Фармакопея 12 - 1 часть. Научный центр экспертизы средств медицинского применения
 Скачать 3.93 Mb.
|
|
При отсутствии роста тест-микроорганизма считают, что антимикробное действие не инактивировано, и испытание повторяют, увеличивая объем жидкости для промывания фильтра. Однако общий объем жидкости, пропущенный через мембрану, не должен превышать 1000 мл. 3.6. Метод прямого посева 3.6.1. Пробоподготовка нефильтрующихся жидкостей Асептически отбирают объем исследуемого образца (табл. 31.3), достаточный для посева на питательные среды. Слегка перемешивают среду сразу после посева, чтобы не вызвать сильную аэрацию. Далее проводят испытание, как указано в разделе 3.7. 3.6.2. Пробоподготовка лекарственных средств, нерастворимых в изопропилмиристате (ИПМ) Растворы в маслах. В питательную среду предварительно добавляют 10 г/л твина-80 или другого эмульгатора в концентрации, не оказывающей антимикробного действия в условиях испытания. Мази и кремы. Отбирают 20 образцов и разделяют их на 2 группы по 10 в каждой. Исследуемые образцы эмульгируют в разведении 1:10 с помощью подходящего эмульгатора в соответствующем стерильном растворителе, например, жидкости N 1. Полученную эмульсию вносят в питательную среду, не содержащую эмульгатора. Если исследуемый образец обладает антимикробным действием в условиях испытания, его устраняют путем добавления подходящих инактиваторов (например, твина-80, количество которого указывают в частной фармакопейной статье) или увеличивают количество питательной среды. Посевы образцов растворов в маслах ежедневно аккуратно перемешивают. Однако в том случае, когда тиогликолевая или аналогичная ей среда применяется для выявления анаэробных микроорганизмов, встряхивание или перемешивание должно быть сведено к минимуму для того, чтобы не нарушать анаэробных условий. Если в состав лекарственного средства входят трудноэмульгируемые жиросодержащие продукты, допускается использование определенного эмульгатора соответствующей концентрации в стерильном растворителе с одновременным нагреванием образца до 40 град. C (в исключительных случаях - до 45 град. C) в течение не более 30 мин. 3.6.3. Пробоподготовка твердых лекарственных форм Лекарственное средство в виде порошка или суспензии (если в сосуд добавляют стерильный растворитель) переносят в количестве, указанном в табл. 31.3, в жидкую тиогликолевую среду, жидкую соево-казеиновую среду или жидкую среду Сабуро и осторожно перемешивают. Далее проводят испытание, как указано в разделе 3.7. 3.7. Условия инкубации посевов Посевы инкубируют не менее 14 сут. при температуре (32,5 +/- 2,5) град. C на жидкой тиогликолевой среде и при температуре (22,5 +/- 2,5) град. C на жидкой соево-казеиновой среде или жидкой среде Сабуро (независимо от метода посева), периодически просматривая питательные среды. Наличие роста микроорганизмов определяют визуально. Если исследуемый образец вызывает помутнение питательной среды и визуально нельзя определить наличие или отсутствие роста микроорганизмов, через 14 сут. после начала испытания переносят не менее 1 мл помутневшей среды в пробирки с той же стерильной средой. Инкубируют исходные и повторные посевы. Общее время инкубации должно составлять не менее чем 14 + 4 сут. от начала испытания. 3.8. Интерпретация результатов испытания При отсутствии роста микроорганизмов считают, что исследуемый образец соответствует требованиям испытания. При наличии роста микроорганизмов, наблюдаемом визуально и подтверждаемом микроскопическим исследованием, считают, что исследуемый образец не соответствует требованиям испытания на стерильность, если не доказана недостоверность испытания, вызванная причинами, не связанными с исследуемым образцом. Результаты испытания могут быть признаны недостоверными в случае, если выполняется одно или несколько условий: 1) получены неудовлетворительные результаты микробиологического контроля окружающей среды в ходе проведения испытания; 2) выявлены ошибки, допущенные в ходе испытания; 3) обнаружен рост микроорганизмов в отрицательном контроле; 4) после идентификации микроорганизмов, выделенных из исследуемого образца, однозначно признано, что причиной возникновения роста этого вида или видов являются материалы и/или технические приемы, использованные при испытании; 5) если питательная среда нестерильна и/или ее ростовые свойства неудовлетворительны. Если результаты испытания признаны недостоверными, его повторяют на том же количестве образцов, что и первоначально. Если в результате повторного испытания не обнаруживают роста микроорганизмов, считают, что препарат выдерживает испытание на стерильность. Если в результате повторного испытания обнаруживают рост микроорганизмов, считают, что препарат не выдерживает испытание на стерильность. 4. Питательные среды 4.1. Состав и приготовление питательных сред Для испытания используют жидкую тиогликолевую среду, жидкую соево-казеиновую среду или жидкую среду Сабуро. Жидкую тиогликолевую среду применяют для выявления аэробных и анаэробных бактерий. Жидкую соево-казеиновую среду или жидкую среду Сабуро применяют для выявления грибов. Используют питательные среды, приготовленные в лаборатории, или сухие питательные среды промышленного производства. В этом случае следует строго придерживаться методики приготовления, рекомендованной производителем. Если нет других указаний в частной фармакопейной статье, среды стерилизуют в автоклаве в течение 15 мин. при температуре 121 град. C, при условии валидации процесса стерилизации. Все среды проверяют на стерильность и определяют их ростовые свойства. Жидкая тиогликолевая среда: L-цистина - 0,5 г Натрия хлорида - 2,5 г Глюкозы моногидрата - 5,5 г Агара гранулированного (влажность не более 15%) - 0,75 г Дрожжевого экстракта (водорастворимого) - 5,0 г Панкреатического гидролизата казеина - 15,0 г Натрия тиогликолята - 0,5 г или кислоты тиогликолевой - 0,3 г Раствора резазурина натрия (1:1000) - 1,0 мл свежеприготовленного Воды - 1000,0 мл pH после стерилизации - 7,1 +/- 0,2 Добавляют в воду L-цистин, агар, натрия хлорид, глюкозу, водорастворимый дрожжевой экстракт и панкреатический гидролизат казеина и нагревают до полного растворения. Добавляют натрия тиогликолят или тиогликолевую кислоту и, если необходимо, доводят pH среды 1 М раствором натра едкого. Добавляют раствор резазурина, перемешивают и разливают в пробирки соответствующего объема. Стерилизуют в автоклаве, валидируя процесс стерилизации. Жидкая соево-казеиновая среда: Панкреатического гидролизата казеина - 17,0 г Папаинового гидролизата соевой муки - 3,0 г Натрия хлорида - 5,0 г Калия фосфата двузамещенного - 2,5 г Глюкозы - 2,5 г Воды - 1000,0 мл pH после стерилизации - 7,3 +/- 0,2 Компоненты растворяют в воде, если необходимо при нагревании. Охлаждают при комнатной температуре. Если требуется, добавляют 1 М раствор натра едкого, чтобы после стерилизации pH среды был 7,3 +/- 0,2. Фильтруют для получения прозрачной среды, разливают по пробиркам и стерилизуют в автоклаве. Жидкая среда Сабуро: Пептона ферментативного - 10,0 г Глюкозы моногидрата - 40,0 г Воды - 1000,0 мл pH после стерилизации - 5,6 +/- 0,2 Пептон и глюкозу добавляют в воду и полностью растворяют при слабом нагревании. Охлаждают до комнатной температуры и доводят pH до требуемого значения. Фильтруют, если необходимо, и разливают в пробирки. Стерилизуют в автоклаве, валидируя процесс стерилизации. Для определения стерильности некоторых антибиотиков (пенициллинов, цефалоспоринов) методом прямого посева асептически вносят в питательные среды определенное количество бета-лактамазы, указанное в частной фармакопейной статье, для инактивации антибиотика. 4.2. Стерильность питательных сред После стерилизации не менее 5% пробирок от каждой партии питательной среды помещают в термостат и инкубируют в течение как минимум 14 сут. параллельно с посевом на стерильность. 4.3. Определение ростовых свойств питательных сред Ростовые свойства питательных сред определяют для каждой серии питательной среды, выпущенной промышленностью и имеющей номер серии, и для каждой партии среды, приготовленной в лаборатории. В 2 пробирки со средой вносят культуру тест-штамма, каждого отдельно, в количестве 10-100 КОЕ (табл. 31.4). Инкубируют в соответствии с условиями, описанными в табл. 31.4. Если в течение времени инкубации в инокулированных средах визуально отмечают рост микроорганизмов, среду считают пригодной для использования. Таблица 31.4 Тест-микроорганизмы для определения ростовых свойств питательных сред и определения антимикробного действия ┌──────────────┬──────────────────────────────┬───────────────────────────┐ │ Питательные │ Тест-микроорганизмы │ Условия инкубации │ │ среды ├───────────────┬──────────────┼─────────────┬─────────────┤ │ │ Вид │ Штамм │ Температура │ Время │ │ │ │ │ │ инкубации │ ├──────────────┼───────────────┴──────────────┼─────────────┼─────────────┤ │ │Аэробные бактерии: │32,5 +/- 2,5 │ 3 сут. │ │ │Bacillus subtilis ATCC 6633 │ град. C │ │ │ │Staphylococcus ATCC 6538-Р │ │ │ │ │aureus │ │ │ │Жидкая │Pseudomonas ATCC 9027 │ │ │ │тиогликолевая │aeruginosa │ │ │ │среда ├──────────────────────────────┼─────────────┼─────────────┤ │ │Анаэробные бактерии: │32,5 +/- 2,5 │ 3 сут. │ │ │Clostridium ГИСК 272 │ град. C │ │ │ │sporogenes │ │ │ ├──────────────┼──────────────────────────────┼─────────────┼─────────────┤ │Жидкая соево- │Грибы: │22,5 +/- 2,5 │ 5 сут. │ │казеиновая │Candida albicans NCTC 885-653 │ град. C │ │ │среда │ │ │ │ │ │ │ │ │ │Жидкая среда │Aspergillus niger ATCC 9642 │ │ │ │Сабуро │ │ │ │ └──────────────┴──────────────────────────────┴─────────────┴─────────────┘ АТСС - Американская коллекция типовых культур, США. ГИСК - Государственная коллекция патогенных микроорганизмов ГИСК им. Л.А.Тарасевича, Россия. NCTC - Национальная коллекция типовых культур. 4.4. Хранение питательных сред Питательные среды, приготовленные в лаборатории, хранят при температуре от 2 до 25 град. C в защищенном от света месте в течение не более 1 мес. Если при хранении тиогликолевой среды, содержащей резазурин, верхний слой среды (более 1/3 объема) окрасится в розовый цвет, то среду можно регенерировать нагреванием на кипящей водяной бане в течение 10-15 мин. до исчезновения розовой окраски, с последующим быстрым охлаждением. Если окраска не исчезает после нагревания, то среду считают не пригодной к употреблению. Регенерацию среды можно проводить только один раз. Питательные среды промышленного производства, готовые к употреблению, хранят в плотно укупоренных сосудах при условии сохранения их стерильности и ростовых свойств в течение срока годности. Сухие питательные среды промышленного производства хранят в соответствии с инструкцией по использованию и уничтожают по истечении срока годности, указанного производителем. 32. МИКРОБИОЛОГИЧЕСКАЯ ЧИСТОТА (ОФС 42-0067-07) Нестерильные лекарственные средства (субстанции, различные формы препаратов - таблетки, капсулы, гранулы, растворы, суспензии, сиропы, мази, суппозитории и др., а также вспомогательные вещества) могут быть контаминированы микроорганизмами. В них допускается наличие лимитированного количества микроорганизмов, при отсутствии определенных видов бактерий, представляющих опасность для здоровья человека. Приведенные ниже методы определения микробиологической чистоты распространяются на нестерильные лекарственные средства (субстанции и препараты), вспомогательные вещества и полупродукты, а также используются при определении эффективности антимикробных консервантов и мониторинге производственных помещений фармацевтических предприятий и лабораторий контрольных служб. В табл. 32.1 и 32.2 приведены требования к лекарственным средствам (лекарственным препаратам и субстанциям), а также вспомогательным веществам, используемым в производстве лекарственных препаратов. Таблица 32.1 Микробиологическая чистота лекарственных препаратов ┌─────────┬──────────────────────────────┬────────────────────────────────┐ │Категория│ Препараты │ Рекомендуемые требования │ ├─────────┼──────────────────────────────┼────────────────────────────────┤ │ 1 │ 2 │ 3 │ ├─────────┼──────────────────────────────┼────────────────────────────────┤ │1 │Препараты, к которым │Препараты должны быть │ │ │предъявляется требование │стерильными │ │ │"стерильность" │ │ ├─────────┼──────────────────────────────┼────────────────────────────────┤ │2 │- Для применения местно, │- Общее число аэробных бактерий │ │ │наружно, интравагинально │и грибов (суммарно) не более │ │ │- Для введения в полости уха, │ 2 │ │ │носа │10 в 1 г или в 1 мл, или на │ │ │- Респираторно │1 пластырь (включая клейкую │ │ │- Трансдермальные пластыри │сторону и основу) │ │ │ │- Отсутствие энтеробактерий и │ │ │За исключением тех │других грамотрицательных │ │ │лекарственных препаратов, │бактерий на 1 пластырь (включая │ │ │которые должны быть │клейкую сторону и основу) │ │ │стерильными │ 1 │ │ │ │- Не более 10 энтеробактерий и │ │ │ │других грамотрицательных │ │ │ │бактерий в 1 г или в 1 мл │ │ │ │остальных препаратов │ │ │ │- Отсутствие Pseudomonas │ │ │ │aeruginosa в 1 г или в 1 мл, или│ │ │ │на 1 пластырь (включая клейкую │ │ │ │сторону и основу) │ │ │ │- Отсутствие Staphylococcus │ │ │ │aureus в 1 г или в 1 мл, или на │ │ │ │1 пластырь (включая клейкую │ │ │ │сторону и основу) │ ├─────────┼──────────────────────────────┼────────────────────────────────┤ │3 │А. Для приема внутрь или │- Общее число аэробных бактерий │ │ │введения ректально │ 3 │ │ │ │не более 10 в 1 г или в 1 мл │ │ │ │- Общее число грибов не более │ │ │ │ 2 │ │ │ │10 в 1 г или в 1 мл │ │ │ │- Отсутствие Escherichia coli в │ │ │ │1 г или в 1 мл │ │ │ │ │ │ │Б. Для приема внутрь - из │- Общее число аэробных бактерий │ │ │сырья природного происхождения│ 4 │ │ │(животного, растительного или │не более 10 в 1 г или в 1 мл │ │ │минерального), уровень │- Общее число грибов не более │ │ │микробной загрязненности │ 2 │ │ │которого невозможно снизить в │10 в 1 г или в 1 мл │ │ │процессе предварительной │- Энтеробактерий и других │ │ │обработки и относительно │грамотрицательных бактерий не │ │ │которого федеральный орган │ 2 │ │ │контроля качества │более 10 в 1 г или в 1 мл │ │ │лекарственных средств │- Отсутствие Escherichia coli в │ │ │допускает уровень микробной │1 г или в 1 мл │ │ │ 3 │- Отсутствие Salmonella в 10 г │ │ │загрязненности более 10 │или в 10 мл │ │ │жизнеспособных микроорганизмов│- Отсутствие Staphylococcus │ │ │в 1 г или в 1 мл │aureus в 1 г или в 1 мл │ │ │ │ │ │ │Исключением являются │ │ │ │лекарственные растительные │ │ │ │средства, включенные в │ │ │ │Категорию 4 │ │ │ │ │ │ ├─────────┼──────────────────────────────┼────────────────────────────────┤ │4 │Лекарственные растительные │- Общее число аэробных бактерий │ │ │средства, состоящие из одного │ 7 │ │ │вида сырья (фасованная │не более 10 в 1 г │ │ │продукция) или нескольких │- Общее число грибов не более │ │ │(сборы), а также растительное │ 5 │ │ │сырье "ангро" │10 в 1 г │ │ │ │ 2 │ │ │ │- Escherichia coli не более 10 │ │ │ │в 1 г │ │ │ │ │ │ │А. Лекарственные растительные │- Общее число аэробных бактерий │ │ │средства или лекарственное │ 5 │ │ │сырье "ангро", применяемые в │не более 10 в 1 г │ │ │виде настоев и отваров, │- Общее число грибов не более │ │ │приготовленные с │ 4 │ │ │использованием кипящей воды │10 в 1 г │ │ │ │ │ │ │Б. Лекарственные растительные │- Энтеробактерий и других │ │ │средства или растительное │грамотрицательных бактерий │ │ │сырье "ангро", приготовленные │ 3 │ │ │без использования кипящей воды│не более 10 в 1 г │ │ │ │- Отсутствие Escherichia coli в │ │ │ │1 г │ │ │ │- Отсутствие Salmonella в 10 г │ └─────────┴──────────────────────────────┴────────────────────────────────┘ Таблица 32.2 Микробиологическая чистота субстанций и вспомогательных веществ для производства лекарственных препаратов ┌─────────┬──────────────────────────────┬────────────────────────────────┐ │Категория│ Субстанции, вспомогательные │ Рекомендуемые нормы │ │ │ вещества │ │ ├─────────┼──────────────────────────────┼────────────────────────────────┤ │ 1 │ 2 │ 3 │ ├─────────┼──────────────────────────────┼────────────────────────────────┤ │1.2 │Субстанции для производства: │Субстанции должны быть │ │ │А. Стерильных лекарственных │стерильными │ │ │препаратов, которые не │ │ │ │подвергаются стерилизации │ │ │ │ │ │ │ │Б. Стерильных лекарственных │- Общее число аэробных бактерий │ │ │препаратов, которые │и грибов (суммарно) не более │ |