Методичка по микробиологии для иностранных учащихся. Под редакцией профессора Л. П. Титова
 Скачать 0.93 Mb.
|
|
Под редакцией профессора Л. П. Титова Предисловие Медицинская микробиология является одной из наиболее важных областей знаний широко используемых во врачебной практике. Студенты-медики нуждаются в изучении микробиологии для успешной диагностики и лечения заболеваний. Инфекционная заболеваемость в мире до сих пор остается широко распространенной, в ее структуре постоянно происходят существенные изменения, появляются новые возбудители, изменяется характер течения хорошо известных заболеваний. В последние десятилетия в фундаментальной и прикладной микробиологии накоплены новые научные факты, разработаны новые методы исследований. В связи с этим весьма важно, чтобы в обучении студентов медицинской микробиологии были даны достаточно полные знания как о биологии микроорганизмов, так и о методах их выделения из разнообразных материалов, идентификации, методах диагностики инфекционных заболеваний, а также интерпретации полученных данных. В частности в пособии большое внимание уделено вопросам общей микробиологии, которые охватывают наиболее сложный, трудноусвояемый студентами материал. Дано современное изложение тем по стерилизации, дезинфекции, антисептике, так как в учебниках этот раздел представлен разноречиво. Вместе с тем, эти вопросы тесно связаны с актуальной проблемой внутрибольничных инфекций. Приводятся сведения по некоторым вопросам тропической микробиологии, представляющие интерес для иностранных учащихся. Материал пособия дополняет и уточняет отдельные разделы учебников с учетом учебной программы. Данное пособие может быть использовано не только иностранными учащимися, но и студентами всех факультетов. 1. Общая микробиология 1.1 Микроскопический (бактериоскопический) метод исследования Микроскопический (бактериоскопический) метод исследования - совокупность способов изучения морфологических и тинкториальных (способность окрашиваться) свойств микробов в исследуемом материале (лабораторная культура, патологический материал, пробы из внешней среды) с помощью микроскопии. Основная цель - установление этиологии болезни, морфологическая идентификация, а также определив чистоты выделенной чистой культуры. В лабораторной практике используют следующие типы микроскопических препаратов: а) бактериологический мазок (препарат-мазок); б) "висячая капля"; в) "придавленная капля"; г) тонкий мазок; д)"толстая капля"; ж) препарат-отпечаток. Этапы метода: 1. Забор материала (гной, мокрота, кровь, моча, испражнения, промывные воды бронхов и желудка, ликвор, содержимое полостей носа, вагины, трупный материал и др.). 2. Транспортировка материала. 3. Приготовление микропрепаратов, фиксация и окраска (при необходимости). 4. Микроскопия с оценкой формы, размеров, взаимного расположения микробов и т.д. 5. Заключение. Оценка метода: Метод прост, широко доступен, быстр, экономичен, но мало чувствителен (около ЮМ О5 бактерий в мл) и специфичен (из-за схожести морфологии микроорганизмов разных видов), небезопасен. 1.2. Противомикробные мероприятия Под противомикробными мероприятиями понимают совокупность методов уничтожения, подавления жизнедеятельности и ограничения распространения во внешней среде потенциально патогенных для человека микроорганизмов с целью предупреждения развития и лечения инфекционных болезней. Совокупность строго регламентированных и обязательных для выполнения противомикробных мероприятий в конкретных лечебных, детских или иных учреждениях и производствах носит название противомикробный режим. К противомикробным мероприятиям, оказывающим прямое повреждающее действие на микробы, относят стерилизацию, дезинфекцию, антисептику и химиотерапию. Стерилизация. Под стерилизацией понимают совокупность физических или химических способов полного освобождения объектов внешней среды от вегетативных и покоящихся форм патогенных, условнопатогенных и непатогенных микроорганизмов. Цель стерилизации: ^предупреждение заноса микроорганизмов в организм человека при медицинских вмешательствах; 2) создание и поддержание асептической и безмикробной (гнотобиотической) среды; 3) исключение микробного обсеменения (контаминации) питательных сред, культур клеток, реагентов при микробиологических и иммунологических исследованиях; 4) предупреждение микробной биодеградации (разрушения) лекарственных, диагностических, продовольственных и иных материалов. В медицинской практике стерилизации подвергают медицинский инструментарий и аппаратуру, лекарственные и диагностические препараты, перевязочный и шовный материал, белье, предметы ухода за больными, питательные среды, лабораторную посуду; при создании гнотобиотической зоны - воздух помещения, оборудование и все остальные объекты зоны (боксы, палаты и др.). Процесс стерилизации объектов состоит из следующих этапов: 1) дезинфекция; 2) очистка; 3) сборка, группировка, размещение в стерилизаторе; 4) собственно стерилизация; 5) сушка; 6) контроль за стерилизацией; 7) хранение стерилизованных материалов. Большинство объектов стерилизуют насыщенным паром под давлением в специальных аппаратах (паровых стерилизаторах, автоклавах). В зависимости от стерилизуемых материалов температура насыщенного пара устанавливается от 110°С до 138°С, давление- от0,4 до 2,5 атм, экспозиция - от 3 до 60 мин. Наборы инструментов, текстильные изделия в свертках, простые питательные среды стерилизуют при режиме 1 атм (121 °С) 15-30 мин. Чувствительные к температуре материалы стерилизуют при более низком давлении (0,4-0,5 атм), устойчивые к ней - при более высоком (2,5 атм). Стерилизация сухим жаром в аэростерилах также высокоэффективна, но высокая температура (160-180°С), длительные сроки экспозиции (1-2 часа) и сухой горячий воздух могут вызвать повреждение стерилизуемых материалов. Поэтому сухим жаром стерилизуют предметы из термостабильных материалов (стекло, металл и др.), а также гидрофобные вещества. Термолабильные материалы стерилизуют 3-4-кратным (дробным) прогреванием текучим паром при 100°С по одному часу с перерывами в одни сутки, в течение которых материал находится в термостате (для прорастания спор). Крупногабаритные изделия, предметы из термолабильных и разнородных материалов стерилизуют в герметических контейнерах (например, ЭТО-стерилизаторах) парами формальдегида, этиленоксида, а также растворами формалинэтилалкоголя, формалинизопропана при экспозиции в 6-24 часа (химическая стерилизация). В заводских условиях медицинские изделия, в основном одноразовые, часто стерилизуют гамма-лучами 0,2-4,5 М рад (лучевая стерилизация). Жидкости и воздух помещений можно простерилизовать пропусканием через бактерицидные фильтры, а также многократным "промыванием" помещения ламинарным потоком стерильного воздуха. Эффективность стерилизации проверяют бактериологическим или химическим методами. Дезинфекция. Под дезинфекцией понимают совокупность способов полного, частичного или селективного уничтожения потенциально патогенных для человека микроорганизмов на объектах внешней среды с целью предупреждения передачи возбудителей болезней от больных и микробоносителей здоровым людям. Дезинфекция в очагах инфекционных заболеваний (квартира, дом, больничное, служебное помещение и др.) ставит цель селективного уничтожения возбудителя конкретной болезни, например, в очаге туберкулеза - возбудителя туберкулеза, дифтерии - возбудителя дифтерии, гепатита - возбудителя гепатита и т.д. Дезинфекции в этом случае подвергается та группа объектов, которая служит фактором передачи возбудителя этой болезни. Она бывает заключительной, когда инфекционный больной госпитализируется в инфекционную больницу, и текущей, когда больной остается в очаге на какой-то период времени. В больницах, детских, общественных учреждениях ежедневно или периодически проводится профилактическая дезинфекция, цель которой - резкое снижение численности популяции всех потенциально патогенных для человека микробов на всех объектах помещения. В лечебных учреждениях особое внимание обращают на дезинфекцию инструментария, аппаратов, белья, предметов ухода, воздуха, выделений от больных. Дезинфицирующие средства. В подавляющем большинстве случаев для целей дезинфекции используют химические вещества, которые носят название дезинфектанты. Дезинфектанты должны обладать широким спектром действия, микробицидным эффектом, хорошо растворяться в воде и образовывать с ней или с воздухом стойкие активные растворы, суспензии, эмульсии, аэрозоли, туманы, обладать низкой токсичностью и аллергенностью, сохранять активность в обеззараживаемой среде, не повреждать обеззараживаемые объекты, не иметь неприятного запаха, быть экологически чистыми. Чаще применяют хлорсодержащие соединения (гипохлорид кальция, гипохлорид натрия, хлорамин и др.), препараты фенола, глюконат хлоргексидина, формальдегид и глютаральдегид, алкоголи, четвертичноаммониевые соединения, перекись водорода, надмуравьиную и надуксусную кислоты, пресепт, виркон. Выбор дезинфектанта, его концентрации, лекарственной формы (раствор, аэрозоль, суспензия, порошок, паста, лаки, краски и др.) экспозиции (время действия) зависит от требуемой степени дезинфекции, спектра и уровня чувствительности микроба-возбудителя, вида дезинфекции, объекта дезинфекции, условий, в которых протекает процесс дезинфекции. Среди последних важное значение имеет температура рабочей формы дезинфектанта, которая должна быть не ниже 20°С. Дезинфекция должна сопровождаться выборочным бактериологическим и иным контролем. Дезинфицирующий эффект может быть достигнут также с помощью сжигания объекта, прокаливания в пламени, воздействия горячего воздуха или пара в камерах, кипячения в воде, ультразвука, ультрафиолетового облучения, гамма лучей, очистки, стирки, мытья, выколачивания, вытряхивания. протирания, проветривания, Антисептика. Под антисептикой понимают совокупность способов уничтожения или подавления жизнедеятельности потенциально опасных для здоровья человека организмов на интактных или поврежденных коже, слизистых оболочках и в полостях с целью профилактики (профилактическая антисептика) и лечения (терапевтическая антисептика) инфекционных процессов. Выделяют следующие категории профилактической антисептики: 1) антисептика свежих ран; 2) хирургическая антисептика рук; 3) гигиеническая антисептика рук; 4) антисептика операционного поля; 5) антисептика пупочной раны, опрелостей и ссадин кожи новорожденных; 6) предупреждение послеродового мастита, микоза стоп и других инфекций кожи и слизистых оболочек. Терапевтическая антисептика применяется с целью: 1) подавления жизнедеятельности микробов-возбудителей местных инфекционных процессов и предупреждения сепсиса; 2) предупреждения повторного попадания микробов в патологический очаг и развития суперинфекции, реинфекции и вторичной инфекции. Процесс антисептики состоит из следующих этапов: 1) очистка места нанесения антисептика от грязи, сгустков крови, слизи, инородных частиц; 2) хирургическая обработка (при антисептике ран); 3) внесение антисептического препарата; 4) изоляция участка. Антисептические средства подразделяют на: 1) химические антисептики; 2) биологические антисептики (бактериофаги и препараты из бактерий-антагонистов); 3) физические и механические факторы (хирургическая обработка, промывание, дренирование, сорбция и др.). Антисептические препараты относятся к следующим классам химических веществ: хлор, йод и другие галогены; органические и неорганические кислоты; перекись водорода и перманганат калия; формальдегид и спирты; фенол и его препараты; сопи тяжелых металлов; красители; катионные и анионные поверхностно-активные вещества; нитрофурановые, сульфаниламидные. 8-оксихинолиновые, хинолоновые, имидазольные и др. соединения. Готовые лекарственные формы антисептиков, прежде всего, должны вызывать гибель (бактерицидный эффект) или задерживать рост и размножение (бактериостатический эффект) микробов и не оказывать повреждающее действие на организм человека. Кроме того, они не должны снижать противомикробную активность в присутствии патологических и физиологических субстратов, иметь достаточно широкий спектр действия, хорошо растворяться в липидах, быть недорогими, экологически чистыми в производстве и стабильными при хранении. Перед применением антисептика с целью лечения от больного выделяют возбудитель болезни и определяют его чувствительность к препарату. При выборе антисептика для профилактической антисептики ориентируются на спектр и уровень естественной чувствительности микробов, которые обитают в месте нанесения антисептика. В больничных стационарах в связи с широким распространением устойчивых к антибиотикам, антисептикам и дезинфектантам вариантов бактерий устанавливают систематический контроль за их распространением. Асептика. Асептика - это совокупность противомикробных мероприятий, направленных на предупреждение развития инфекционного заболевания во время медицинских вмешательств или нарушений технологического процесса при микробиологических исследованиях и производстве различных материалов. В медицинской практике асептические условия создаются при хирургических операциях, приеме родов, эндоскопических процедурах, парентеральном введении лекарств и других медицинских вмешательствах, а также при больничном содержании лиц с высоким риском развития инфекции. Для этого инструментарий, перевязочный и шовный материал, инъекционные растворы, халаты, маски, перчатки, дренажи и другие соприкасающиеся с раной объекты стерилизуют; руки лиц, принимающих участие в медицинском вмешательстве, операционное поле пациента подвергают антисептической обработке: воздух помещений, в которых проводят асептические мероприятий, и все, что в них находится, дезинфицируют; асептическая зона с помощью шпюзов или аналогичных приспособлений изолируется от смежных помещений. В микробиологической практике асептика включает: 1) забор материала для исследования стерильным инструментарием и в стерильную посуду в условиях, исключающих его микробную контаминацию посторонней микрофлорой; 2) предупреждение контаминации материала во время его доставки в лабораторию; 3) использование стерильных петель, пипеток, питательных сред, посуды, реактивов и других объектов в процессе микробиологических исследований; 4) предупреждение контаминации микробных культур микрофлорой рук, волос, одежды лабораторного работника, а также с не стерильных объектов внешней среды; 5) работу в стерильных боксах, ламинарном потоке стерильного воздуха, в зоне пламени спиртовки или газовой горелки. Несоблюдение указанных мер приводит к неправильному заключению о виде выделенной культуры и ее свойствах, что, в свою очередь, ведет к ошибочному диагнозу и неадекватным мерам терапии и профилактики. 1.3.Классификация питательных сред Питательные среды можно разделить: А) По происхождению: 1} естественные - натуральные продукты питания (мясо, молоко, картофель); 2) искусственные - приготовленные специально для выращивания микробов: - среды из естественных продуктов (мясная вода, мясопептонный бульон (МПБ), мясопептонный агар (МПА), - не имеющие постоянного состава; - синтетические питательные среды - растворы строго определенных количеств солей, аминокислот, азотистых оснований, витаминов в дистиллированной воде - имеют постоянный состав, используются для выращивания микроорганизмов и культур клеток при получении вакцин, иммунных сывороток и антибиотиков; Б) По назначению: 1) общего назначения (МПБ, МПА) - на них растет большинство микробов; 2) элективные - избирательно способствуют росту одного вида микробов из смеси (например, желточно-солевой агар для стафилококков); 3) дифференциально-диагностические - позволяют отдифференцировать по внешнему виду среды один вид микроба от других (например среды Эндо, Левина для кишечной группы микробов). Кроме того, в зависимости от целей использования в схеме выделения чистых культур, по назначению можно выделить следующие среды: 1) обогащения - подавляют рост микробов, сопутствующих возбудителю; 2) для получения изолированных колоний; 3) накопления чистой культуры; В) По консистенции: 1) жидкие; 2) полужидкие (при добавлении агар-агара в концентрации 0,5-0,7%); 3) плотные - выше 1%. 1.4.Культуральный метод исследования Культуральный (бактериологический) метод исследования - совокупность способов, направленных на выделение и идентификацию чистых культур микроорганизмов (бактерий) с помощью культивирования на питательных средах. Чистая культура - совокупность микроорганизмов одного вида. Чаще всего чистую культуру получают путем отбора и культивирования изолированной колонии (потомство одной микробной клетки). Этапы метода: 1. Забор материала для исследования. 2. Выделение чистой культуры и ее идентификация. 3. Заключение. Забор материала для исследования. Вид исследуемого материала зависит от цели исследования (диагностика - от больного; эпиданализ - из внешней среды, продуктов питания, больного и (или) бактерионосителя). Выделение чистой культуры. Включает 3 или 4 этапа: 1. Посев материала (после предварительной микроскопии) на чашку с плотной питательной средой (лучше дифференциально-диагностической или селективной) с целью получения изолированных колоний. Производят его чаще всего методом механического разобщения. В некоторых случаях (например, кровь) материал предварительно засевают в жидкую среду обогащения с последующим пересевом на чашку с агаровой средой. Иногда до посева проводят селективную обработку материала (с учетом свойств выделяемого микроорганизма; например, обработка кислотой или щелочью для выделения устойчивых бактерий). Культивируют при температуре 37°С в течение 18-24 часов. Время культивирования для разных видов бактерий может колебаться. 2(3):а) изучение колоний на чашке с агаром (культуральные признаки), отбор наиболее типичных; б) приготовление мазков из этих колоний с окраской (по Граму или другими методами); а) отсев остатка исследованной колонии на среду накопления и выращивание в термостате при оптимальной температуре. 3(4). Изучение чистоты культуры, полученной на среде накопления. С этой целью готовят мазок, окрашивают (чаще по Граму), микроскопически изучают морфологическую и тинкториальную однородность (в разных полях зрения). 4(5). Идентификация чистой культуры. |