Микробиология. Лекции по частной медицинской микробиологии Майкоп 2012 Документ подписан простой электронной подписью
 Скачать 1.32 Mb.
|
|
- ПЦР. - ИФА (определение протективного антигена и токсина. Лекция №15. Особо опасные инфекции. Лекция № 15.1. Микробиология бруцеллеза. Род Brucella. Бруцеллез - заболевание людей и животных, вызываемое бактериями рода Brucella. Источник инфекции сельскохозяйственные животные мелкий и крупный рогатый скот, свиньи, верблюды, олени. Для каждого вида животных 102 характерен свой вид бруцелл 1. Brucella melitensis козье – овечий тип. Высокопатогенен для человека – 95-97% всех случаев. Вызывает эпидемии среди животных. Приходится забивать все стадо. 2. B. suis. Источник инфекции свиньи, грызуны, зайцы, олени. Высокопатогенен для человека до 1% случаев. 3. B. abortus. Бычий тип. Менее патогенен для человека. Вызывает спорадические заболевания 1-3% случаев заболевания. Бруцеллы могут переходить на другие виды животных волки, лисицы, грызуны, лошади, сайгаки и т.д. Миграция бруцелл переход одного вида возбудителя на другой вид животного. Например, B. melitensis укоров. Бруцеллы, не являющиеся основными представителями, вызывающими заболевания у людей B. neatome – и.и. древесные крысы. B. ovis – и.и. овцы. Для людей не патогенны. (Австралия. B. canis – собачий тип. Вызывает заболевание только у собак. Морфология. Мелкие грамотрицательные коккобактерии, длиной 1-1,5 мкм, диаметром 0,4-0,6 мкм. Спори капсул не образуют. Медленно растут (клинически медленная инфекция. Культивирование. 1. Среда эритрит- агар Входит многоатомный спирт эритрит. Его много в околоплодной жидкости. Оптимум рН 7,2-7,4. 2. Мясные среды с добавлением 1% глюкозы, 1% глицерина. Оптимум рН 6,6-6,9. На обогащенных средах рост через 2-3 сут. На простых средах – до 10 сут. Рост на бульоне до 1 месяца. Колонии – нежные, гладкие, беловатого цвета, полупрозрачные. В центре колонии при солнечном свете яркое свечение – полусфера. Первичные посевы растут при повышенном содержании СО, последующие при обычных условиях. Одна порция материала культивируется в обычных условиях, две – при 10% СО 2 Биохимически неактивны, в наших условиях можно определить только уреазную и оксидазную активность. Антигенная структура. Имеются А, М, R - антигены. Присутствуют в ЛПС. Различают с помощью бруцеллезных сывороток. Имеется антигенное родство с другими видами м/о: холерой (у привитых против холеры реакции Хеддельсона положительна первые 3 мес туляремией - Уесть общие Аг с иерсиния энтероколитика, серовар 9. Серологически не дифференцируются. Можно отличить только по пробе Бюрне. 103 Факторы патогенности. - эндотоксин - способность подавлять фагоцитоз - ферменты гиалуронидаза и др - аллергенные свойства - считается, что имеется экзотоксин. Эпидемиология. Проявления болезни у крупного и мелкого рогатого скота – инфекционные аборты. Могут носить массовый характер. У свиней – хрониосепсис с поражением суставов, яичек. От больных животных возбудитель выделяется с молоком, мочой, испражнениями, гноем и особенно много с околоплодными водами. Связывают с наличием в оболочках плода многоатомного спирта – эритриола, который является фактором роста для бруцелл. Пути заражения человека - контактный. Возбудитель проникает через кожу рук, слизистые оболочки носа, рта, глаза – заносится грязными руками - контактно- бытовой (работники животноводства - пастухи, доярки, скотники, ветеринары - алиментарный (непастеризованное молоко и молочные продукты из него, вода. Патогенез и клиника. И.п. – 1 нед – несколько месяцев. Возбудитель по лимфатическим путям попадает в лимфаузлы и размножаются в них. Чаще поражаются миндалины, заглоточные, шейные, подчелюстные узлы илу кишечника. Далее попадает в кровь → по всему организму. Поражается лимфо – гемопоэтическая система. Происходит сильная аллергизация организма. Протекает как хрониосепсис. Обусловлено незавершенным фагоцитозом м/о недоступны для АТ и АБ. Внутри клеток переходят в формы, длительно персистируют в организме, могут реверсировать и вызывать рецидив. Клиника. Многообразная. Зависит от аллергизации, интоксикации организма и пораженных органов. Часто поражаются лимфатическая, сосудистая, гепатолиенальная, нервная и особенно опорно- двигательная системы. Длительное течение болезни (до 10 мес. Приводит к потере трудоспособности, инвалидности. Иммунитет. Постинфекционный – длительный, прочный, перекрестный (против всех видов бруцелл, возможны повторные заболевания. Обусловлен Т- лимфацитами, макрофагами. У иммунных людей и животных фагоцитоз завершенный. Роль АТ – стимуляция фагоцитоза. При инфицировании большими дозами и высоковирулентными штаммами иммунитет нарушается. Лабораторная диагностика. Клинически диагноз не ставят. Материал для исследования 104 Острый, лихорадочный период кровь, ликвор, пунктат грудины (при нейробруцеллезе). Хронический период моча, желчь, мокрота (редко, секционный материал. Пунктат из сустава брать бесполезно, т.к. это проявление аллергической реакции От животных - абортированный плод, содержимое желудка (легко получить материал, молоко. - бактериологический метод Культуру трудно выделить. Выделяют только у больных с В. melitensis в лихорадочном периоде, у хронических больных не выделяется. - по Костанеда: 5-10 мл крови из локтевой вены засевают в 3 флакона с 50- 100 мл печеночного бульона. Два из них инкубируют в условиях 10% СО. Рост через 10 дней- 1-1,5 мес (45 дней помутнение, слизистый осадок, в мазках грамотрицательные кокобациллы. Ставят РА на стекле с агглютинирующими сыворотками, определяют чувствительность к фагу. - посев на плотные среды с ингибиторами посторонней м/ф (генцианвиолет, пенициллин. Преимущества рост через 2-3 сут, быстрый ингибируется посторонняя микрофлора посев min количества крови. Засевают 5-6 чашек по 0,2- 0,3 мл культура сохраняет Аг состав в свернутой крови выделить нельзя. Вид бруцелл определяют по потребности в СО (есть у В образованию Н (B. melitensis не образует росту на средах с бактериостатиками (фуксин, тионин)- (Вне растет с тионином); агглютинации специфическими сыворотками -уреазной активности (нету В пробе с ТБ. (Только у В - биопроба. Для выделения культуры из загрязненного материала. Вводят п/к, в/брюшино, н/к морским свинками белым мышам. Вскрывают через 20- 30 дней. Кусочки органов илу засевают на пит. среды для получения ч.к. - ПЦР. - серодиагностика. Вначале инкубационного периода и заболевания появляются неполные АТ, держаться долго – до 5-10 лет. Полные АТ появляются через месяц после заболевания, максимальных титров достигают к 6 меси держаться до года. 1. реакция Хеддельсона. Неразведенную сыворотку больного раскапывают на стекле в объемах 0,04, 0,02, 0,01 мл в каждый объем вносят концентрированный единый бруцеллезный диагностикум. Учет РА в объеме А) 0,04 – слабоположительная реакция Б) 0,04 и 0,02 мл – положительная В) во всех трех объемах – резко положительная. Реакция положительная вначале заболевания (неполные АТ, востром и 105 хроническом периоде. Р-ция качественная, говорит о заражении, ноне о заболевании. При отрицательном результате р. Райта можно не ставить. 2. реакция Райта. Пробирочная реакция агглютинации. Сыворотку больного разводят от 1:25 до 1:800, вносят разведенный 1:10 бруцеллезный диагностикум. РА в титре 1:100 – слабоположительная; 1:200-1:400 – положительная 1:800 – резко положительная. Реакция положительная вострой и подострой стадии заболевания. Выявляет только полные АТ. Феномен зоны или прозоны» - т.к. много неполных АТ агглютинации не наблюдается в низких разведениях сыворотки, в следующих разведениях РА положительная. 3. РНГА (выявляет неполные АТ, положительна вначале заболевания и до 1 года 4. р-ция Кумбса (выявляет неполные АТ, положительная вначале заболевания и на протяжении всего периода. У хр. больных р. Хеддельсона сомнительная, р. Райта отрицательная, р. Кумбса положительная, т.к. выявляет неполные АТ. Серологические реакции могут быть отрицательными у людей с иммунодефицитами; 5. ИФА. Положительный титр 1:400; 6. РСК, ОФР, МФА; - кожно- аллергическая реакция Бюрне с бруцеллином (ИБП п. Ставится в комплексе с серологическими реакциями. Положительная у больных, переболевших, вакцинированных. В основе лежит РГЗТ, аллергизация наступает через 3 мес. Пока в организме есть единичные клетки бруцелл реакция положительная. Держится более 10 лет. Тяжелым больным р-ция не ставится, могут развиться некрозы. Ставят здоровым людям перед вакцинацией, при обследовании очага, хроническим больным в стадии ремиссии. Сроки постановки методов - бактериологический, р. Хеддельсона, р. Райта, РНГА – вострый и подострый период. р. Кумбса, р. Бюрне, р. Хеддельсона – при хроническом бруцеллезе. р. Хеддельсона, р. Райта – при эпидобследовании. Бактериофаги. Впервые получен умеренный БФ в г. из сточных вод коровника тбилисский - ТБ). Фаг стабилен, лизирует только В. abortus. Чувствительность к АБ: - В. abortus и В. melitensis устойчивы к пенициллинам (500 Ед / мл. Вакцинные штаммы и В. suis чувствительны к пенициллину в отличие от вирулентных штаммов. Высокочувствительны к тетрациклину, рифампицину, гентамицину, стрептомицину, левомицетину. Специфическая профилактика (ИБП п, 5.2) Живая бруцеллезная вакцина из штамма B. Abortus – ЖБВ. Химическая бруцеллезная вакцина – ХБВ. В России нет. 106 Убитая лечебная вакцина – используют для лечения хронического бруцеллеза. Лекция № 15.2. Микробиология туляремии Francisella tularensis. Возбудитель - Francisella tularensis. Открыт Мак-Коем и Чепином, изучен Френсисом (род Вид – по названию местности (Туляре). Морфология 107 Мелкие неподвижные кокковидные капсулированные палочки (коккобактерии). Выраженный полиморфизм в мазках культур – кокки, в мазках из органов – коккобактерии. Спор не образуют, капсула ложная, неподвижны. При окраске специальными методами дают биполярную окраску. Строгие аэробы. Т оптимум С, рН 6,7-7,2. Культуральные свойства На обычных средах не растут, требуются аминокислоты, тионин, Mg. Используют среды - Маккоя (свернутая желточная среда - агар с переваром сердечной мышцы и 5% крови барана - желточные среды с тканевыми экстрактами, цистином, глюкозой, кроличьей кровью. Колонии мелкие – 2 мм через 3-5 сут. На жидких средах рост поверхностный. Расщепляют некоторые углеводы с образованием кислоты, образуют Н. Вирулентные формы образуют S- формы. Т оптимум – СВ среды добавляют пенициллин – тормозит рост сопутствующей микрофлоры. Факторы патогенности. - псевдокапсула – угнетает фагоцитоз, адгезия на клетках респираторного и кишечного трактов - нейроминидаза – адгезия - фибринолизин, липаза – проникновение внутрь клетки - эндотоксин - аллергенные свойства клеточной стенки - способность размножаться в фагоцитах и подавлять их киллерный эффект внутриклеточный паразит - взаимодействие с Fc- фрагментом - нарушение активности макрофагов и комплемента. Антигены. О- Аг, родство с Аг бруцелл. -Vi- Аг (капсульный, содержат вирулентные штаммы. S – форма- вирулентная Диссоциация в R- форму – утрата вирулентности. Устойчивость во внешней среде - фураж, зерно – мес - вода – 3 мес - лед – мес. - чувствительна к УФ, высоким Т (100°- мгновенно, 50% спирту, антисептикам – гибель через 5-10 мин. - выдерживает ↓ Т в замороженном состоянии – 10 лет, фураж, зерно- 8-20 сут, трупы грызунов – 6 месяцев. - гнилостная микрофлора является антагонистом, т.к. м/о размножаются быстрее, чем туляремийный микроб. Эпидемиология Распространенны в пресноводных водоемах. Паразитирует у человека, млекопитающих, птиц, членистоногих, рыб и земноводных. Основные и.и. для человека – полевка, домовая мышь, водяные крысы, 108 ондатры, зайцы (русаки беляк -1 гр высоко восприимчивые и чувствительные животные – мышевидные грызуны, водяные крысы, зайцы, песчанки. Смертельная доза 1 микробная клетка. -2 гр. – высоко восприимчивые, но менее чувствительные животные – серые крысы, суслики, хомячки, нутрии, белки, человек. Заражение от 1 мкб кл, DLM – от млрд. мкб. кл. -3 гр- устойчивы к высоким заражающим дозам – хищники (лисы, хорьки, собаки, еноты, овцы, ласки. - 4 гр- невосприимчивые – копытные, холоднокровные, птицы. Переносчики инфекции кровососущие членистоногие иксодовые, гамазовые клещи, блохи, слепни, комары, москиты. Пути заражения - контактный – через кожу и слизистую оболочку глаз - инокулятивный (трансмиссивный) – при укусе переносчика - алиментарный – через ЖКТ; - аспирационный - через дыхательные пути (сельхозработы). Восприимчивость человека высокая, от человека человеку не передается биологический тупик. Патогенез Возбудитель размножается в лимфатических узлах, часть его разрушается с выделением эндотоксина – формируются туляремийные бубоны. Возбудитель проникает в лимфо- и кровоток, выделяются новые порции эндотоксина, происходит сенсибилизация. Образуются метастазы в печени, селезенке, лёгких, костном мозге. Клиническая картина.И.п. -2-8 дней, начало острое. Различают 4 клинические формы. 1. бубонная – 70-80% всех случаев. Возникает при укусе насекомого, контакте с кровью и выделениями больного животного, загрязненными объектами (зерно, сено) и купании. Надень вместе внедрения образуется первичный аффект – язва. Различают глазо – бубонную, ангинозно- бубонную, язвенно- бубонную формы. 2. легочная - при гематогенном заносе в легкие или воздушно- пылевой передаче. Может от человека к человеку передаваться воздушно- капельным путем. 3. генерализованная – при употреблении зараженной пищи. 4. абдоминальная Язвенные очаги в ЖКТ, воспаление брыжеечных л/у. Постинфекционный иммунитет прочный, стойкий, пожизненный. Обусловлен Т-лимфоцитами, макрофагами (приводит к развитию ГЗТ) и антителами. Лабораторная диагностика. Материал гной из бубонов, отделяемое глаза, пунктат лимфатических узлов, мокрота, кровь, секционный материал. При любой форме берут кровь 5-7 мл. 1. бактериоскопический. Окраска по Грамму и метиленовым синим. МФА. 109 2. бактериологический. От больного возбудитель не выделяется, сначала используют биологический метода затем из посевов крови и органов выделяют чистую культуру. Используют ослабленных животных предварительное введение желтка или гидрокортизона) Изучают морфологические, культуральные, антигенные (РА со специфической сывороткой) свойства. 3. ПЦР. 4. биологический - чувствительны морские свинки, белые мыши. 5. серологический Обнаружение антител со ой недели заболевания - РПГА, - пробирочная РА, - РНГА, Диагностический титр 1:100. Обязательно прослеживается нарастание титра АТ в парных сыворотках. - экспресс- метод - кровяно-капельная реакция капля крови больного в дистиллированной воде (лизис эритроцитов) смешивают с диагностикумом. При титре 1:100 немедленно появляется РА. - непрямой ЛСМ с сывороткой больного, разведенной 1:10. Обнаружение антигенов в РПГА (РНАг, РТПГА), ИФА при исследовании материала внешней среды (трупы грызунов, погадки, помет. 6. кожно - аллергический (ИБП п. 5.7). Проба с тулярином (взвесь убитых нагреванием до С бактерий) положительна при в/к пробе с 3-5 дня, н/к- с 6-8 дня заболевания у больных, а также у переболевших и вакцинированных. Профилактика В группах риска применяют живую туляремийную вакцину (ИБП п. 1. Работники лаборатории при работе в туляремийных природных очагах 2. с/х рабочие в местностях неблагоприятных по туляремии. Лекция № 16. Микробиололгия чумы. Yersinia Третья пандемия чумы началась в Гонконге в г, продолжалась 20 лет, унесла 10 млн. человек. Возбудитель чумы выделен Иерсин и Китазато, доказали роль крыс в эпидемиологии чумы. 110 Сем. Enterobacteriaeceae Род Yersinia Вид Y. pestis – возбудитель чумы Y. pseudotuberculosis- возбудитель псевдотуберкулеза Y. enterocolitica – возбудитель кишечного иерсиниоза. Морфология. - короткая овоидная Гр (-) палочка с биполярной окраской- выявляется метиленовой синькой Леффлера- окраска ярче по полюсам - длина мкм, диаметр 0,3-0,7 мкм - в мазках из бульонной культуры располагаются цепочкой, из агаровой культуры - беспорядочно - характерен полиморфизм - образуют шаровидные, колбовидные, нитевидные (long), формы в субоптимальных условиях - спор, жгутиков не имеет - образует капсулу белковой природы при 37 С. Культуральные свойства. - аэроб - хорошо растет на обычных питательных средах - Т диапазон – 0-45° С, оптимум- 27-28 С. рН 6,9-7,1; -вирулентные штаммы образуют формы на жидких средах через 48 часов образуется нежная пленка, от которой спускаются нити (сталактиты, на дне рыхлый осадок, бульон остается прозрачным. При встряхивании – агглютиногенный рост. Y.pseudotuberculosis дает диффузное помутнение. на плотных средах – 3 стадии через 10 часов рост в виде бесцветных пластинок - битое стекло через 18-20 ч- при микроскопии видна светлая кружевная зона вокруг центральной желтоватой части- кружевные платочки через 40-48 ч – очерченный бурый центр с выраженной периферической зоной - взрослая колония. Потребность в питательных средах. для ускорения роста (до 3 сут) добавляют стимуляторы роста гемолизированную кровь, сульфит натрия, сарцины в лиофилизированном виде, генцианвиолет - для подавления роста гнилостной м/ф. слабовыраженная протеолитическая активность - нужны среды с глубоким расщеплением белка агар Хоттингера, гидролизат селезенки, рыбной муки. Среда должна содержать готовые аминокислоты. природный ауксотроф - паразитирует в организме. Резистентность. в мокроте- до 10 дней к дезинфектантам обычная чувствительность (5-10 мин в блохах – 1 год в клещах – 5 лет нагревание до 50 С – гибель через 30-40 мин 80 С – гибель через 5 мин С - гибель через 1 мин 111 УФ - 2-3 часа – гибель пищевые продукты зерно, хлеб, овощи ( при + Т) – 3 мес вода дней в стерильной почве- до 1 года, в нестерильной – до 7 мес -1%р-р хлорамина – 3 мин -5% лизол- 5 мин устойчивы к низким Т. Антигенная структура. Однородная. Имеется капсульный Аг -фракция поверхностный гликопротеин. Образуют вирулентные штаммы в организме человека, животных, на спец. пит. средах ( экстракт селезенки. При Сна сутки рост слизистых колоний, т.к. есть капсула. Защита от фагоцитоза. антигены Т, V-W. |