Фармакопея 12 - 1 часть. Научный центр экспертизы средств медицинского применения
 Скачать 3.93 Mb.
|
|
Таблица 30.3 Пример расчета: определение числа КЕД для раствора строфантина K 0,05% для инъекций
Среднее число КЕД = 3,33 31. СТЕРИЛЬНОСТЬ (ОФС 42-0066-07) Лекарственные средства для инъекций и инфузий, глазные капли, мази, пленки и другие препараты и субстанции, в отношении которых имеются соответствующие указания в документации, должны быть стерильными, то есть не содержать микроорганизмов. Методы контроля стерильности применяют для испытания всех лекарственных средств независимо от их природы и лекарственной формы. 1. Условия проведения испытания Испытание на стерильность проводят в асептических условиях, чтобы избежать микробной контаминации во время посева, используя, например, ламинар-бокс класса А, расположенный в зоне класса В, или изолятор. Можно применять и другие меры, предотвращающие контаминацию, при условии, что они не оказывают пагубное влияние на микроорганизмы, которые могут содержаться в исследуемых образцах. Условия проведения испытания регулярно контролируют в соответствии с правилами GMP. 2. Определение антимикробного действия До проведения испытания на стерильность следует определить, обладает ли исследуемый образец антимикробным действием, которое может существенно повлиять на результаты испытания. Для этого готовят взвеси культур тест-микроорганизмов (табл. 31.4) с конечной концентрацией не более 100 колониеобразующих единиц (КОЕ) в 1 мл. Испытание проводят дважды с каждым микроорганизмом в отдельности. В пробирки с 10 мл питательной среды, рекомендованной для испытания, вносят по 1 мл приготовленной взвеси тест-микроорганизма. В две пробирки с инокулированной средой вносят по 1 мл исследуемого образца, в две другие вносят по 1 мл соответствующего растворителя - положительный контроль. Посевы на тиогликолевой среде инкубируют при температуре (32,5 +/- 2,5) град. C в течение 3-х сут. Посевы на жидкой соево-казеиновой среде и среде Сабуро инкубируют при температуре (22,5 +/- 2,5) град. C в течение 5 сут. Сравнивают рост тест-микроорганизмов в контрольных и опытных посевах при визуальном просмотре. Если результаты неодинаковые, то есть, в контроле наблюдают рост тест-микроорганизма, а в опыте рост отсутствует, считают, что исследуемый образец обладает бактериостатическим или фунгистатическим действием. 2.1. Устранение антимикробного действия При наличии антимикробного действия исследуемого образца используют специфические инактиваторы, указанные в нормативных документах. Например, парааминобензойная кислота для сульфаниламидов, бета-лактамаза для пенициллинов и цефалоспоринов. Неспецифические инактиваторы (твин-20, твин-80, яичный лецитин, гистидина гидрохлорид, натрия тиосульфат и другие) добавляют в буферный раствор и (или) в питательные среды, как правило, до стерилизации. Для разведения исследуемого образца перед испытанием на стерильность можно использовать нейтрализующую жидкость, приготовленную в лаборатории или промышленного производства, следующего состава: Полисорбата-80 (твина-80) - 30,0 г Лецитина яичного (или соевого) - 3,0 г L-гистидина гидрохлорида - 1,0 г Пептона (мясного или казеинового) - 1,0 г Натрия хлорида - 4,3 г Калия фосфата однозамещенного - 3,6 г Натрия фосфата двузамещенного - 7,2 г Воды - 1000 мл Стерилизуют в автоклаве, валидируя процесс стерилизации. pH после стерилизации 7,0 +/- 0,2. Если разведение в вышеприведенном растворе не устраняет антимикробное действие исследуемого образца, то увеличивают концентрацию твина-80 или лецитина. Альтернативно допускается добавление в буферный раствор специфических инактиваторов, устраняющих антимикробное действие лекарственных средств или консервантов (табл. 31.1). Таблица 31.1 Инактиваторы антимикробного действия консервантов
При отсутствии инактиватора исследуемый образец разводят, изменяя соотношение объемов посевного материала и питательной среды, или используют метод мембранной фильтрации. 3. Испытание на стерильность 3.1. Отбор образцов для анализа Для испытания отбирают образцы лекарственного средства в количестве, указанном в табл. 31.2, если нет других указаний в частной фармакопейной статье. Таблица 31.2 Количество единиц (ампул, флаконов и др.) от серии исследуемого образца для проведения анализа ┌───────────────────────────────────┬─────────────────────────────────────┐ │ Количество единиц в серии │ Количество единиц │ │ │ для проведения анализа (не менее) │ ├───────────────────────────────────┼─────────────────────────────────────┤ │ 1 │ 2 │ ├───────────────────────────────────┼─────────────────────────────────────┤ │Парентеральные лекарственные │ │ │средства: │ │ │- Не более 100 │10% или 4 (берут наибольшее) │ │- От 100 до 500 │10 │ │- Более 500 │2% или 20 (берут наименьшее) │ │- Парентеральные лекарственные │2% или 10 (берут наименьшее) │ │средства большого объема │ │ │- Антибиотики, твердые формы - │6 │ │ангро (более 5 г) │ │ ├───────────────────────────────────┼─────────────────────────────────────┤ │Неинъекционные лекарственные │ │ │средства (в том числе глазные): │ │ │- Не более 200 │5% или 2 (берут наибольшее) │ │- Более 200 │10 │ │- Препараты в однодозовой упаковке │См. графу "Парентеральные │ │ │лекарственные средства" │ ├───────────────────────────────────┼─────────────────────────────────────┤ │Твердые формы, ангро: │ │ │- Не более 4 упаковок │Каждую │ │- Свыше 4, но не более 50 │20% или 4 (берут наибольшее) │ │- Свыше 50 │2% или 10 (берут наибольшее) │ └───────────────────────────────────┴─────────────────────────────────────┘ При вскрытии образцов не допускают их контаминации микроорганизмами, которые могут находиться на его внешней поверхности. Ампулы и пробки флаконов протирают спиртом этиловым ректификованным 96% и фламбируют. 3.2. Для посева на каждую питательную среду используют количество исследуемого образца, приведенное в табл. 31.3, если нет других указаний в частной фармакопейной статье. Таблица 31.3 Минимальное количество образца для посева на питательные среды ┌─────────────────────────────────────┬───────────────────────────────────┐ │Количество лекарственного средства в │ Количество образца для посева │ │ упаковке │ │ ├─────────────────────────────────────┼───────────────────────────────────┤ │Жидкие │ │ │- Менее 1 мл │Весь объем │ │- 1-40 мл │1/2 г содержимого, но не менее 1 мл│ │- 40-100 мл │20 мл │ │- более 100 мл │10% содержимого, но не более 20 мл │ │- Антибиотики │1 мл │ │- Другие препараты, растворимые в │Содержимое упаковки, │ │воде или изопропилмиристате │но не менее 0,2 г │ ├─────────────────────────────────────┼───────────────────────────────────┤ │Нерастворимые препараты, мази и │Содержимое упаковки, │ │кремы, поддающиеся эмульгированию или│но не менее 0,2 г │ │суспендированию │ │ ├─────────────────────────────────────┼───────────────────────────────────┤ │Твердые │ │ │- Менее 0,05 г │Все содержимое │ │- 0,05-0,3 г │1/2 г содержимого, но не более │ │ │0,05 г │ │- 0,3-5 г │0,150 г │ │- более 5 г │0,500 г │ └─────────────────────────────────────┴───────────────────────────────────┘ 3.3. Метод мембранной фильтрации При определении стерильности лекарственных средств, обладающих выраженным антимикробным действием, и лекарственных средств в сосудах вместимостью более 100 мл, используют метод мембранной фильтрации. Исключение составляют лекарственные средства с антимикробным действием, нерастворимые в воде или изопропилмиристате. Испытание проводят с использованием фильтрационной установки, которая должна быть смонтирована таким образом, чтобы исследуемый раствор (жидкость) можно было ввести и профильтровать в условиях асептики. После окончания фильтрации мембрану асептически переносят в 100 мл питательной среды. Испытания проводят под вакуумом 93,3 кПа (70 см рт. ст.) при скорости вытекания воды 55-75 мл в 1 мин. Допускается использование аппарата, представляющего собой стерильную замкнутую систему и работающего также по принципу фильтрации растворов, с мембраной, вмонтированной в канистру, в которую после фильтрования добавляют стерильную среду. Используют мембранные фильтры с размером пор 0,45 +/- 0,02 мкм и внешним диаметром 47 мм. Фильтры из нитрата целлюлозы используются для водных, масляных и слабых спиртовых растворов, фильтры из ацетата целлюлозы - для концентрированных спиртовых растворов и др. Гидрофобный край фильтра и низкая сорбционная способность сводят к минимуму потери препарата при фильтрации. Для лекарственных средств, не обладающих бактериостатическим или фунгистатическим действием, можно использовать фильтры без гидрофобного края, увлажняя их перед фильтрацией, если нет других указаний в частной фармакопейной статье. Установки и фильтры стерилизуют и хранят в условиях, гарантирующих сохранение стерильности. При исследовании лекарственных средств в виде раствора в масле, фильтр и установка перед анализом должны быть тщательно высушены. 3.3.1. Пробоподготовка водных растворов Лекарственное средство в упаковке перемешивают, отбирают необходимое для испытания количество исследуемого образца (табл. 31.3) и асептически переносят на один или несколько фильтров. Мембранную фильтрацию проводят с помощью вакуума или давления. Фильтры асептически снимают с фильтродержателя и помещают в обе среды. При использовании замкнутой системы канистры заполняют равным объемом сред. При этом следует избегать аэрации тиогликолевой среды. Если исследуемый образец обладает антимикробным действием или в его состав входит консервант, то для промывания фильтров используют раствор натрия хлорида изотонический 0,9% или жидкость N 1 (раздел 3.4.). Испытание проводят, исключая контаминацию микроорганизмами последней порции жидкости для промывания. 3.3.2. Пробоподготовка жидкостей, не смешивающихся с водой Испытание проводят, как указано в разделе 3.3.1. Перед помещением на фильтр вязких жидкостей или суспензий для увеличения скорости фильтрации к общей пробе асептически добавляют достаточное количество подходящего растворителя. Если в состав исследуемого образца входят лецитин, масло или консервант и при наличии антимикробного действия, то для промывания фильтров используют жидкость N 2 (раздел 3.4.). Испытание проводят, исключая контаминацию микроорганизмами последней порции жидкости для промывания. 3.3.3. Пробоподготовка лекарственных средств, растворимых в изопропилмиристате (ИПМ) Мази на жировой основе и эмульсии типа "вода в масле" растворяют в ИПМ, предварительно простерилизованном методом мембранной фильтрации с использованием мембран с диаметром пор 0,22 мкм. Стерильный растворитель и, если необходимо, исследуемый образец непосредственно перед фильтрацией нагревают до температуры не более 44 град. C. Первоначально через мембрану пропускают стерильный ИПМ в количестве 5 мл. Затем фильтруют раствор препарата в ИПМ. Для максимальной эффективности процесса над фильтром постоянно должен быть слой раствора во время фильтрации. После фильтрации мембрану промывают вначале двумя порциями жидкости N 2, по 200 мл каждая, а затем 100 мл жидкости N 1. При испытании в питательные среды добавляют твин-80 из расчета 1 г/л. Если в состав лекарственного средства входит вазелин, для промывания фильтров используют жидкость N 3. Перед началом фильтрации через фильтр пропускают 200 мл жидкости N 3. Для максимальной эффективности процесса над фильтром постоянно должен быть слой раствора во время фильтрации. После фильтрации образца фильтр промывают тремя порциями жидкости N 3 (раздел 3.4.) по 100 мл каждая. 3.3.4. Пробоподготовка препаратов в шприц-тюбиках Содержимое каждого шприц-тюбика переносят в две воронки установки для мембранной фильтрации или собирают общую пробу в стерильную пробирку для последующего переноса на фильтр. 3.3.5. Пробоподготовка твердых лекарственных форм для инъекций (кроме антибиотиков) Готовят разведение в соответствии с инструкцией по применению. Испытание проводят в соответствии с разделами 3.3.1. и 3.3.2. 3.3.6. Пробоподготовка стерильных аэрозольных препаратов Содержимое препаратов в аэрозольной упаковке асептически извлекают и помещают в стерильную колбу нажатием на шток распылительного клапана. Если возможно, пропелент удаляют путем испарения. Добавляют в колбу жидкость N 2 и осторожно перемешивают. Испытание проводят, как указано в разделах 3.3.1. и 3.3.2. 3.4. Жидкости для промывания мембранных фильтров при контроле лекарственных средств, обладающих антимикробным действием Для промывания фильтров можно использовать любой растворитель, не подавляющий рост микроорганизмов: - Раствор натрия хлорида изотонического 0,9% стерильного pH 7,0. - Жидкость N 1:1 г ферментативного пептона растворяют в 1000 мл воды, фильтруют или центрифугируют для осветления, разливают в сосуды и стерилизуют. pH после стерилизации - 7,1 +/- 0,2. При фильтровании образцов пенициллинов или цефалоспоринов (если необходимо) к жидкости N 1 добавляют определенное количество бета-лактамазы, указанное в частной фармакопейной статье, достаточное для инактивации остаточного антимикробного действия антибиотика на фильтре. - Жидкость N 2:1 мл твина-80 добавляют к 1000 мл жидкости N 1, разливают в сосуды и стерилизуют. pH после стерилизации - 7,1 +/- 0,2. - Жидкость N 3:5 г ферментативного пептона, 3 г мясного экстракта и 10 г твина-80 растворяют в 1000 мл воды, разливают в сосуды и стерилизуют. pH после стерилизации - 6,9 +/- 0,2. 3.5. Валидация метода мембранной фильтрации при контроле лекарственных средств, обладающих антимикробным действием Фильтруют определенный объем исследуемого образца, используя для одного фильтра количество единиц (ампул, флаконов и т.д.), указанное в табл. 31.2. Фильтр промывают как минимум тремя порциями соответствующей жидкости по 100 мл каждая. В последнюю порцию жидкости для промывания вносят 1 мл приготовленной микробной взвеси тест-микроорганизмов: B.subtilis АТСС 6633 - для тиогликолевой среды; C.albicans NCTC 885-653 - для соево-казеинового бульона или жидкой среды Сабуро. Концентрация тест-штаммов - не более 100 КОЕ/мл. Фильтр помещают в колбу со 100 мл соответствующей питательной среды или добавляют среду в канистру замкнутой системы. Посевы инкубируют при соответствующей температуре в течение не более 3-х сут. для бактерий и 5 сут. для грибов. Определяют наличие роста тест-микроорганизма при визуальном просмотре. При наличии роста считают, что антимикробное действие полностью инактивировано, и проводят испытание на стерильность, используя то же количество препарата, количество единиц (ампул, флаконов и т.п.), объем жидкости для промывания и те же питательные среды. | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||