Общая микробиология
 Скачать 0.8 Mb.
|
|
Реакция иммунофлюоресценции (РИФ) может быть использована как для обнаружения возбудителя в фекалиях, так и для идентификации чистой культуры. Для эпидемиологических целей проводят колициногенотипирование, колицинотипирование, фаготипирование, определение плазмидного профиля. Колициногенотипирование направлено на определение способности синтезировать специфические колицины с помощью наборов типовых и индикаторных штаммов шигелл. Колицинотипирование – это определение чувствительности шигелл к известным колицинам. Для этих целей используют набор эталонных колициногенных штаммов. Вспомогательное диагностическое значение имеет внутрикожная аллергическая проба с дизентерином Цуверкалова (раствор белковых фракций шигелл Флекснера и Зонне). Реакцию учитывают через 24 часа после введения препарата. Она становится положительной с 4 дня болезни. При наличии гиперемии и инфильтрата диаметром 35 мм реакция считается сильно выраженной, при 20-34 мм – умеренной, при 10-15 мм - сомнительной. В настоящее время эта реакция практически не используется. Для установления принадлежности выделенных культур к роду шигелл и для оценки инвазивных свойств выделенных культур используют кератоконъюнктивальную пробу на морских свинках: введение в конъюнктивальный мешок небольшого количества агаровой или бульонной культуры приводит к развитию через 2-5 суток серозно-гнойного кератоконъюнктивита. В диагностике шигеллезов применяют инструментальные методы, в частности ректороманоскопию. Патологоанатомические изменения при дизентерии наиболее выражены в дистальном отделе толстой кишки. В начале заболевания на слизистой оболочке толстой кишки обнаруживается острое катаральное воспаление, затем – фибринозно-некротическое воспаление, переходящее в стадию образования язв. Язвы при дизентерии чаще всего поверхностные. Заживление язв протекает очень медленно. Лечение. Для лечения используют бактериофаг, антибиотики после определения антибиотикограммы; в случае возникновения дисбактериоза – препараты пробиотиков для коррекции микрофлоры кишечника. Бактериофаг дизентерийный поливалентный (Дизфаг) выпускается в жидком виде, таблетках с кислотоустойчивым покрытием, свечах. Он представляет собой стерильный фильтрат фаголизатов S. flexneri типов 1, 2, 3, 4 и 6 и S. sonnei. Применяется внутрь или ректально для лечения больных бактериальной дизентерией (с 6-месячного возраста), санации реконвалесцентов (бактерионосителей) и профилактики шигеллеза. В легких случаях назначают симптоматическое лечение (восстановление водного баланса), в тяжелых случаях – антибиотики. Обязательно учитывают антибиотикограммы выделенных культур. Наиболее эффективными антибиотиками являются фторхинолоны (ципрофлоксацин, офлоксацин, норфлоксацин), ампициллин, тетрациклины, цефалоспорины, аминогликозиды (гентамицин, сизомицин, тобрамицин, амикацин), препараты нитрофуранового ряда (фуразолидон, фурадонин, фурагин), комбинированные сульфаниламиды, в частности котримоксазол. Для лечения хронических форм дизентерии вне обострения в прошлом широко использовалась вакцина Чернохвостова, представляющую собой инактивированные этиловым спиртом шигеллы. Вводится подкожно в подлопаточную область. Для этих же целей применялась и энтеральная живая вакцина (иммуноген). Лечебное действие вакцины заключается в усилении иммуногенеза и десенсибилизации. В настоящее время эти препараты практически не используются. Для коррекции дисбиотических нарушений используют пробиотические препараты (бифидобактерин, колибактерин, бификол, бактисубтил и др.). Профилактика. Плановая специфическая профилактика при шигеллезах не проводится. По эпидемическим показаниям (работа в баклабораториях, в сфере общественного питания, выезд в регионы с высоким уровнем заболеваемости дизентерией Зонне) используется вакцина Шигеллвак, представляющая собой раствор липополисахарида, извлеченного из культуры S. sonnei и очищенный физикохимическими методами. Через 2-3 недели после введения вакцина обеспечивает невосприимчивость к инфекции в течение 1 года. Вакцина вводится подкожно или внутримышечно однократно. Возможна ежегодная ревакцинация. Для экстренной профилактики дизентерии в очагах инфекции применяют дизентерийный бактериофаг. Неспецифическая профилактика предусматривает раннее выявление больных и бактерионосителей, соблюдение санитарно-гигиенических правил приготовления, хранения и реализации пищевых продуктов, контроль за качеством питьевой воды, соблюдение правил личной гигиены, санитарно-просветительную работу среди населения. 8 вопрос. Понятие о пищевых бактериальных токсикоинфекциях и бактериальных интоксикациях. Возбудители. Микробиологическая диагностика. Пищевые токсикоинфекции (ПТИ) – острые заболевания с явлениями кратковременного инфицирования, связанные с поступлением в ЖКТпродуктов, содержащих большое количество живых потенциальнопатогенных микроорганизмов и токсинов, выделяемых при гибели бактерий (эндотоксинов). Эндотоксины не обладают строгой специфичностью и вызывают ворганизме общие признаки отравления. Факторы, оказывающие влияние на возникновение ПТИ: 1. связанные с возбудителем: А) массивность обсеменения пищи более 105-106 клеток/г, за счет изначальной контаминации пищевого сырья, нарушения технологии приготовления, условий и сроков хранения и реализации, Б) вирулентность возбудителя. 2. определяющие состояние организма человека: А) снижение иммунитета, Б) возраст (более подвержены – детское население, пожилые люди), В) полноценность и сбалансированность питания, Г) тяжелый физический труд, Д) состояние здоровья физического и психического (стрессы). Основные признаки ПТИ: 1. Часто носят массовый характер, охватывая группы людей, связанных общим источником питания. 2. Короткий инкубационный период ( в среднем от 4 до 24 часов). 3. Как правило имеют острое и бурное начало. 4. Отсутствие новых случаев заболевания после исключения из рациона продукта, послужившего причиной пищевого отравления. 5. Имеют только пищевой путь передачи, не передаются от больного человека к здоровому (неконтагиозность). 6. Клинически – часто реакции со стороны желудочно-кишечного тракта (тошнота, рвота, боли в области эпигастрия, метеоризм, диспептические явления), изменение температуры тела от субфебрильной до 38-39 0С. В крови – бактериемия. 7. Часто требуют только симптоматичекого лечения. 8. Выздоровление наступает самостоятельно через несколько дней (в среднем от 1 до 2-3 дней). 9. Сезонность – увеличение заболеваемости в летний период года. Условно-патогенные бактерии рода Salmonella: S.typhimurium, S.enteritidis, S.cholerae suis, S.heildelberg S.typhi и S.paratyphi – патогенные микроорганизмы, которые вызывают контагиозные заболевания тиф и паратиф (кишечные инфекции)!!! Чаще всего причиной пищевого отравления становятся мясные продукты (80%), особенно фаршевые изделия. Также заражением может происходить при употреблении инфицированных салатов, молочных, рыбных продуктов и яиц. Escherichia coli – аэроб и факультативный анаэроб, широко распространена в природе, содержится в основном в кишечнике человека и теплокровных животных. Источниками заражения служат молочные, мясные и рыбные (чаще фаршевые изделия) блюда, салаты, винегреты и другие кулинарные виды пищевых продуктов, особенно те, которые не подвергаются повторной термической обработке непосредственно перед приемом пищи. Продуцируют энтеротоксин. Proteus mirabilis и Proteus vulgaris – относятся к гнилостным бактериям и содержатся в гниющих отходах, распространены повсеместно. Выделяются во внешнюю среду из кишечника животных и человека. Протей длительно сохраняется и размножается на загрязненных остатками пищи инвентаре и оборудования (трещины, углубления). Заболевание чаще всего связано с употреблением мясных и рыбных продуктов и изделий (салаты, паштеты), особенно на производствах где используется один и тот же инвентарь и оборудование как для сырых, так и для готовых блюд. Streptococcus faecalis var liquefaciens и Streptococcus zymogenes - факультативно-анаэробные фекальные бактерии из семейства Streptococcaceae. Обитают в толстом кишечнике человека и животных, энтеротоксигенные штаммы могут находится в дыхательных путях, особенно в полости рта и носа больных ОРЗ или бактерионосителей. Бурно размножаются на пищевых продуктах (изделия из фарша, заливные блюда, кремы, пудинги и др.) при комнатной температуре. В отличие от многих других микроорганизмов при размножении в пищевых продуктах могут вызывать его ослизнение и неприятный горький привкус. Cl.perfringens типа А – спорообразующий факультативно-анаэробный микроорганизм, распространен в почве, воде, воздухе, пыли, содержится в кишечнике травоядных животных, рыб, человека. Частой причиной этой ПТИ является мясо, мясные и рыбные продукты, студни, салаты, ливер и др. блюда, где используются специи, зелень, мука и крупы (что объясняется повсеместным содержанием спор в объектах окружающей среды). Продуцируют энтеротоксин. Bacillus cereus – спорообразующий аэробный микроорганизм, также широко распространен в объектах окружающей среды (почва, вода, воздух, растительные продукты). ПТИ этой бактерией связывают с употреблением продуктов растительного происхождения (салаты, винегреты, гарниры, растительные консервы), колбасных и мясных изделий, куда споры попадают вместе со специями и др., молока и молочных продуктов. Продуцируют энтеротоксин. Vibrio parahaemolyticus - галофильные (солелюбивые) вибрионы, повсеместно встречаются в морской воде, размножаются в широком диапазоне температур (8-48 0С) и значений рН (5,0-10,9), оптимальная концентрация NaCl для размножения 3-8%. Отравления связаны с употреблением сырых моллюсков и рыбы, недоваренных или неправильно хранившихся морепродуктов и других пищевых продуктов, загрязненных морской водой. Продуцируют энтеротоксин. Род Klebsiella включает 4 вида: K.oxytoca, K.planticola, K.terrigena и типовой вид K.pneumonia с подвидами K.pneumonia, K.ozaenae, K.rhinoscleromatis. Это прямые неподвижные грамотрицательные палочки, сбраживают лактозу, входят в состав кишечного биоценоза, иногда встречаются в ротоглотке здоровых людей, широко встречаются во внешней среде. У штаммов, выделенных от человека и животных обычно имеется капсула, после пассажей на питательных средах она может утрачиваться. По капсульному антигену они подразделяются на 82 серовара. K.oxytoca и K.pneumonia вызывают оппортунистические инфекции в виде бактериемий, пневмонии, инфекций мочевых путей , часто вызывают внутриутробные инфекции у новорожденных, у больных в отделениях интенсивной терапии. K.ozaenae, K.rhinoscleromatis являются возбудителями хронических заболеваний верхних дыхательных путей – озены и риносклером. При микробиологической диагностике пищевых токсикоинфекций бактериологический метод (выделение чистой культуры и ее идентификация) является основным, а серологический (обнаружение антител в сыворотке больного) - ретроспективным. Биологический метод (заражение лабораторных животных) применяется для обнаружения экзотоксинов, используя при этом параллельно эффект нейтрализации токсина антитоксической сыворткой. Исследуемый материал (рвотные массы, промывные воды желудка, испражнения, кровь, мочу от больных и секционный материал от умерших, а также остатки пищи) засевают на среды накопления и на специальные среды для выделения чистых культур бактерий, которые могли послужить причиной пищевых отравлений. Для выделения сальмонелл исследуемый материал засевают на селенитовую среду накопления, а затем на дифференциально-диагностические среды Эндо и Левина. При выделении условно-патогенных бактерий (клебсиелл, протея, стафилококка и Cl.perfringens) определяют микробную обсемененность исследуемого материала. Для чего готовят разведения 103 -104 и высевают по 0,1 мл каждого разведения на соответствующие среды. Клебсиеллы выделяют посевом на среды Эндо, Левина, а стафилококки хорошо растут на селективных средах (солевой бульон, ЖСА и МСА). Протей определяют посевом материала по методу Шукевича. В конденсационную воду свежескошенного агара высевают по 0,1 мл исследуемого материала из разведения 103 -104 . Уже через 10 часов можно наблюдать «ползучий» рост бактерий по поверхности скошенного агара. Анаэробные бактерии выделяют при посевах материала на среду Китт-Тароцци. Выделенные чистые культуры идентифицируют по морфологическим, тинкториальным, биохимическим, серологическим свойствам для определения родовой и видовой принадлежности. Бактериологическая диагностика токсикоинфекций, вызванных сальмонеллами, эшерихиями и протеем. 1 этап. Производится посев материала на дифференциально-диагностические среды (Эндо, Плоскирева, Левина, висмут-сульфит агар) для выделения чистой культуры сальмонелл или эшерихий, а также в конденсационную воду в пробирке со скошенным агаром. 2 этап. После инкубации посевов при температуре 37°С в течение 20 – 24 ч. отмечают цвет колоний на чашках с дифференциальной средой и наличие «ползучего» роста, характерного для протея, в пробирке со скошенным агаром. Подозрительные колонии пересевают на трехсахарный агар для получения чистой культуры и одновременно ставят с ними реакцию агглютинации на стекле, используя смесь диагностических сывороток к разным сероварам сальмонелл. 3 этап. С выросшей культуры на трехсахарном агаре делают мазок и определяют чистоту выделенной культуры, ставят реакции агглютинации с групповыми О сыворотками и монорецепторными Н- сыворотками и делают посев на среды «пестрого» ряда. При выделении одного и того же серовара сальмонелл из организма больного и пищевого продукта делают окончательное заключение об этиологии пищевой токсикоинфекции- факторе передачи инфекции. На условно-патогенную микрофлоруфлору 1 этап. Производится посев материала на дифференциально-диагностические среды (Эндо, Плоскирева, Левина, висмут-сульфит агар) для выделения чистой культуры сальмонелл или эшерихий, а также в конденсационную воду в пробирке со скошенным агаром. 2 этап. При наличии «ползучего» роста на скошенном питательном агаре из конденсационной воды петлей берут материал для приготовления препарата «висячая» капля с целью установления подвижности и для мазка, который окрашивают по Граму и микроскопируют. 3 этап. Производят пересев на трехсахарный агар (Клиглера, Олькеницкого) и выделяют чистую культуру протея, 4 этап. определяют биохимические и другие признаки и устанавливают вид: P. vulgaris, P. mirabilis. Оценка роли условно-патогенных микроорганизмов в этиологии пищевых токсикоинфекций должна быть строго аргументирована: а) бактериологическим, серологическим, эпидемиологическим и клиническим исключением сальмонеллезов, дизентерии, холеры; б) выделением идентичных штаммов условно-патогенных бактерий из рвотных масс, промывных вод желудка, испражнений, продуктов; в) нарастанием титров реакции агглютинации с аутоштаммами возбудителей в динамике заболевания. Пищевые токсикозы (интоксикации) – острые, реже хронические (микотоксикозы) заболевания возникающие в результате употребления пищи, содержащей токсины (экзотоксины), накопившиеся в результате развития возбудителя. В продукте питания зачастую уже нет самого возбудителя, а только накопившийся экзотоксин. Возбудители чаще всего нестойки в окружающей среде, тогда как их токсины наоборот хорошо переносят высокие и низкие температуры, изменения рН, высокие концентрации соли и сахара. Экзотоксины обладают специфичностью, поэтому клиническая картина разных токсикозов различна. Ботулизм – тяжелый пищевой токсикоз, вызванный накоплением в пищевых продуктах ботулотоксина, продуцируемого спорообразующей анаэробной палочкой Cl.botulinum 7 типов А - G. В России большинство случаев ботулизма связано с типами А, В, С, Е. Ботулотоксин является самым сильным из всех бактериальных токсинов и отличается высокой устойчивостью к действию протеолитических ферментов (пепсин, трипсин), консервирующих факторов – солению, замораживанию, маринованию. Ботулотоксин относится к нейротоксинам. Поступая с пищей в ЖКТ, всасывается через кишечную стенку в кровь и лимфу. Механизм действия состоит из ингибиции Са-зависимого рецептора, освобождения ацетилхолина и блокады передачи импульсов через нервно-мышечные синапсы. Токсин в основном поражает бульбарные центры головного мозга. Продукты питания, как причина ботулизма: 1. Герметично упакованные консервы домашнего приготовления из грибов, мяса, птицы, овощей и фруктов. 2. Рыба соленая, копченая или вяленая в домашних условиях. 3. Свиное сало. 4. Консервы заводского производства (редко). В ряде случаев при размножении Cl.botulinum в консервах отмечается бомбаж (вздутие) консервных банок и снятие крышек со стеклянных банок в результате газообразования. Надо отметить, что характерно гнездовое размножение Cl.botulinum и накопление токсина, поэтому заболевают те люди, которые съели часть продукта с токсином, а употребившие часть продукта без токсина – не заболевают. Патогенными свойствами обладают определенные штаммы Staphylococcus aureus (аэробы) – энтеротоксигенные плазмокоагулирующие штаммы. При попадании в продукт они выделяют энтеротоксины (экзотоксины). Известно 6 типов серологически различных энтеротоксинов А, В, С, D, E, H. Источники заражения: 1. Человек - больной или носитель токсигенных штаммов на кожных покровах, в носоглотке, кишечнике; работники общепита с нагноившимися порезами, ожогами, заболеваниями дыхательных путей (ангина, пневмония, отиты). 2. Животные - больные маститом или гнойными заболеваниями внутренних органов. 3. Продукты питания: 1) мясные (колбасы, изделия из мясного фарша, паштеты), мясо птицы; 2) молочные продукты, мороженое; 3) кондитерские изделия с заварным кремом, продукты, богатые углеводами и белками; 4) макаронные изделия, картофельное пюре, манная каша (много углеводов); 5) рыба и рыбные продукты. |