Б-1
1 Микробиол диагностика инфекц забол, этиологич подход к лечению инфекц забол, профилактика инфекц заболев, решение проблемы аллергий, разработка методов отмены иммунной защиты и создание толерантности, исследование роли инфекц агентов в этиологии и патогенезе сомат заболеваний.
Микроскопические методы приготовление мазков и препаратов для микроскопирования. результаты исследований носит ориентировочный характер можно определить некоторые морфологические признаки возбудителей (наличие ядер, жгутиков, внутриклеточных включений и т.д.), а также установить факт наличия или отсутствия микроорганизмов в присланных образцах. Микробиологические— «золотой стандарт», позволяют установить наличия возбудителя в исследуемом материале. Идентификацию чистых культур (до вида микроорганизма) проводят с учётом морфологических, тинкториальных, культуральных, биохимических, токсигенных и антигенных свойств. Биологические методы определение наличия токсинов возбудителя в исследуемом материале и на обнаружение возбудителя. включают заражение лабораторных животных исследуемым материалом с последующим выделением чистой культуры патогена, либо установлением факта присутствия микробного токсина и его природы. Инфекционный материал вводят внутрь, в дыхательные пути, внутрибрюшинно, внутривенно, внутримышечно, внутрикожно и подкожно, в переднюю камеру глаза, через трепанационное отверстие черепа, субокципитально У животных прижизненно забирают кровь, экссудат из брюшины, после гибели — кровь, кусочки различных органон, СМЖ, экссудат из различных полостей. Серологические методы выявления специфических АТ и Аг возбудителя, когда выделить возбудитель не представляется возможности. необходимо выявить повышение титров АТ, исследуют парные образцы сыворотки, взятые в интервале 10-20 суток АТ появляются в крови на 1-2-ю неделю заболевания и циркулируют в организме долго, позволяет использовать их выявление для исследований. Определение классов lg чётко характеризует этапы инфекционного процесса, а также может служить косвенным прогностическим критерием. Особое значение имеют методы выявления микробных Аг. Аллергич методы Аг используют для диагностики инфекционных заболеваний, а также при проведении эпидемиологических исследований. Наибольшее распространение нашли кожно-аллергические пробы, включающие внутрикожное введение Аг (аллергена) с развитием реакции ГЗТ.
2аллергич р-ции немедленного типа, сенмибилизация, десенсибилизация: Аллергические реакции немедленного типа - это опосредованные IgE иммунные реакции, протекающие с повреждением собственных тканей. стадии АРНТ: -контакт с антигеном; - синтез IgE; - фиксация IgE на поверхности тучных клеток ; - повторный контакт с тем же антигеном; - связывание антигена с IgE на поверхности тучных клеток; - высвобождение медиаторов из тучных клеток; -действие этих медиаторов на органы и ткани. развитию аллергических реакций немедленного типа предшествует контакт с Аг, продукция IgE и их фиксация на поверхности базофилов и тучных клеток . Взаимодействие Аг с фиксированными IgE приводит к высвобождению медиаторов воспаления - гистамина , лейкотриенов , цитокинов и ферментов. Аллергические реакции этого типа лежат в основе анафилактических реакций , аллергического ринита , экзогенной бронхиальной астмы .Сенсибилизация -приобретение организмом специфической повышенной чувствительности к чужеродным веществам — аллергенам. Сенсибилизацию могут вызывать бактерии и вирусы (их антигены и токсины), хим в-ва, в том числе многие ЛС, промышленные яды . Повторное воздействие аллергенов на сенсибилизированный организм может вызвать аллергические реакции типа анафилаксии — сывороточную болезнь, феномен Артюса (резкий местный воспалительный отёк). Время между первым попаданием в организм аллергена и возникновением повышенной чувствительности к нему (это состояние называется аллергией) определяют как период сенсибилизации; он может колебаться от нескольких суток до нескольких месяцев и даже лет. Для предотвращения аллергических проявлений используется прием десенсибилизации пациентов. Основу приема сост контролируемое по дозе и времени введение специфического аллергена в организм больного.. Предполагается, что возрастающие дозы аллергена обеспечивают повышение уровня активности супрессорных T-клеток и продукции IgG и IgA , блокирующих аллерген и, тем самым, препятствующих его взаимодействию с IgE .
3. Менингококки: антропонозная острая бактериальная инфекционная болезнь с аспирационным механизмом передачи возбудителя. Характеризуется поражением слизистой оболочки носоглотки и генерализацией в виде специфической септицемии и гнойного лептоменингита.Возбудитель - менингококк Neisseria meningitidis, семейство Neisseriaceae ,род Neisseria; округлый, неподвижный, грамотрицательный, хорошо окрашивается анилиновыми красителями. Клеточная стенка содержит липополисахаридный эндотоксин. По антигенной структуре различают 12 серогрупп менингококко: основные (А, В, С) и дополнительные (X, Y, Z, 29E, W135, H, I, K, L). размножается на средах, содержащих белок или специальный набор аминокислот; мало устойчив к воздействию факторов окружающей среды: быстро погибает при высыхании, охлажденни ниже температуры 22° С, при 55° С - через 5 мин, под воздействием 0,01 % раствора хлорамина, 1 % фенола, 0,1 % раствора перекиси водорода - через 2-3 мин.Резервуар и источники возбудителя: человек, больной генерализованной формой, острым назофарингитом, и здоровые носители. В периоды спорадической заболеваемости 1-3 % населения являются носителями менингококка, в эпидемических очагах - до 20-30 %. Наиболее высокий уровень носительства наблюдается среди взрослых, наименьший - среди детей, минимальный - среди детей до 2 лет. Больной начинает выделять возбудителя уже в продромальном периоде, когда возникает назофарингит, который может продолжаться 3-4 нед. С переходом воспалительного процесса на мозговые оболочки больной перестает быть выделителем возбудителя. Длительность острого здорового носительства составляет в среднем 2-3 нед, при хронических воспалительных процессах носоглотки (2-3 % случаев) - 6 нед и более.Механизм передачи возбудителя аспирационный; путь передачи - воздушно-капельный. Передача происходит только при тесном и длительном общении с источником возбудителя, что объясняется неустойчивостью менингококка.Основные эпидемиологические признаки: Распространение инфекции носит убиквитарный характер, регистрируется в виде спорадической, групповой и эпидемической заболеваемости. Инкубационный период при генерализованных формах болезни от 1 до 10 дней, чаще 2-3 дня; при локализованных формах неизвестен.Основные клинические признаки: Различают следующие клинические формы: локализованные (носительство и острый назофарингит), генерализованные (менингококкемия, менингит, менингоэнцефалит) и редкие (эндокардит, полиартрит, пневмония, иридоциклит).Острый назофарингит чаще всего протекает в легкой форме с субфебрильной температурой в течение 2-3 дней и слабой интоксикацией. При среднетяжелой форме температура тела достигает 38-38,5° С, держится 2-3 дня, реже 5 дней; беспокоят головная боль, слабость, боли в горле, заложенность носа. При тяжелом течении температура тела поднимается до 39° С и выше; помимо головной боли, наблюдаются головокружение, рвота, часто - менингеальные симптомы.Характерные черты генерализированных форм: острое начало, лихорадка, озноб, резкая головная боль. Боли в мышцах и суставах, часты рвоты. Отмечаются гиперестезия, светобоязнь. Быстро нарастают менингеальные явления: ригидность затылочных мышц. Нередко наблюдаются психомоторное возбуждение, бессонница или сонливость, бред. Наиболее характерным признаком менингококкемии является геморрагическая сыпь звездчатой формы, главным образом на дистальных отделах конечностей, ягодицах, боковых поверхностях туловища. Эта форма болезни может протекать молниеносно, с инфекционно-токсическим шоком и летальным исходом.В связи с широким амбулаторным применением антибиотиков возросло количество атипических форм.Лабораторная диагностика заключается в микробиологическом исследовании СМЖ, крови (5-10 мл), носоглоточной слизи. В мазках, окрашенных обычными анилиновыми красителями (метиленовый синий, основной фуксин), менингококко располагаются парно. Культуру микроорганизма получают посевом на полужидкий агар и на среду с ристомицином, который подавляет рост грамположительных кокков. Культивирование менингококков и выделение их в чистой культуре удается лишь у 30-40 % больных. В связи с этим для обнаружения антигенов возбудителя в спинномозговой жидкости больных используют серологические методы экспресс -диагностики: коагглютинация, РПГА, ИФА, латексагглютинация (ЛА). Серогруппа штаммов возбудителей, выделенных из СМЖ, крови и носоглотки, определяется с помощью теста бактериальной агглютинации с группоспецифическими антисыворотками. Профилактика и лечение: профилактика – вакцинация – химическая вакцина, которая получена из капсульных полисахаридов типа А и С и обладают протективными св-вами. У детей до 2-3 лет антиген С не иммуногенен (не создает иммунологической памяти). Лечение – антибиотикотерапия..
Б-2
1.. Микрофлора организма человека и ее роль в нормальных физиологических процессах и патологии. Методы изучения роли нормальной микрофлоры. Гнотобиология.
Антагонист гнилостной микрофлоры – продуцирует молоч и уксус кислоту, антибиотики. Регуляция газов состава кишечника, обмена в-в. детоксикация экзоген субстратов. Формирование и поддержание иммунитета. При снижении сопротивляемости организма может вызывать аутоинфекции, хранитель генов лекар устойчивости к антибиотикам. Участвует в колонизационной резистентности (совокупность защит факторов организма и конкурентных, антагонистических и др свойств анаэробов кишечника, придающих стабильность микрофлоре и предотвращающих колонизацию слиз об посторонними микроорганизмами). Гнотобиология – отрасль эксперимент биологии и медицины, заним получением и выращиванием стерил животных, а также животных, чья микрофлора состоит из точно известных видов микроорганизмов, с целью изуч механизмов и форм взаимодействия микроба с макроорганизмом.
2. ПЦР - основанна на принципе многократного копирования (амплификации) определенного участка ДНК или РНК. ПЦР позволяет выявить малые фрагменты ДНК, характерные для определенного вида микробов, и точно идентифицировать этот вид. Постановка ПЦР включает следующие этапы: 1. Выделение ДНК (РНК) из исследуемого материала. Для этого клетки необходимо лизировать с помощью высокой температуры. Затем отделить ДНК от клеточных обломков и разрушить клеточные нуклеазы. 2. Копирование выделенных участков (копий) нуклеиновых к-от 1. В результате нагревания до 94 -95°С двойная цепь ДНК разделяется на две отдельные цепи. 2. К одноцепочечной ДНК присоединяется праймер. Праймер - это последовательность из 15 - 30 нуклеотидов, комплементарная маркерному фрагменту ДНК (т. е., тому фрагменту, который есть только у определяемого возбудителя заболевания). З.Синтез (элонгация) -достраивание второй цепи ДНК. ДНК-полимераза присоединяет нуклеотиды к праймерам, достраивая двухцепочечные фрагменты ДНК ( при 72°С). Вновь синтезированные фрагменты ДНК служат матрицей для синтеза новых цепей в следующем цикле амплификации - это и есть цепная реакция в ПЦР. 3. Определение (детекция) продуктов ПЦР чаще всего проводят при помощи электрофореза. В результате видна оранжевая полоска на уровне контрольной ДНК.
3. гломерулонефрит Стрептококки —вызывают рожистое воспаление, сепсис и гнойные инфекции, скарлатину, ангину. Имеются непатогенные разновидности, обитающие в полости рта и кишечника человека. Анаэробные штаммы стрептококков обладают незначительной степенью активности, и их обнаруживают обычно в полости рта и ЖКТ. В некоторых случаях они вызывают хронические воспалительные процессы и являются возбудителями раневых инфекций. Значительно большее значение в патогенезе стрептококковых инфекций человека имеют факультативные анаэробы, которые разделены по характеру гемолиза на агаре с кровью на следующие типы:• бета-гемолитические стрептококки;• альфа-гемолитические стрептококки;• гамма-гемолитические стрептококки, не вызывающие видимого гемолиза на твердых питательных средах с кровью.Наибольшей патогенностью обладают бета-гемолитические стрептококки, которые являются возбудителями большинства стрептококковых инфекций у человека. Патогенность альфа-гемолитических стрептококков менее выражена. Обнаруживаются они в слизи зева здоровых людей, но в некоторых случаях и при хрониосепсисе, подостром септическом эндокардите, инфекциях полости рта. Гамма-гемолитические стрептококки — сапрофиты верхних дыхательных путей и кишечного тракта человека. В некоторых случаях они вызывают подострый септический эндокардит, инфекции мочевых путей, раневые инфекции.Морфология: это неподвижные шаровидные или овальные кокки диаметром 0,8—1 мкм, образующие цепочки различной длины и положительно окрашивающиеся по Граму. Часть штаммов образуют капсулу. Длина цепочек связана с условиями выращивания. В жидкой питательной среде они длиннее, на плотных средах нередко расположены в виде коротких цепей и пучков. Кокки перед делением могут быть овоидными. Деление происходит перпендикулярно по отношению к цепи. Каждый кокк делится на 2., культуральные свойства: на агаре с кровью стрептококк образует мелкие (1—2 мм в диаметре) полупрозрачные палочки, сероватые или бесцветные, которые хорошо снимаются петлей. Величина зоны гемолиза варьирует у разных штаммов: группа А образует зону гемолиза, несколько превышающую диаметр колонии, группа В дает большую зону гемолиза. Стрептококки типа А образуют зеленоватую или зеленовато-коричневую зону гемолиза, мутноватую Или прозрачную, варьирующую по величине и интенсивности окраски. В некоторых случая колония приобретает зеленоватое окрашивание. В жидких питательных средах для стрептококков характерен поднимающийся по стенкам рост. При взбалтывании зернистая или хлопьевидная взвесь. Общепринятые среды для выращивания: мясо-пептонный агар с добавлением крови кролика или барана, полужидкий агар с сывороткой.Хороший рост и токсинообразование могут быть обеспечены на "комбинированном бульоне" или на средах, содержащих казеиновый гидролизат и дрожжевой экстракт. Гемолитические стрептококки метаболизируют глюкозу с образованием молочной и других кислот, что является фактором, лимитирующим рост микробов в питательной среде. Устойчивость к физическим и химическим факторам.Гемолитические стрептококки группы А в течение длительного времени могут сохраняться на предметах, в пыли в высушенном состоянии. Однако эти культуры, сохраняя жизнеспособность, утрачивают вирулентность.Стрептококк группы А высокочувствителен к пенициллину, который оказывает на него бактерицидное действие. Сульфаниламид действует на стрептококк А бактериостатически. при дифференииаиии штаммов учитываютследующие показания:• источник выделения;• характер гемолиза;• способность к образованию растворимого гемолиза;• резистентность к различным температурам;• особенность расти в молоке с метиленовым синим;• ферментацию Сахаров;• разжижение желатина.Серологические серотипы: методом агглютинации на стекле штаммы бета-гемолитического стрептококка, выделенного при скарлатине и других стрептококковых инфекциях и от здоровых носителей, были разделены на 50 серологических типов. В стрептококковом токсине содержатся2 фракции:• термолабильная или истинный скарлатинозный токсин;• термостатическая, которая обладает свойствами аллергена.Истинный эритрогенный токсин является протеином. Очищенный эритрогенный токсин применяют для кожных проб с целью определения уровня антитоксического иммунитета.Для бактериологического исследования материал, собранный тампоном со слизистой зева и носа, засевают на чашку Петри с кровяным агаром, ставят в термостат на 3—4 ч при 37 °С. При наличии стрептококков через сутки на агаре вырастают характерные палочки. Для микроскопического исследования изолированную колонию пересевают в жидкую питательную среду (МПБ с сывороткой) и через 24 ч выращивания в термостате подвергают исследованию. Мазки окрашиваютпо Граму или метиленовым синим по Леффлеру. Затем изучают биохимические свойства культур и определяют тип стрептококка с помощью реакции агглютинации на стекле и реакции преципитации с типовыми сыворотками. Из серологических реакций применяют реакцию связывания комплемента (РСК) с сывороткой иммунизированного кролика. Методы диагностики: Основной метод диагностики – бактериологический. Для выделения чистой культуры исследуемый материал засевают на кровяной агар для получения изолированных колоний. Затем производят учет результатов посева: характрер колонии, характер гемолиза. По характреу гемолиза на кровяном агаре стрептококки делятся на 3 группы: а – -гемолитические – образуют вокруг колонии полностью прозразную зону гемолиза, б – -гемолитические – неполный гемолиз, образующийся метHb дает зеленоватый оттенок (зеленящий стрептококк), в – – негемолитические стрептококки. Затем выросшие изолированные колонии пересевают на скошенный агар для получения чистой культуры. Заключительный этап – идентификация чистой культуры по культуральным признакам, сероидентификация и серотипирование (определение серогруппы). Серогруппу стрептококков определяют в реакции преципитации с экстрактом из исследуемой культуры и группоспецифическими сыворотками (4 наиболее распространенные серогруппы – А, В, С, Д). Иммунитет: антитоксический, антимикробный, типоспецифический, нестойкий, с тенденцией к подавлению фагоцитоза, с образованием L-форм, к хронизации процесса. Специфической профилактики нет. Лечение – антибиотикотерапия.
Б-3
1. Рост - ↑ бактер клетки без ↑ их числа за счет ↑ всех клет элементов и структур. Размножение – самовоспроизведение, привод к ↑ колич бактериал клеток в популяции. Бактерии разм бинарным делением, реже почкованием. Делению предшеств репликация (инициация, элонгация, терминация) бактериальн хромосомы. В жидк среде размножаются и потребляют пит вещества → истощение среды → прекращают рост (периодическое культивирование и культура); непрерывная подача свежей пит среды и отток культуральной жидкости (непрерывное). Придонный, диффузн или поверхностный рост культуры. Фазы: 1) лаг-фаза – период между посевом бактерий и началом их размн (≈ 4-5 ч, ↑ всех клет элементов), 2) фаза логарифмического (экспоненциального) роста – период интенсив деления бактерий (≈ 5-6 ч, наиб ранимы), 3) фаза стационар роста – колич жизнеспособных клеток без изменений (max – М-концентрация), 4) фаза гибели.
2По расположению в бактериальной клетке выделяют Аг: |
Скачать 0.63 Mb.