Микробиология. Лекции по частной медицинской микробиологии Майкоп 2012 Документ подписан простой электронной подписью
 Скачать 1.32 Mb.
|
|
Туберкулиновая проба. 1.Alt Tuberculin Koch – АТК – вытяжка культуры МБТ человеческого и бычьего видов, выращенная в течение 6-8 недель на МПБ с 4% глицерином и выпаренная при С до 1/10 первоначального объема. Содержит продукты жизнедеятельности бактерий, компоненты клеточной стенки и питательной среды (ИБП п. 6.3). в настоящее время не применяется. 2. РРД-Л (Линниковой) (ИБП п. 6.2) – сухой очищенный туберкулин в стандартном разведении. Проба Манту ставят с 2 ТЕ для выявления больных и отбора контингента, подлежащего ревакцинации БЦЖ. Детям и подросткам проводится ежегодно независимо от предыдущих результатов. Вводят 0,1 мл в/к. Учет через 72 часа. - отрицательный результат отсутствует инфильтрат и гиперемия- ребенок здоров, но отсутствует иммунитет. Нужна ревакцинация; папула до 5 мм в диаметре - норма, человек здоров и имеет специфический надежный иммунитет. Вторичное поступление МБТ ведет к активации Т-клеток, цитотоксической реакции и образованию папулы. Это кладбище погибших клеток. Реакция строго специфична - положительная – папула более 5 мм – тубинфицированность. Манту си ТЕ – только в противотуберкулезном диспансере для клинической диагностики и лечении больных. Диагностика. Бактериологический метод занимает 70 сут. Материал мокрота, моча, ликвор, гной. Материал + 0,05% ХГБ (деконтаминация и стабилизация) → инкубация при С, 24 часа → центрифугирование 15 мин 3000 об\мин → посев по 0,2 мл осадка на среды ЛИ, Финна 2, Мордовского под резиновые пробки в наклонном положении → 48 часов Св прямом положении → просмотр через каждые 2 недели в течение 3 мес. Приросте микроскопия по Ц-Н, МФА, посев на среду ЛИ с разными концентрациями антибиотиков (изониазид, стрептомицин, рифампицин, этамбутол, канамицин, 94 протеинамид, офлоксацин, саливилоко-кислый натрий (д.б. отр!)). Подтверждающие тесты ниациновая проба, каталаза, нитрат редуктаза, 5% NaCl (отр). Бактериологический анализатор «Бактек» - рост через 5-7 дней, чувствительность к антибиотикам – через 2-3 недели. - подтверждает диагноз туберкулеза - определяем вид микобактерий - контроль качества лечения - антибиотикограмма. 2. Бактериоскопический. Используют методы обогащения - гомогенизации - материал обрабатывают щелочью, встряхивают, центрифугируют. Из осадка готовят мазок - флотации к гомогенизированному материалу приливают бензин или ксилол, встряхивают. МБТ всплывают вместе с частями бензина. Мазок из пленки - ЛСМ; - фазово-контрастная микроскопия. 3. Биологический на морских свинках. 4. Аллергический (проба Манту. 5. Серологический РСК, РПГА, ИФМ, иммуноблотинг. Говорит не о заболеваемости, а об инфицированности. 80% находок. 6. ПЦР: в мокроте, ликворе - достоверно в крови -? Профилактика. БЦЖ (ВCG)(ИБП п. 6.1) вакцина Кальмета и Жерена. 13 лет пассировали культуру М bovis (270 пересевов) на среде с солями желчи. Эт живые аттенуированные штаммы. Утрачен корд- фактор, но сохранены антигенные свойства. Вызывает клеточный иммунитет и сенсибилизацию организма. Формируется нестерильный иммунитет т.к. в организме есть М bovis. Вакцинированный ребенок может заболеть туберкулезом, разовьется малая форма, ноне будет менингита, ТВС позвоночника. Лечение Программа DOTS. 5 основных принципов - политическая поддержка - диагностика через микроскопию - надежная поставка лекарств - контроль за лечением - регулярная оценка результатов. Лекция № 13.2. Микобактериозы. Выделяют 4 группы атипичных микроорганизмов – микобактериозы – вызывают заболевания внелегочной локализации, легкие поражаются редко. К ним относят 1. М. kansasii- вызывает туберкулоподобные поражения легких, шейные лимфадениты «скрофулы», поражения кожи, редко – диссеминированные поражения. Резервуар – больное животное, т.к. выделяется из молочных продуктов. Антитела к М. kansasii перекрестно реагируют с антигенами М. tuberculosis, у инфицированных лиц реакция Манту положительная. 95 2. М. marinum – возбудитель туберкулеза рыб. Часто выявляется улиц, посещающих бассейн. Вызывает инфицирование ран конечностей, локтевого участка кожи. Образуются изъязвляющиеся гранулемы, спонтанно заживающие в течение нескольких недель. 3. М .ulcerans – вызывает хроническое гранулематозное воспаление кожи и подкожной клетчатки - язва Бурули». 4. М. xenopi – лягушачий. Выделяют из резервуаров для хранения холодной и горячей воды. Вызывает острое и хроническое поражение дыхательных путей у людей с иммунодефицитами. 5. М. intracellulare. По морфологии и культуральным свойствам аналогична М. avium. Вызывает туберкулоподобное поражения легких, почек, кожи, костно - суставной системы. Переходит в генерализованное поражение у больных с иммунодефицитами. Лекция № 13.3. Микробиология лепры. Mycrobacterium leprae Возбудитель проказы или болезни Хансена – хронической генерализованной инфекции с преимущественным поражением эктодермы (покровные ткани и периферическая нервная система. Библейское «zaraath» обозначало моральную и физическую нечистоту. Морфология Грам (+) палочки, прямые или изогнутые, неподвижные, спор не образуют. В мазках располагаются параллельными группами (пачки сигар) или шаровидными скоплениями, окруженных полупрозрачной неокрашенной массой. 96 Клеточная стенка трехслойная, содержит миколовую, лепрозиновую кислоты. Кислото - и спиртоустойчивы. Облигатные внутриклеточные паразиты, во внешней среде быстро гибнут, в трупах сохраняются до нескольких лет. Культуральные свойства Растут на глицериново-картофельном, кровяном, яичном агарах, агаре с сывороткой человека в течение 6-8 нед в виде сухого морщинистого налета. Хорошо культивируются в броненосцах (концентрация возбудителя враз выше, чем в тканях человека. Эпидемиология. Мало контагиозное заболевание. Резервуар – больной человек. Путь передачи – контактный и воздушно-капельный. Патогенез и клиника И.п. 4-6, иногда более 10 лет. Бактерии проникают в нервные окончания → лимфатическме и кровеносные капилляры. Развивается - абортивная инфекция – ограниченные гранулематозные высыпания (исчезают - туберкулоидная форма – образование гранулем на коже и слизистых, поражение периферических нервов. Доброкачественная. Полярная форма - число очагов 1-3, симметричные, выраженная анастезия. Пограничная форма – число очагов больше, асимметричны, анастезия выражена меньше, невриты локтевого, лицевого, ушного и др. нервов. - лепроматозная форма - образование гранулем с «лепрозными» клетками, лимфоцитами, фибробластами. Тяжелая. Сплошные инфильтраты красно- бурого цвета на лицеи дистальных отделах конечностей. Выпадение бровей и ресниц, поражение глаз. Л/у увеличены, содержат большое количество возбудителей. Лепроматозные периоститы и оститы → остеопороз и остеомаляция. Анестезии гранулем нет. Диагностика Материал – соскоб слизистой носовой перегородки, тканевой сок, пунктат л/у. - Окраска по Ц-Н. - Бактериологическая проба на морских свинках. - Кожная проба с аллергеном (лепромином) – отрицательная при лепроматозной форме, т.к. отсутствуют клеточные реакции. Лечение Сульфоны, дапсон, рифампицин, клофазимин – длительно. Лекция № 14. ООИ. Микробиология сибирской язвы. Bacillus anthracis. Сем. Род Bacillus Вид Bacillus anthracis Историческая справка. г. – в Европейской части России погибло 90 000 животных г- в Сибири погибло около 100 тыс. лошадей г. – в Южной России пало 125 тыс. овец. 1848 – 1917гг. в тундрах пало от сибирской язвы 1 514 500 оленей. В России с 1896 по 1913 гг. болело 268 тыс. человек, из которых умерло 25%. В 97 1900-1914 гг. ежегодно заболевало 15-20 тыс. человек ВОЗ – до 9 тыс. заболеваний в год. В России - в настоящее время единичные случаи. Распространено с 600 г. дон. эВ веке – эпидемии, особенно в России. В 1788 г. в опыте самозаражения Андриевский С.С. доказал идентичность сибирской язвы человека и животных. В 1876 г. Кох впервые выделил чистую культуру. Источник инфекции. Больные и павшие животные, а также кожа, шерсть, рога, копыта снятые с забитых или павших с/х животных. Резервуар. Загрязненная почва. В г. вспышка сибирской язвы у убойного скота на скотопрогонной трассе Арзамас - Горький произошел контакт скота с почвой траншей, вырытых при прокладке газопровода. В эпизоотию были вовлечены другие гурты и стада окружающих колхозов и совхозов. Заражение животных. 1) алиментарным путем (корм, питьевая вода 2) трансмиссивным – через укусы мух, клещей, слепней 3) редко- воздушным. Морфология. - крупная Гр (+) палочка, длина – 6-10 мкм, диаметр- 1-1,5 мкм. - аэроб или факультативный анаэроб. - концы обрублены и втянуты. В мазках располагаются парами, цепочками бамбуковая трость. - жгутики отсутствуют. Неподвижны (NB!)- основной диагностический признак. - в организме больных и павших образуют капсулу Капсулообразование происходит на специальных питательных средах, обогащенных сывороткой или кровью. Наблюдается у свежевыделенных штаммов. Все капсульные формы – высоковирулентны; бескапсульные - авирулентны. Для выявления капсул используют окраску по Рамоновскому - Гимзе, Рибегеру (синее тело, розовая капсула. - образуют споры. При хорошем доступе воздуха и определенной влажности вегетативные формы вне организма человека или животного переходят в споровые.В организме больных ив невскрытом трупе споры не образуются. Спора располагается центрально, не деформирует клетку. Хорошо образуются при выращивании на бедных питательных средах с доступом кислорода. Образуется в дистиллированной воде, в незафиксированных мазках. Это защита микроорганизма от воздействия внешней среды. Форма заражения человека и животных – спора. Температурный оптимум спорообразования – 30-35 , диапазон – 12-43 . Спора содержит 3 фермента -нуклеозидрибозидаза -аланинрациназа -аденозиндезаминаза Окраска спор Циль-Нильсону, Рамоновскому - Гимзе. Культуральные свойства - к питательным средам нетребовательна. Хорошо растет на агаре Мартена, Хоттингера. 98 - Т оптимум- 37-38 , рН 7,2-7,6 (7-8). - на плотных средах образуются матовые, непрозрачные, шероховатые колонии с неровными краями, диаметром 3-5 мм - R - форма. Под малым увеличением микроскопа вид львиной гривы, головы медузы – из-за цепочечного расположения палочек, которые образуют нити, отходящие от центра. В форме - круглые гладкие колонии с ровными краями. - на жидких средах в форме рост в виде комочка ваты, бульон остается прозрачным, в форме - равномерное помутнение. Bacillus anthracis вирулентна в форме. Биохимическая активность. - ферментирует почти все сахара с образованием кислоты без газа - образует Н - липаза +; - биостаза +; - желатиназа +; - цитохромоксидаза +; - каталаза +; - пероксидаза +; не обладает уреазной, лицитиназной, фосфатазной активностью (NB !) Антигенная структура. - К - Аг- капсульный- полипептид глутаминовой кислоты, Т- лабильный, групповой.Я вляется Аг вирулентности. - О – Аг – соматический, ЛПС, Т-стабильный, длительно сохраняется во внешней среде ив трупах . Определяется в серологических реакциях (р.Асколи). Нет протективных свойств. - экзотоксин - видоспецифический Аг. Образуют капсульные и бескапсульные формы. Факторы патогенности. I. капсула Определяет вирулентность м/о: подавляет фагоцитоз фактор адгезии на клетках макроорганизма; защита от бактерицидного действия крови. Ее утрата приводит к потере вирулентности. Синтез контролируется плазмидой. II. экзотоксин. Основной фактор вирулентности и иммуногенности. Состоит из 3 факторов, действуют в синергизме а) летальный – оказывает цитотоксический эффект, вызывает отек легких б) отечный – липопротеид, повышает концентрацию цАМФ, вызывает отеки в) протективный антиген – белок - взаимодействует с мембранами клеток, активирует другие компоненты токсина индуцирует синтез защитных антител. Используют в производстве вакцин. Синтез сложного токсина и капсулы контролируются плазмидами pX01 и pX02. Экзотоксин подавляет фагоцитоз, функцию системы комплемента, иммунопротективные свойства организма, активность дыхательного центра и гипоталамуса. Резистентность. 1) вегетативная форма - средняя устойчивость при Т 75 и выше - погибает 99 через мин, 60 С – 15 мин, дезрастворы - через 10 мин. В трупах без доступа кислорода- м/о погибает через несколько дней от сопутствующей гнилостной микрофлоры. Павших животных не вскрывают. 2) Споры вводе сохраняются несколько лет - в почве – 10 - тки лет - УФ- выдерживают 20 сут - кипячение- 45-60 мин - сухой жар – С до 3 часов - автоклавирование -2 атм. – 1 час - 10% NaOH или 1-2% р-р формалина – 2 часа - 5% р-р марганцевокислого калия – 24 часа - 4% р-р хлорной извести -3 мин - хорошо сохраняются в дубленных кожах, засоленном мясе. Патологический материал уничтожают - сухой жар при 180 2-3 часа - кипячение с 2% содой 1 час - трупы кремируют - посевы автоклавируют 2 атм. – 1 час. Фиксацию мазков проводят смесью Никифорова (равные части спирта и эфира, охлажденным ацетоном. Спиртом проводить нельзя, т.к. выживают в нем до 50 сут. Чувствительность к АБ. к пенициллину, т.к. мало вырабатывают пенициллиназу, переходят в форму (сферопласты). На агаре содержащем 0,05-0,5 ЕД/мл пенициллина через 3 часа роста бациллы распадаются на шарики, располагающиеся цепочкой - феномен « жемчужного ожерелья. ко многим АБ: доксициклину, рифампицину, ампициллину, эритромицину, тетрациклину. Изменчивость от качества среды меняется морфология колонии, клетки (цвет, форма -бескапсульные формы Bacillus anthracis – СТИ - сибиреязвенная вакцина -бесспоровый штамм Девиса; может образовывать капсулу фрагментами может не вырабатывать токсин. Эпидемиология и клиника Основной источник инфекции- больные травоядные животные (коровы, овцы, лошади, олени, в меньшей степени свиньи. Выделяют возбудителя с мочой, испражнениями, слюной в почву. Человек заражается - при непосредственном контакте с трупами животных, разделке туш, уходе за больными животными, работе с шерстью, шкурами, через рубочные доски зараженными возбудителем или его спорами. Профессиональное заболевание - на мясобойнях. 98% случаев - кожная форма, проявляется в виде сибиреязвенного карбункула. Покраснение – отек - папула - везикула- пустула - струп, который быстро чернеет. Вокруг него образуются вторичные пустулы, которые сливаются в один черно- коричневый струп. Пораженные участки отечны, с захватом всей поверхности ноги, руки или лица. Болезненности нет. Т 39-40º С. При лечении через 5-6 дней 100 состояние улучшается. при вдыхании пыли со спорами – легочная форма. Протекает в виде геморрагической пневмонии. Смерть надень. при поедании плохо проваренного мяса – кишечная форма - тяжелый энтероколит с геморрагическими проявлениями. Болезнь длится 2-4 дня и letalis. Септическая форма первичная и вторичная (осложнение других форм. Отмечается большое количество возбудителя в крови, ликворе и во внутренних органах. Исход смертельный. Патанатомия – отек вместе инфицирования, отек легких, несвертываемость крови, гиперемия внутренних органов, кровоизлияния в клетчатке. Трупное окоченение слабое или совсем отсутствует, наоборот, наступает быстрое трупное разложение. Инкубационный период - от несколько часов до 6-14 дней (2-3 дня. Иммунитет антитоксический и антимикробный, клеточный и гуморальный. Возможны повторные заболевания. Лечение. - противосибиреязвенный гамма - глобулин (ИБП п. 5.10)– белковые гамма- и бета- глобулиновые фракции, выделенные из сыворотки крови иммунизированных лошадей, содержащие антитела к сибиреязвенному микробу. С профилактической целью - лицам, имевшим контакт с инфицированным материалом. антибиотики курсом 7-10 дней. Профилактика в 1881 г Пастер создали применил вакцину. Все привитые животные перенесли заражение сибирской язвой. в г Л.С. Ценковский – живая споровая бескапсульная вакцина. в 1940 г Гинсбург получил из вирулентной культуры штамма Красная Нива вакцинный бескапсульный авирулентный мутант СТИ (ИБП п. 5.11 - 5.12). Прививают по профессиональным показаниям, длительность иммунитета 12 мес. Лабораторная диагностика Материал мокрота, отделяемое карбункула, кровь, фекалии, моча, почва, вода, пищевые продукты, сырье животного происхождения, мазки крови из периферических вен уха свежего трупа, ухо павшего животного (разрез между двумя лигатурами, место разреза прижигают. При вскрытии отбирают селезенку или печень, от свиней - ткань из области глотки. - бактериоскопический метод по Грамму, Ц-Н, Р-Г (капсула, ЛСМ. Если все (+) , дается ориентировочный положительный ответ. - бактериологический Посев на МПА и МПБ. Через 18-24 часа рост матовых колоний с изрезанной периферией (голова медузы, на МПБ рост в виде хлопьев (комочек ваты, бульон прозрачный. Отличия Bacillus anthracis от антрокоидов Признаки Сибирская язва Антракоиды 1 капсула в организме + - 101 2 подвижность - + 3 гемолиз на КА - + 4 лакмусовое молоко краснеет синеет 5 патогенность для мышей + - 6 лизис с/я фагом + - 7 феномен «жем. ожерелья + - - биологический п/к заражают белых мышей и морских свинок – гибель через 24 часа кролики через 2-3 сут. В препаратах - мазках – капсульные палочки. Клиническая картина- см. у людей. - серологический а) реакция термопреципитации Асколи. Обнаруживают термостабильный О-Аг. Из материала (животное сырье, трупы) извлекают гаптен ( простерилизованный в автоклаве материал измельчают, экстрагируют 16-20 часов при Св физ. р-ре и фильтруют. Экстракт наслаивают нас я сыворотку. В «+» случаев течении 15 сек, ноне позже 2 мин образуется кольцо преципитации на границе х сред. б) для выявления антител латекс-агглютинация и пассивная агглютинация с протективным сибиреязвенным антигеном. - аллергическая проба с антраксином (ИБП п. 5.13) (белково-полисахаридно- нуклеиновый комплекс, извлекаемый при гидролизе из бацилл. Положительная проба выявляет сенсибилизацию у больных (со ой нед. заболевания, переболевших и привитых (РГЗТ). Проявляется впервые дни болезни или после вакцинации и сохраняется несколько (30) лет. |