Лаб. практикум. Практикум по биологической химии методические указания к проведению лабораторных работ по биологической химии для студентов второго курса
 Скачать 1.02 Mb.
|
БИОХИМИЯ мочиМоча образуется и выделяется почками. Первичная моча представляет собой ультрафильтрат крови. Она содержит все компоненты крови, кроме форменных элементов и белков. В результате реабсорбционных и секреторных процессов в канальцах и собирательных трубочках почек формируется окончательная моча. С мочой выделяется до 150 различных веществ. Моча выделяется периодически и отдельные её порции в течение дня имеют неодинаковый химический состав, разную относительную плотность и кислотность. При многих болезнях качественный и количественный состав мочи меняется, в ней появляются химические и морфологические составные части, не встречающиеся при нормальных условиях. Исследование мочи имеет очень большое значение при диагностике. Она отражает состояние обмена веществ в организме и функцию ряда органов (печень, почки и др.). Моча широко доступна для различных видов ее исследования. В клинико-биохимических лабораториях проводят общий и специальный анализ мочи. Общий анализ включает исследование физико-химических свойств мочи (удельный вес, цвет, прозрачность, запах, кислотность, а также органические и неорганические составные части) и определение в ней ряда патологических компонентов: сахар, кетоновые «тела», белок, гемоглобин, пигменты и индикан. При необходимости подсчитывают также количество эритроцитов и лейкоцитов в моче. Анализ мочи дает возможность судить о характере течения болезни и об эффекте терапевтических мероприятий. Химический состав мочи отражает также сдвиги в химизме крови. В связи со всем этим исследование мочи является важной составной частью в общем обследовании каждого вновь поступающего больного. Общий анализ обязателен при первичном обследовании пациента и диспансерном наблюдении. Специальный анализ, т.е. определение прочих составных частей мочи (метаболиты, ферменты, отдельные минеральные вещества и т.д.), проводиться при подозрении на поражение определенного органа, конкретного звена обмена. Лабораторная работа №32Патологические компоненты мочи Качественные реакции на белок в мочеБелок в нормальной моче находиться в виде следов, которые не открываются обычными реакциями, применяемыми в клинической лаборатории. Появление белка в моче называется протеинурией, которая может быть двух видов: «почечная» и «внепочечная». При «почечной» или истинной протеинурии белки сыворотки крови попадают в мочу через почки (при нефрите, т.е. при воспалении клубочков почек, когда увеличивается их проницаемость; в случае сердечной декомпенсации; при некоторых формах повышенного артериального давления; иногда при беременности). «Внепочечная» или ложная протеинурия наблюдается при попадании в мочу слизи, крови, гноя, но не из почек, а из мочевыводящих путей. Белок появляется в моче при нефрите (т.е. воспалении сосудистых клубочков почек, когда увеличивается их проницаемость), а в случае сердечной декомпенсации, при некоторых формах повышенного кровяного давления и иногда при беременности. Моча, содержащая белок, становится мутной. Для обнаружения белка в моче обычно применяют три реакции на его осаждение: 1. Осаждение кипячением. 2. Осаждение концентрированной азотной кислотой. 3. Осаждение сульфосалициловой кислотой (самая чувствительная).
Принцип метода. При кипячении нейтральных или слабокислых растворов белка, последний денатурирует и выпадает в осадок. При денатурации белка нарушаются четвертичная, третичная и даже вторичная структуры, т.е. отмечается разрыв цементирующих белковую молекулу вторичных связей (водородных, дисульфидных, электростатических, эфирных, вандервальсовых и др.), что ведет к изменению пространственной структуры и уменьшению гидрофильности белковой молекулы. Исследуемый материал и реактивы 1. Патологическая моча. 2. Раствор уксусной кислоты (1%). 3. Раствор уксусной кислоты (10%). 4. Лакмусовая бумага. Ход работы Предварительно проверяют мочу на лакмус. Если моча имеет кислую реакцию, то её (2-3 мл) сразу кипятят в пробирке, а если моча имеет щелочную реакцию, то её сначала очень слабо подкисляют на лакмус добавлением по каплям 1% уксусной кислоты. В присутствии белка при кипячении образуется муть или осадок, не растворяющийся при повторном кипячении после добавления к жидкости 3-5 капель 10% уксусной кислоты. Этим осадок свернувшихся белков отличается от осадков фосфатов и карбонатов кальция и магния, которые могут выпасть при кипячении в слабокислой среде, но растворяются при нагревании в более кислом растворе уксусной кислоты.
Принцип метода. Концентрированные минеральные кислоты вызывают денатурацию, что связано с дегидратацией белковых частиц, их нейтрализацией и образованием комплексных солей белка с кислотами Ортофосфорная кислота осадка не дает. В избытке всех минеральных кислот, за исключением азотной, выпавший осадок белка растворяется. Исследуемый материал и реактивы 1. Патологическая моча. 2. Азотная кислота (концентрированная). Ход работы В пробирку наливают около 1 мл концентрированной азотной кислоты и осторожно из пипетки по стенке пробирки наливают мочу. В присутствии белка на границе раздела двух жидкостей образуется белый аморфный слой или муть, так называемое белковое кольцо. При отсутствии белка в моче на границе обоих жидкостей появляется цветное кольцо, обусловленное изменением пигментов мочи под действием азотной кислоты.
Принцип метода. Органические кислоты вызывают необратимое осаждение белков обусловленное нейтрализацией заряда белка, что приводит к разрушению пространственной структуры, денатурации и осаждению белка. Исследуемый материал и реактивы 1. Патологическая моча. 2. Раствор сульфосалициловой кислоты (20% свежеприготовленный). Ход работы К 1-2 мл мочи добавляют 2-3 капли свежеприготовленного 20% раствора сульфосалициловой кислоты. При наличии белка в моче образуется белый осадок или муть. |