практикум по биохимии. Практикум по биологической химии, изданный в 1986 году, подвергся существенной переработке, а также дополнен новыми лабораторными работами в разделах белки, липиды,
 Скачать 1.79 Mb.
|
Работа 97. Определение белка в мочепо методу Бранденберга-Робертса-СтольниковаРеактивы. Азотная кислота, конц. Оборудование. Штатив с пробирками; пипетка для концентрированных кислот; пипетка вместимостью 2 мл. Материал. Моча, нормальная и патологическая*. Метод основан на пробе Геллера, состоящей в том, что при наслаивании мочи, содержащей белок, на концентрированную азотную кислоту образуется мутное белое кольцо денатурированного белка. Экспериментально установлено, что растворы, содержащие 0,033 г/л белка, дают это кольцо между 2-й и 3-й минутами после наслаивания. Ход определения. Проводят пробу Геллера с нормальной и патологической мочой, для чего вносят в пробирку 20 капель концентрированной азотной кислоты и осторожно из пипетки наслаивают мочу. Если в моче содержится белок, то через 2-4 мин образуется белая муть в виде кольца. Мочу с положительной пробой Геллера используют для количественного определения белка, для чего готовят разведение мочи. В пять пробирок наливают по 2 мл дистиллированной воды. В первую вносят 2 мл мочи, перемешивают и отбирают 2 мл смеси и переносят во вторую и т.д. Из последней пробирки 2 мл набранной жидкости отбрасывают. Получается моча, разведенная в 2, 4, 8, 16 и 32 раза. В другие пять пробирок отмеривают по 2 мл концентрированной азотной кислоты и осторожно с помощью пипетки наслаивают на кислоту соответствующую пробу разведенной мочи. Отмечают максимальное разведение мочи, при котором появляется мутное колечко между второй и третьей минутами. Расчет. Найденное разведение мочи умножить на 0,033 г/л. Например, кольцо денатурированного белка образовалось в четвертой пробирке, где разведение равно 16. Следовательно, содержание белка в исследуемой моче 0,033·16 = 0,528 г/л. Оформление работы. Рассчитать содержание белка в патологической моче и указать на использование метода в практике. Работа 98. Качественное определение индикана в мочеРеактивы. Свинца ацетат (100 г/л); железо хлорное; кислота соляная концентрированная, пл. 1,19; реактив Обермейера; 0,2-0,4 хлорного железа и 100 мл концентрированной соляной кислоты; хлороформ. Материал. Моча свежевыпущенная. Принцип метода основан на способности индикана с реактивом Обермейера в присутствии хлороформа окрашиваться в синий или красный цвет. Ход определения. 1 мл мочи смешивают с раствором ацетата свинца в отношении 1:10, фильтруют. Смешивают 1-2 мл фильтрата с реактивом Обермейера в соотношении 1:1, прибавляют 0,5-1,0 мл хлороформа и опрокидывают пробирку несколько раз. Если слой хлороформа окрашивается в синий или красный цвет, то проба положительная. Оформление работы. По полученному окрашиванию сделать вывод о возможности использования данной реакции в диагностике патологических процессов. Практическое значение работы. В норме индикан содержится в моче в незначительном количестве и не обнаруживается качественными пробами. Индиканурия встречается при интенсивном гниении белковых веществ в кишечнике, а также при усиленном распаде белков в организме. Работа 99. Обнаружение некоторых пигментов в моче. Реактивы. Бензидин, 1%-ный раствор в 32%-ной уксусной кислоте; пероксид водорода, 3%-ный раствор; иод, 1%-ный спиртовой раствор. Оборудование. Штатив с пробирками; пипетки вместимостью 5 мл. Материал. Моча, нормальная и патологическая*. а. Бензидиновая проба на кровяные пигменты в моче. Принцип метода см. работу 9, а. В одну пробирку вносят 5 капель нормальной, а в другую – патологической мочи и добавляют по 3 капли бензидинового реактива и раствора пероксида водорода. При наличии пигментов появляется сине-зеленая окраска. б. Проба Розина на желчные пигменты в моче. Метод основан на образовании из билирубина под действием иода биливердина, окрашенного в зеленый цвет. Ход определения. В одну пробирку вносят 5 мл нормальной, а в другую – патологической мочи и осторожно наслаивают раствор иода. Если в моче присутствует билирубин, на границе двух жидкостей появляется зеленое кольцо. МЕТАБОЛИЗМ КСЕНОБИОТИКОВМетаболизм ксенобиотиков осуществляется с участием ферментов, содержащихся в тканях и жидкостях организма. Их состав определяет специфичность превращения любого чужеродного соединения. Метаболизм ксенобиотиков зависит от пути поступления их в организм. В пищеварительном тракте возможен гидролитический распад чужеродных веществ, в биологических жидкостях они подвергаются и некоторым другим превращениям (оксидоредукции, конъюгации), а в клетках происходят самые разнообразные реакции биотрансформации ксенобиотиков (см. учебник, с.444-455). Наиболее активно ферментативные превращения ксенобиотиков осуществляются в клетках печени. Среди них следует отметить реакции окисления веществ, осуществляемые монооксигеназной ферментативной системой мембран эндоплазматической сети (микросом) печени. В микросомальной цепи протекают окислительные реакции двух типов: реакции гидроксилирования природных (аутобиогенных) и чужеродных соединений и реакции пероксидного окисления ненасыщенных жирных кислот (А.И.Арчаков, 1975). Для исследования метаболизма ксенобиотиков возможны два подхода:
В экспериментах применяют оба подхода; в клинике метаболизм лекарственного средства оценивают, как правило, по содержанию в биологических жидкостях изучаемого вещества и его продуктов обмена.
и конъюгации ксенобиотиков |