Лаб. практикум. Практикум по биологической химии методические указания к проведению лабораторных работ по биологической химии для студентов второго курса
 Скачать 1.02 Mb.
|
Качественные реакции на ацетон и ацетоуксусную кислоту в мочеАцетон, ацетоуксусная кислота и бета-гидрокисмасляная кислота относятся к кетоновым телам. Нормальная моча содержит незначительные количества кетоновых тел, которые не выявляются обычными реакциями (меньше 50мг в суточном количестве). Однако, при недостатке углеводов, диабете и голодании, когда идет усиленный распад жиров и белков, в крови появляются в большом количестве недоокисленные продукты – кетоновые тела. Появление кетоновых тел в моче называется кетонурией. Для обнаружения ацетоновых «тел» в моче в лабораторной практике используют реакции Либена, Легаля, Ланге, Герхарда и др.
Принцип метода. Ацетон и АУК в щелочной среде образуют с нитропруссидом натрия оранжево-красное окрашивание. Исследуемый материал и реактивы 1. Моча. 2. Раствор гидроксида натрия (10%). 3. Раствор нитропруссида натрия (10% свежеприготовленный). 4. Ледяная уксусная кислота. Ход работы На часовое стекло наносят 1 каплю мочи, 1 каплю 10% раствора гидроксида натрия и 1 каплю свежеприготовленного 10% раствора нитропруссида натрия. Появляется оранжево-красное окрашивание. Добавление 3 капель ледяной уксусной кислоты дает вишнево-красное окрашивание. Реакцию можно проводить также и в пробирке.
Принцип метода. Ацетон мочи в щелочной среде при взаимодействии с реактива Люголя образует йодоформ, который можно узнать по запаху. При больших концентрациях ацетона в моче выпадает кристаллический осадок йодоформа. Исследуемый материал и реактивы 1. Моча. 2. Раствор гидроксида натрия (10%). 3. Реактив Люголя. Ход работы К 1-2 мл мочи добавляют 5-6 капель 10% раствора гидрокисда натрия и 3-4 капли реактива Люголя. Отмечают характерный запах йодоформа.
Принцип метода. При осторожном наслоении концентрированного раствора аммиака на раствор подкисленной мочи с добавлением нитропруссида натрия, в присутствии ацетона и АУК на границе раздела двух жидкостей образуется красно-фиолетовое или фиолетовое кольцо. Исследуемый материал и реактивы 1. Моча. 2. Ледяная уксусная кислота 3. Раствор нитропруссида натрия (10% свежеприготовленный). 4. Раствор аммиака (концентрированный). Ход работы К 1-2 мл мочи добавляют 0,5 мл ледяной уксусной кислоты и 5-6 капель нитропруссида натрия. Встряхивают содержимое пробирки и осторожно по стенке (!) наслаивают 1-2 мл концентрированного раствора аммиака.
Принцип метода. Метод основан на взаимодействии Fe3+ с енольной формой АУК с образованием комплекса красно-фиолетового цвета. Реакция не специфична. Креатин мочи с нитропруссидом натрия дает аналогичное окрашивание, но в этом случае при добавлении концентрированной уксусной кислоты жидкость не окрашивается в вишневый цвет. Исследуемый материал и реактивы 1. Моча. 2. Раствор хлорида железа (III) (5%). Ход работы К 5 капелям мочи прибавляют по каплям 5% раствор хлорида железа (III); при этом выпадает осадок фосфатов в форме фосфата железа (III). При наличии АУК от дальнейшего прибавления хлорида железа (III) появляется вишнево-красное окрашивание. При стоянии окраска бледнеет вследствие самопроизвольного декарбоксилирования АУК. Качественная реакция на индикан в мочеИндикан – это калиевая или натриевая соль индоксилсерной кислоты, которая образуется в печени в процессе обезвреживания токсичных соединений всасывающихся в кровь при гниении аминокислот в кишечнике. Индикан в нормальной моче содержится в незначительных количествах (за сутки выделяется около 0,01г). При избытке индикана моча приобретает коричневый цвет. Увеличение содержания индикана в моче наблюдается при ретенционных азотемиях, нарушениях функции кишечника (запоры, заворот кишечника, наличия большого количества гнилостных бактерий), в послеоперационный период у больных, оперированных по поводу «острого живота», при перитонитах. Принцип метода. Метод основан на превращении индикана в индоксил после гидролиза эфирной связи в присутствии концентрированных кислот с последующим окислением индоксила хлоридом железа (III) или перманганатом калия с образованием синего индиго. Исследуемый материал и реактивы 1. Моча. 2. Раствор ацетата свинца (100 г/л). 3. Раствор хлорида железа (0,4 г железа (III) в 100 мл концентрированной соляной кислоте). 4. Хлороформ. 5. Раствор тиосульфата натрия (200 г/л). 6. Соляная кислота (концентрированная). 7. Раствор перманганата калия (1%). 8. Фильтры. Ход работы 1. К 4 мл мочи прибавляют 0,4 мл раствора ацетата свинца для осаждения желчных пигментов, солей и других веществ, мешающих реакции. Фильтруют. 1-2 мл фильтрата смешивают с равным объемом реактива, содержащего 0,4 г хлорида железа (III) в 100 мл концентрированной соляной кислоты, прибавляют 0,5-1 мл хлороформа и осторожно перемешивают. Нижний слой хлороформа окрашивается в синий или красный цвет, не исчезающий при добавлении раствора тиосульфата натрия. 2. К 20 каплям мочи добавляют равный объем концентрированной соляной кислоты, 1-2 капли 1% раствора перманганата калия и 2-3 капли хлороформа. Порибирку закрывают пробкой и в течение 1-2 минут осторожно опрокидывают. В присутствии индикана нижний хлороформный слой окрашивается в голубой или синий цвет. Указания к оформлению лабораторной работы Результаты качественных реакций на патологические компоненты мочи представьте в виде таблицы:
Контрольные вопросы
|