Коринебактерии
 Скачать 1.05 Mb.
|
1. Микроскопическое выявлениемикроскопия нативного препарата («висячая» или «раздавленная» капля) в тёмном поле и фазово-контрастная микроскопия для выявления морфологии и подвижностидлительная окраска по Романовскому-Гимзеобработка серебрением (по Морозову)Негативная окраска по Бурри 2. Серологический метод диагностики сифилисаДоказана антигенная мозаичность трепонем. В связи с этим и наличие в сыворотке крови больного соответственной множественности видов Ат (реагины, комплементсвязывающие антитела, агглютинины, иммобилизины и др.).При каждой стадии сифилиса преобладают те или иные антитела, и, следовательно, одни реакции могут быть положительными, а другие еще отрицательными. Поэтому при диагностике необходимо использовать комплекс серологических реакций (КСР): ►Реакция микропреципитации типа VDRL с кардиолипиновым антигеном с целью выявления антител в инактивированной сыворотке крови - экспресс-метод. ►РСК с трепонемным и кардиолипиновым антигеном - реакция Вассермана ►РИТ - реакция иммобилизации трепонем. ►РИП - реакция иммунного прилипания. ►РИФ - реакция иммунофлюоресценции (непрямой вариант). ►ИФА В серологических реакциях могут наблюдаться ложноположительные результаты, которые обусловлены аутоантителами при заболеваниях с нарушением иммунитета (системная красная волчанка, ревматизм и др.) и в ряде других состояний макроорганизма, например, во время менструаций, за две недели до родов, после приема алкоголя, жирной пищи. Поэтому серологические реакции считают вспомогательной методикой, подтверждающей данные клинической картины, и результаты других лабораторных исследований. Отборочные реакции. Эти реакции используются для обследования лиц, подлежащих периодическим медицинским осмотрам на венерические болезни, больных соматическими заболеваниями и других контингентов. При изолированном применении эти реакции не являются диагностическими, в связи с чем на основании их позитивности диагноз сифилис не устанавливают, обследованного направляют к дерматовенерологу. Обычно с этой целью используют реакцию микропреципитации с сывороткой больного (качественная и количественная методика), также РНГА (как вариант – микрогемаагглютинация с бледными трепонемами – МГА-ТР). Реакцию микроагглютинации учитывают через несколько минут по просветлению жидкости и появлению хлопьев. Диагностические подтверждающие реакции при сифилисе. Используется комплекс серологических реакций КСР: ►Реакция Вассермана с двумя антигенами - кардиолипиновым и трепонемным, ►р-ция микропреципитации типа VDRL, ►РИБТ (реакция иммобилизации бледных трепонем) ►РИФ. При разных формах сифилиса специфичность и чувствительность реакций неодинаковы! Стандартная реакция Вассермана (РВ) ставится в трех рядах пробирок с использованием двух антигенов: кардиолипинового - неспецифического и трепонемного антигена - специфического. Принцип реакции: кардиолипиновый антиген КЛАГ позволяет выявить реагины – аутоантитела к веществу митохондриальных мембран. В качестве КЛАГ используют спиртовой экстракт бычьего сердца, обогащённого холестерином и лецитином. В качестве специфического антигена используют экстракт из бледных трепонем, обработанных ультразвуком. Для индикации используют гемолитическую систему из эритроцитов барана и гемолитической кроличьей сыворотки Специфические антитрепонемные AT (если они есть в сыворотке обследуемого) вступают в соединение со специфическим АГ (или КЛАГ вступает в соединение с реагинами сыворотки). Образовавшийся ИК связывает комплемент – РСК+ (гемолиз отрицательный). РИТ для определения антитрепонемных антител. С этой целью используют сыворотку больного, живые тканевые трепонемы, комплемент. Реакцию ставят в стерильных пробирках и через 20 часов инкубациив термостате оценивают в темном поле результаты по проценту обездвиженных трепонем. Если обездвижены более 50% трепонем, реакция положительная, 31-50% - слабоположительная, меньше — отрицательная. РИФ (непрямая): на препарат с фиксированными трепонемами наносят сыворотку больного, антитела связываются, после инкубации и промывания добавляют АТС, меченную ФИТЦ. При положительной реакции наблюдается свечение трепонем. РИП: вирулентные тканевые трепонемы сенсибилизируют сывороткой больного в присутствии комплемента и эритроцитов. При наличии антител в сыворотке больного трепонемы в комплексе с антителами, комплементом и эритроцитами исчезают из надосадочной жидкости в результате прилипания и осаждения. Используют также РПГА с трепонемным эритроцитарным диагностикумом, ИФА с трепонемным антигеном. |