Микробиология. Лекции по частной медицинской микробиологии Майкоп 2012 Документ подписан простой электронной подписью
 Скачать 1.32 Mb.
|
|
- ген tox R – позитивный контроль, мутация этого гена снижает продукцию токсина враз- ген htx – негативный контроль, мутация в этом гене усиливает продукцию токсина враз. Выделяют штаммы - холерогенные (вирулентные - слабохолерогенные; - нехолерогенные (невирулентные). Прямые методы обнаружения холерогена: 1. Биологическая проба на кроликах Внутрикишечное заражение кроликов- сосунков - развивается диарея, безвоживание, гибель. На вскрытии - толстый кишечник увеличен и наполнен прозрачной жидкостью с хлопьями и пузырьками газа 2. РИФ, ИФА; 3. Реакция пассивного иммунного гемолиза – холероген связыавется с gm1 72 (сиалоганглиозид) энтероцитов, которые лизируются при добавлении антитоксических АТ и комплемента; 4. заражение культуры клеток - активность аденилатциклазы; 5. использование в качестве ДНК-зонда фрагмента хромосомы V. с, несущего оперон холерогена. 6. ПЦР. Косвенные признаки отсутствия холерогена: 1. отсутствие заболеваемости среди людей 2. положительная гемолитическая активность 3. отсутствие лизиса фагом ХДФ-5. Резистентность. выживают при низких температурах - на льду -1 месяц - в морской воде – 1,5 месяцев - в речной воде – от нескольких дней до нескольких недель - в почве – 3 месяца - в испражнениях – 3 суток - на полотняном белье – до 2 суток - на влажном материале – недолго - при С – гибель через 2 мин при С – мгновенно - высокочувствительны к хлору, кислотам, дезинфектантам; - долго сохраняются и размножаются вводе открытых водоемов и сточных водах, богатых органическими веществами, с щелочной рН, температурой выше С. Эпидемиология. - антропоноз; - и.и.: больной, вибрионоситель, загрязненная вода - заражение фекально – оральный способ, пути передачи - вода, контактно- бытовой, пищевой - больной выделяет испражнения от 100 млн до 1 млрд / на мл - вибрионоситель- 100-100 тыс./мл; - заражающая доза – 1 млн. вибрионов - переболевшие выделяют возбудитель 7-10 дней, носители – 7- 42 дня. - с О (токсигенные и нетоксигенные) сохраняются вводных экосистемах в виде некультивируемых форм. Обнаружение методом ПЦР vct- генов (НФБ). Клиника. - и.п. – от нескольких часов до 6 суток (2-3 дня - возбудитель попадает в тонкий кишечник → пенетрация слизи с помощью ферментов → выделение холерогена в клетку (энтероцит) → гиперсекреция жидкости диарея, обезвоживание, обессоливание организма - тяжело протекает у людей с пониженной кислотностью - 1 стадия – энтерит. Только понос в виде рисового отвара, повышение Т тела - 2 стадия – гастроэнтерит, присоединяется рвота, Т тела нормальная, понос без предшествующих позывов, затем вид рисового отвара, рвота 73 кишечным содержимым - 3 стадия – холерный алгид (переходит без лечения. Потеря НО, солей - 4 стадия – холерная кома снижение АД, компенсированная тахикардия, нитевидный пульс, нарушение обмена K и Na, анурия, накопление азотистых шлаков, цианоз, снижение тургора кожи, симптом очков, судороги. Letalis за счет снижения СД, в развивающихся странах до 50%. Иммунитет. Постинфекционный: прочный и длительный. Антитоксический и антимикробный, обусловлен АТ, клетками иммунной памяти, фагоцитами, Ig A. Лабораторная диагностика. 1. Бактериологический метод. Биохимические свойства 1. расщепляет углеводы и многоатомные спирты до К глюкоза сахароза манноза мальтоза не расщепляют арабинозу лактозу инозит дульцит салицин протеолитическая активность (+) (желатин, казеин 3.лецитиназа (+); амилаза (+) (расщепление крахмала- диастатическая активность 5.нейроминидаза (+); каталаза (+); расщепляет ам-кту триптофан до индола (посев в 1% п.в. – в ней есть триптофан) (+); 8.ацетилметилкарбинол (р-ция Фогес-Проскауэра): биовара Эль-Тор (+); биовар классика (–). 9. не выделяют Н 10. гемолитическая активность б/в Эль-Тор (+) (особенно из внешней среды б/в классика (–). 11. выделен белковый фермент гемолизин. У переболевших людей в крови обнаруживаются АТ к гемолизину (замаскированный токсин, но выделенные культуры гемолитической активностью не обладают. Говорят о присутствии Hly- гена, но об отсутствии его экспрессии. Ускоренные методы диагностики нативного материала. - ЛСМ (РИФ - РИВ (реакция иммобилизации вибрионов О - холерной сывороткой - РНГА (с антительным эритроцитарным диагностикумом); - ИФА; Ускоренный метод по Ермоловой. 74 Посев 2-3 петли материала в 3 пробирки - 1% п.в. - 1% п.в. + О-холерная сыворотка в титре 1: 1000 - 1% п.в. с крахмалом Учет через 3 часа при Св пробирке – помутнение, пленка - во ой на дне зонтик, при встряхивании – агглютинация - в ю – закапывают 2-3 капли Люголя (йод, посинения не наступает, т.к. вибрионы расщепляют крахмал. Фаготипирование. Набор фагов для типирования I. (Мукереджи) с asiatica V. cholerae eltor. Используются для определения биовара. II. ТЭПВ 1,2,3,4,5,6,7 – для фаготипирования неагглютинирующихся холерной О сывороткой вибрионов. Выделены 7 фаготипов V. cholerae не О III. ДДФ (дифференциально- диагностичекий фаг) – для идентификации вирулентных м/о вида V. cholerae O1 классического и эль-тор биоваров, V. cholerae не О, V. albensis и дифференциации от - V. parahamoliticus; Aeromonas; Plesiomonas; Commamonas; Pseudomonas; Escherichia. IV. Монофаги ХДФ-3, ХДФ-4, ХДФ-5 – определение вирулентности вибрионов эль-тор (сероваров Инаба, Огава, Гикошима): Если из 3 фагов 3 или 2 лизируют, гемолиз (-), то вирулентные Если из 3 фагов 3 или 2 лизируют, гемолиз ±, то слабовирулентые; Если из 3 фагов 1 или 0 лизируют, гемолиз ±, то авирулентные. V. Фаги ctx – (не вирулентные ctx + (вирулентные. Лечение. 1. регидротация и восстановление ВСО; 2. антибиотикотерапия (тетрациклин после прекращения рвоты. Профилактика (ИБП п. 3.3-3.5). 1. вакцина холерная корпускулярная инактивированная); 2. вакцина холерна (холероген – анатоксин + О-антиген); 3. вакцина холерная бивалентная химическая. 75 Лекция № 10.2. Вибриозы. Прочие патогенные виды Vibrio. V. parahaemoliticus V. alginolyticus V. vulnificus V. fluvialis V. mimicus Галофильные вибрионы, обитатели морской и океанической воды, вызывают ОКИ, т.к. продуцируют холероподобный токсин LT. Для роста требуется повышенное содержание NaCl (10%). Заражение происходит при купании, употреблении пищевых продуктов, вызывают раневые инфекции. V. parahaemoliticus - вызываюто. гастроэнтериты, раневые инфекции, бактериемию. Галофильный вибрион. Причина острых диарей в Японии. И.и. - блюда из морепродуктов, приготовленные с нарушением технологического процесса, употреблении сырых моллюсков, рыбы, пищи, обрызганной морской водой. 76 Энтеротоксин вызывает энтерит – сильные боли в животе, обильный водянистый стул через 24 часа после инфицирования. Letalis у детей и пожилых людей. Гемолизин обнаруживают по гемолизу на КА с 7% NaCl. V. vulnificus. Заражение происходит - алиментарным путем при употреблении мидий, устриц. Часто развивается улиц со сниженным иммунитетом, циррозом печени, сахарным диабетом. Вызывает септицемию, проявляющуюся буллезными воспалениями кожи, лихорадкой, ознобом, прострацией, гипотонией, letalis – 50%; - раневые инфекции – при контакте раны с морской водой. Проявляется опухолью с развитием некроза тяжелые целлюлиты, миозиты, имитирующие газовую гангрену Факторы патогенности - капсула - цитотоксин; - гемолизин; - ферменты эластаза, коллагеназа, фосфолипаза. Клиника. - утонувших людей вызывает пневмонию - эндометриты; - требуется АБ терапия гентамицин, тетрациклин, левомицетин. V. fluvialis. - вызывает холероподобные гастроэнтериты (сильная рвота, диарея, абдоминальные боли, лихорадка, дегидротация); - факторы патогенности энтеротоксин. Лекция №11. Микроаэрофильные грамотрицательные палочки. Лекция № 11.1. Микробиология кампилобактериозов. Род Campylobacter. Являются возбудителями ОКИ 3-15%. Наибольшее значение имеют виды С. jejunii, C. coli, С. Термофильные. Инкубируют при С. реже C.fetus – мезофильные – С. Возбудители артритов, менингитов, васкулитов. Морфология. - грам (-), тонкие изогнутые палочки. Образуют один или более витков спирали С или S- формы (крылья чайки присоединении двух клеток в короткую цепочку - подвижные (стремительное штопоро- и винтообразное движение) - имеют одиночные жгутики расположенные на одном или обоих частях клетки - споры, капсула отсутствуют 77 - микроаэрофилы, капнофилы- О- 5%, СО- 10%, N -85%; - окрашиваются анилиновыми красителями (фуксин) в течение 10-15 сек. Другие м/о только через 2 мин - хемоорганотрофы, нетребовательны к питательным средам, не сбраживают углеводы - оксидаза (+); - уреаза (+). АГ структура. Имеет О, К, и Н –Аг. По О-Аг различают 50 серогрупп. Факторы вирулентности. - жгутики - фермент муциназа; - пенетрационная активность - энтеротоксины, вызывают нарушение водно-электролитного обмена через образование цАМФ (по действию холерогена); - эндотоксин - цитотоксины (разрушают эпителий тонкой кишки- дизентериеподобный характер, проникают в кровяное русло, вызывают генерализованную инфекцию. Клиника. Диарея, дизентериеподобное состояние, энтериты, поражение паренхиматозных органов, сепсис. И.п. – 1-10 дней. Диарея 10-20 разв сутки, в испражнениях кровь. Обезвоживание редко. Тяжело протекает у детей 1-3 года. Иммунитет. Гуморальный, антитела не имеют выраженных протективных своиств. Эпидемиология. Источник инфекции – больные с/х животные, КСР, дикие, домашние птицы- основной резервуар - город – кошки -4%, собаки – 27%; - у переболевших лиц наблюдается бакносительство до 10 нед - здоровое носительство – 10%; - продукты питания – птица, печень КРС, сырое молоко. Путь передачи - алиментарный (молоко, птица, говядина- водный (загрязненной испражнениями животных - контактно – бытовой (уход за больными людьми и животными. При Св окружающей среде сохраняются около недели (до 5 недель. Чувствительны к Т выше С, УФ- лучам, высыханию, ↑ и ↓ рН. Лабораторная диагностика. Плотные среды - посев через фильтры на специальные питательные среды с использование анаэростатов с газовой смесью. Используется питательная среда для роста бруцелл + вещества, снижающие ОВП (тиогликолят натрия, метабисульфит натрия, пируват натрия) + АБ (новобиоцин, бацитроцин, триметоприм). Рост через 2-3 сут. бесцветных, прозрачных, мелких колоний, гемолиз (-); 78 Жидкие среды – диффузное помутнение с трудноразбиваемым осадком Полужидкие среды – диффузное мутное кольцо толщиной 1-4 мм под поверхностью среды Диагностика - микроскопия по грамму - экспресс- метод - б/х активность - тип дыхания - серологический метод (определение антител) в ИФА. Лекция № 11.2. Микробиология хеликобактериозов. Род Helicobacter. Возбудитель - H. pylori Морфология. - крупнее кампилобактерий; - пучки жгутиков си обеих сторон клетки (4-5); - растут при Сне растут 25-28 и С - через 48-72 часа растут в виде мелких колоний на КА и ША. Патогенез. Проникают в слой слизи, прикрепляются к эпителию клетки → в крипты и железы слизистой оболочки разрушение их. Аг м/о стимулириуют миграцию нейтрофилов → воспаление → выход мочевины и гемина при разрушении эритроцитов. Под действием бактериальной уреазы мочевина переходит в аммиак → повреждается слизистая оболочка → формируется язва. H. pylori этиологический фактор язвенной болезни желудка и 12- перстной кишки в 60-90%. Диагностика. 79 - окраска биоптатов СО желудка гемотоксилином – эозином - фазово – контрасная микроскопия - косвенное обнаружение (по уреазной активности) – кло- тест, дыхательный тест - по уреазной активности в биоптате; - бактериологический метод - ИФА по определению АТ. Контрольные вопросы к итоговому занятию по теме Кишечные инфекции. 1. Биохимические и культуральные свойства E.coli . 2. Медицинское значение E.coli. 3. Антигенное строение E.coli. 4. Классификация диареегенных E.coli. 5. Факторы адгезии, колонизации и инвазии диареегенных E.coli. 6. Экзотоксины диареегенных E.coli. 7. Бактериологический метод диагностики диареегенных E.coli. 80 8. Антигенное строение возбудителей брюшного тифа. 9. Факторы патогенности возбудителей брюшного тифа, паратифов. 10. Эпидемиология, патогенез и клиника брюшного тифа. 11. Исследование материала на 1,2,3 неделе заболевания брюшным тифом. 12. Реакция Видаля при сальмонеллезах. 13. Реакция РПГА при сальмонеллезах. 14. Исследование крови на гемокультуру при брюшном тифе. 15. Диагностика бактерионосительства брюшного тифа. 16. Исследование урино- , били - , розеолокультуры при брюшном тифе. 17. Вакцина брюшнотифозная спиртовая и обогащенная Vi- антигеном. 18. Вакцина брюшнотифозная ВИ- полисахаридная. 19. Бактериофаг сальмонеллезный групп АВСДЕ. 20. Биохимические свойства возбудителей брюшного тифа и паратифов. 21. Антигенная структура сальмонелл по Уайту и Кауфману. 22. Сальмонеллезы. Факторы патогенности сальмонелл. 23. Эпидемиология, патогенез и клиника сальмонеллезов. 24. Бактериологический метод диагностики сальмонеллезов. 25. Реакция Vi – гемагглютинации при брюшнотифозном носительстве. 26. Отличие « инфекционного Видаля от прививочного. 27. Биохимические и культуральные свойства бактерий рода Shigella. 81 28. Классификация шигелл. 29. Факторы патогенности шигелл. 30. Эпидемиология, патогенез и клиника дизентерии. 31. Бактериологическая диагностика дизентерии. 64. Серологический метод диагностики дизентерии. 31. Бактериофаг дизентерийный жидкий ив таблетках. 32. Морфология, культуральные свойства холерного вибриона. 33. Антигенное строение, биовары и серовары V.cholerae. 35. Основные различия между биоварами V.cholerae asiaticae и V.cholerae eltor. 36. Факторы патогенности V.cholerae. 37. Прямые и косвенные методы обнаружения холерного токсина. 38. Эпидемиология, клиника, иммунитет при холере. 39. Бактериологический метод диагностики холеры. 40. Ускоренный метод диагностики холеры по Ермоловой 41. Специфическая профилактика холеры – вакцина холерная корпускулярная. 42. Вакцина холерная, вакцина холерная бивалентная. 43. Галофильные вибрионы. Представители рода. Заболевания ими вызываемые. 44. Виды рода кампилобактер. Морфология возбудителя. 45. Факторы вирулентности кампилобактерий. 46. Лабораторная диагностика кампилобактерий. 47. Хеликобактеры. Морфология возбудителя. Патогенез заболевания. 48. Общая характеристика кишечных иерсиниозов. 82 49. Эпидемиология кишечных иерсиниозов. 50. Клинические формы Yersinia pseudotuberculosis. 51. Клинические формы Yersinia enterocolitica. 52. Факторы патогенности Yersinia enterocolitica. 53. Патогенез иерсиниозов. 54. Микробиологическая диагностика кишечных иерсиниозов. 55. Бифидумбактерин, Бифидумбактерин-форте, Бифилиз, Бифиформ. Состав. Действие. 56. Колибактерин, Бификол, Состав, действие, применение. 57. Лактобактерин, Споробактерин. Состав, действие, применение. 58. Дисбактериоз. Понятие. Состав нормофлоры толстого кишечника. 59. Дисбактериоз. Понятие. Причины. Роль микрофлоры кишечника. 60. Бактериологический метод диагностики хеликобактериоза. 61. Биохимический метод диагностики хеликобактериоза. Глава 3. Факультативно- анаэробные грамположительные палочки. Особо опасные инфекции. Лекция № 12.1. Микробиология дифтерии. Род Corynebacterium. Дифтерия - острое инфекционное заболевание, которое проявляется глубокой интоксикацией организма дифтерийным экзотоксином и специфичным фибринозным воспалением вместе внедрения микроорганизма. Возбудителя выделил Клебс в г. Леффлер получил культуру в г. Ру и Иерсен выделили чистый экзотоксин в г. Беринг получил сыворотку в 1892г. Рамон получил анатоксин в г. Род – Corynebacterium. Coryne- булава а – пленка, туман. Делят на 3 группы 1. патогенны для человека 2. патогены растений 83 3. сапрофиты – нормофлора кожи, слизистых зева, носа, ротоглотки, глаз, уретры, половых органов, дыхательных путей. К ним относят -C. xerosis -C. ulcerans -C. minutissimum. Их называют дифтероиды. Могут вызывать гнойно- воспалительные заболевания, выделяются из ран. -C. pseudodiphthericum – ложнодифтерийная палочка (Гофмана). Морфология. Прямые или слегка изогнутые палочки. Размеры – 8* 0,3 - 0,8 мкм. В мазках расположены в виде римских пятерок, иероглифов, частоколом. Часто имеют булавовидное утолщение на концах – зерна волютина (метополифосфаты)- запас питательных веществ, образующийся при попадании микроорганизма в благоприятные условия. Спори капсулу не образуют. Неподвижны. Грамположительные. Для выявления волютиновых зерен окрашивают 1. по Нейссеру. Это сложный метод окраски. Используют уксуснокислую синьку Нейссера, обрабатывают Люголем, докрашивают везувином. Тело бактерии окрашивается в желтый цвет, зерна волютина – в темно- фиолетовый. 2. Метиленовым синим по Леффлеру - простой метод окраски. Концы клетки окрашиваются более интенсивно (темно- синий, черный цвет, тело клетки – синий цвет. Явление метахромазии - неравномерность окраски. Культуральные свойства. Аэробы, факультативные агаэробы. Температурный диапазон – 25- С, оптимум – С. рН- 7,6-7,8. Требовательны к питательным средам, нуждаются в факторах роста 1. Среда Ру – свернутая лошадиная сыворотка 2. Среда Леффлера – ¾ свернутой бычьей сыворотки и ¼ часть сахарного бульона. Через 8-10 часов бразуются выпуклые колонии кремового цвета, которые не сливаются – шагреневая кожа 3. Хинозольная среда Бучина. Колонии окрашиваются в синий цвет, среда под колониями – в фиолетовый. Рост через 24-48 часов 4. Среда Клауберга – состав лаковая кровь с теллуритом калия 5. КТА – кровяной теллуритовый агар. Порлочка дифтерии восстанавливает теллурит калия до металлического теллурита, который накапливается в колониях. Рост в виде крупных колоний диаметром 2-3 мм серовато- черного цвета. Теллурит калия подавляет рост сопутствующей микрофлоры. Дифтероиды и палочка Гофмана образуют более мелкие колонии. Антигенное строение. Гетерогенны, имеют мозаичное строение АГ. Выделяют О - и К – АГ. По К –АГ разделяют на 58 серологических вариантов. В России принята классификация по 11 сероварам: 7 основными дополнительным. Определяют в реакции агглютинации на стекле с помощью агглютинирующих сывороток - серовары 1-5 и 7 относят к токсигенному биовару gravis; |