут при 370С для связывания антигена и антител. Затем планшету отмывают от несвязавшихся антител ФСБ с твином пятикратно. В лунки вносит антисывооротки, к иммуноглобулиам человека меченую ферментом и инкубируют в течение 30 минут при 370С. Затем следует пятикратное отмывание от непрореагировавших антител. В лунки вносят субстрат для фермента. При наличии антител к вирусам герпеса наступает изменение цвета. Интенсивность окраски раствора соответствует количеству фермента в смеси, следовательно, количеству образовавшихся комплексов антиген-антитело, число которых определяется содержанием противогерпетических антител в сыворотке крови больного. Учет результатов проводят с помощью спектрофотометра, измеряя оптическую плотность на длине волны 450 нм. Результаты исследеования оценивают при соответствующих значениях ОП контролей. Таблица №38 Препараты для диагностики, специфической терапии и диагностики герпесвирусных инфекций
|