Саидов М.С. и соавт. Практикум по мед. микробиологии и вирусолог. Исследование при стафилококковых инфекциях(по Борисову Л. Б., 2001)
 Скачать 1.14 Mb.
|
|
ТЕМА: МИКРОБИОЛОГИЧЕСКАЯ ДИАГНОСТИКА ЧУМЫ И ТУЛЯРЕМИИ Цель: 1. Изучить методы микробиологической диагностики чумы и туляремии. 2. Изучить препараты для диагностики, специфической профилактики и терапии чумы и туляремии. Чума - острое инфекционное природно-очаговое заболевание, относящееся к группе карантинных (конвенционных) инфекций, характеризующееся тяжелой интоксикацией, лихорадкой, поражением кожи, лимфатических узлов, сепсисом и высокой летальностью. Возбудитель чумы Yersinia pestis относится к роду Yersinia, включающий в себя 11 родов, из которых в патологии человека основное значение имеют 3 вида: возбудитель чумы Y. pestis и энтеропатогенные иерсинии, возбудитель псевдотуберкулеза Y. pseudotuberculosis и возбудитель кишечного иерсиниоза - Y.enterocolitica. Возбудитель чумы – J.pestis – овоидная грамотрицательная палочка, которая окрашивается биполярно. Спор не образуют, в организме могут образовать микрокапсулу. Неподвижны. Факультативные анаэробы. Вирулентные формы на плотных питательных средах формируют R колонии, в виде «кружевного платочка». На жидких средах чумная палочка дает пленку со спускающимися нитями – в виде «сталактитов». К основным факторам патогенности относятся: эндотоксин, «мышиный» экзотоксин, ферменты агрессии и защиты: фибринолизин, коагулаза, гиалуронидаза, гемолизин и др. Чума относится к природно-очаговым инфекциям. Резервуаром являются дикие грызуны, переносчики – блохи. Заражение человека происходит при укусе зараженными блохами, при контакте с павшими от чумы грызунами; возможно заражение при употреблении в пищу мяса больных верблюдов. Чума может передаваться и от человека к человеку. В зависимости от путей проникновения различают клинические формы: кожную, бубонную, первично-септическую и легочную. После перенесенного заболевания формируется стойкий иммунитет. Туляремия – острое или хроническое системное природно-очаговое заболевание человека и животных, которое характеризуется лихорадкой, интоксикацией и поражением лифатических узлов. Возбудителем туляремии является Francisella tularensis, открытый в местечке Туляре в 1911 г. Г.Мак-Коем и Х.Чепином. Возбудитель туляремии - Francisella tularensis – мелкая, грамотрицательная коккобактерия, не образует спор, факультативный анаэроб. Плохо растет на питательных средах. Francisella tularensis является внутриклеточным паразитом. Вирулентность связана его способностью размножаться в фагоцитах и подавлять их киллерную активность. Возбудитель образует эндотоксин, фермент агрессии – нейраминидазу. Природным резервуаром являются грызуны, водяные крысы, домовые мыши. Заражение человека происходит при прямом контакте с животными, их трупами. Заражение происходит также через пищевые продукты, инфицированные выделениями больных грызунов. Возможно трансмиссивное заражение через укусы кровососущих насекомых. Больной человек не является источником инфекции, т.е. является биологическим тупиком. Возбудитель может проникать в организм через слизистые оболочки верхних дыхательных путей, глаз, желудочно-кишечного тракта и даже через неповрежденную кожу. Это определяет разнообразие клинических форм: легочная, глазо-бубонная, абдоминальная, бубонная, язвенно-бубонная, генерализованная. Иммунитет носит двухфазный характер – первые недели, месяцы нестерильный, затем переходит в стерильный. Для микробиологической диагностики чумы используют бактериоскопический, бактериологический, биологический и серологический методы исследования, которые проводят в специальных лабораториях, работающих в соответствии с инструкциями о режиме работы противочумных учреждений. Материалами для исследования являются: пунктаты бубонов, мокрота, отделяемое карбункулов и язв, кровь, моча, рвотные массы, трупный материал. Взятие и доставка материала, как и работа с ним, производятся с соблюдением особых правил предосторожности (в противочумном костюме, с применением специальных средств и устройств, предотвращающих контакт с кожей, слизистыми оболочками, а также вдыхание образующихся аэрозолей). Самостоятельная работа Изучить режим в лабораториях особо опасных инфекций. Ознакомиться с противочумным халатом (костюмом). Изучить схему лабораторной диагностики чумы. Изучить культуральные свойства возбудителя чумы. Промикроскопировать и зарисовать готовые мазки из чистой культуры палочки чумы. Изучить препараты, применяемые для специфической профилактики и лечения чумы. Изучить схему микробиологической диагностики туляремии. Промикроскопировать готовые препараты из чистой культуры туляремийных бактерий, зарисовать. Изучить препараты, применяемые для специфической профилактики и лечения туляремии. Указания к самостоятельной работе Микробиологическая диагностика чумы Бактериоскопический метод диагностики. Предварительный диагноз устанавливают на основании микроскопического исследования материала. При наличии в окрашенных мазках грамотрицательных биполярно окрашенных овоидных бактерий диагноз чумы весьма вероятен. Однако необходимо дальнейшее исследование для точного определения вида микроба. Точная диагностика требует выделения чистой культуры и постановки биологической пробы. Бактериологическое исследование: посевы исследуемого материала производят на агар добавлением стимуляторов роста (кровь, сульфит натрия). В термостате при 25-28º С уже через 10-12 часов могут обнаружиться колонии чумной палочки в виде характерных «кружевных платочков». Из типичных колоний делают пересев в пробирку с агаром и на чашку – газоном, куда после подсыхания наносят каплю чумного бактериофага. Определят полученную культуру по характеру роста, микроскопией мазков, реакцией агглютинации со специфической сывороткой, специфическим лизисом бактериофагом («стерильное пятно»). Биологический метод. Для заражения животных используют морских свинок и лишь при отсутствии их – крыс и мышей. Обязательным является заражение втиранием и подкожно. Внутрибрюшинное заражение ускоряет диагностику, но оно применимо только тогда, когда материал не загрязнен посторонней микрофлорой. О чумной инфекции свидетельствуют следующие патологоанатомические изменения: множественные кровоизлияния на слизистой и серозной оболочках, воспаление лимфатических узлов, наличие некротических очагов в селезенке, реже в печени. В мазках из внутренних органов, крови, экссудата обнаруживают большое количество грамотрицательных, биполярно окрашенных бактерий. Методы ускоренной диагностики чумы Метод ускоренного обнаружения возбудителя чумы с помощью бактериофага, внесенного в исследуемый материал Внесение бактериофага в исследуемый материал в момент его посева на агар с генцианвиолетом позволяет обнаружить под микроскопом негативные колонии фага или дорожку в первые часы, когда рост бактерий еще почти не заметен (через 2,5-3 часа). Метод прост, доступен и дает хорошие результаты при высокой концентрации чумного микроба и при относительно большом содержании посторонних микроорганизмов. Определение нарастания титра чумного бактериофага, вносимого в исследуемый материал, где в случае наличия возбудителя фаг начинает размножаться уже через 30-40 минут. Материал сначала подращивают на средах, затем прибавляют генцианфиолетовый (1 мл 0,1 %-ный водно-спиртовой раствор на 100 мл среды) для подавления посторонней микрофлоры, а затем добавляют в пробирки разные концентрации фага. Для ускоренной диагностики чумы большое внимание заслуживает люминесцентно-серологический метод, с помощью которого можно обнаружить возбудитель чумы в воздухе, воде, пищевых продуктах. Серологическое исследование Серодиагностика проводится с целью ретроспективной диагностики, а также при эпизоотических обследованиях в природных очагах чумы. Проводят РНГА с эритроцитами, на которых адсорбирован капсульный антиген возбудителя чумы. Ставят также реакцию нейтрализации антигена, ИФА и непрямую модификацию РИФ. При исследовании сывороток больных или павших грызунов в РНГА результат считается положительным при титре 1:40 и выше. Вопросы для самоконтроля Таксономическое положение, морфологические, культуральные свойства возбудителя чумы. Пути заражения чумой. Какие заболевания относят к карантинным или конвенционным? Бактериологическая диагностика чумы Назовите методы экспресс-диагностики чумы. Охарактеризуйте методы специфической профилактики и терапии чумы. Основные морфологические и культуральные свойства возбудителя туляремии? В чем заключается аллергический метод диагностики туляремии? Препараты для специфической профилактики и лечения туляремии. Указания к самостоятельной работе Методы микробиологической диагностики туляремии Биологический метод Выделить культуры возбудителя от больного путем непосредственного посева материала на среды почти никогда не удается. Присутствие микроба в исследуемом материале обнаруживается только при заражении этим материалом лабораторных животных с последующим выделением культуры из их органов. Исследуемым материалом заражают морских свинок подкожно или внутрибрюшинно, они погибают в течение 10 дней. На вскрытии обнаруживается характерное воспаление и увеличение лимфатических узлов, некротические участки в виде беловато-серых узелков в органах (селезенка, печень, легкие). Производят посев из крови, лимфатических узлов и некротических участков на желточную среду, глюкозоцистиновый агар с кровью и антибиотиками, среду Мак-Коя. Полученную культуру идентифицируют: 1) бактериоскопией мазков; 2) посевом на яично-желточную среду или глюкозоцистиновый кровяной агар; 3) посевом на простой агар, на котором бактерии туляремии не растут; 4) реакцией агглютинации со специфической сывороткой; 5) заражением лабораторных животных с получением у них характерной патологоанатомической картины. Биологическим методом диагностики пользуются также для определения зараженности туляремией диких грызунов и объектов внешней среды: воды, пищевых продуктов и т.д. Серологический метод Серологический диагноз туляремии ставится реакцией агглютинации с сывороткой больного и туляремийным диагностикумом. Агглютинины появляются со 2-й недели заболевания и обнаруживаются много лет спустя после перенесенной болезни. Развернутая реакция агглютинации ставится в пробирках с разведениями исследуемой сыворотки от 1:25 до 1:800. Результат реакции получают после 2 часов стояния в термостате при 37º С и выдерживании 18-20 часов при комнатной температуре (мелкозернистая агглютинация). Положительным результатом считается ясная агглютинация (+++) в разведении сывороток 1:100 и выше. Для ориентировочной диагностики можно воспользоваться реакцией агглютинацией на предметном стекле с цельной и разведенной сывороткой. Кровянокапельная РА. Кровь из пальца в виде толстой капли наносят на предметное стекло и добавляют в нее равный объем дистиллированной воды, чтобы вызвать гемолиз. Рядом с кровью помещают каплю туляремийного диагностикума, обе капли смешивают стеклянной палочкой. У больных туляремией в серопозитивном периоде (при титре 1:100 и выше ) агглютинация происходит немедленно. Весьма чувствительным методом серологической диагностики туляремии является РНГА. Она может быть положительной уже в конце первой – начале второй недели заболевания. В качестве антигена используют туляремийный эритроцитарный диагностикум (бараньи эритроциты, «нагруженные» туляремийным антигеном). Для выявления антител к Francisella tularensis применяют также метод ИФА. Аллергологическое исследование Аллергические пробы применяют для ранней диагностики туляремии (с 5-го дня от начала заболевания). Используют два вида тулярина и соответственно два способа их введения- накожный и внутрикожный. Внутрикожный тулярин вводят в дозе 0,1 мл внутрь кожи ладонной части предплечья (предварительно обработанной спиртом). Результаты пробы учитывают в динамике через 24-48 часов путем осмотра и пальпации места введения препарата. Наличие выраженного инфильтрата и гиперемии диаметром 1,0 см и более расценивается как положительная реакция. У отдельных больных возможно образование пустулы и даже некроза кожи на месте введения препарата, лимфангоита, регионарного лимфаденита с повышением температуры тела до 37,5-38ºС в течении 24-48 часов. Накожную пробу ставят путем втирания стерильным оспопрививальным пером 1 капли накожного тулярина в скарифицированный участок кожи, предварительно обработанный спиртом. Учет проводят, как описано выше; положительной считается реакция при размерах участка гиперемии и инфильтрата 0,5 см и более. У вакцинированных или переболевших туляремией лиц в течение ряда лет аллергические пробы могут оставаться положительными (анамнестическая реакция). Таблица 23 Диагностические, профилактические и лечебные препараты при чуме и туляремии
Занятие 16 Итоговое занятие по темам №8-15 Цель: контроль знаний студентов по разработанным на кафедре тестовым заданиям 1,2 и 3 уровней. Тестовые задания, типовые и ситуационные задачи к разделу приведены в приложении Занятие 17 |