Лаб. практикум. Практикум по биологической химии методические указания к проведению лабораторных работ по биологической химии для студентов второго курса
 Скачать 1.02 Mb.
|
Определение глюкозы в мочеВ моче здорового человека глюкоза присутствует в виде следов (0,4 г/л) и не может быть обнаружена обычными химическими реакциями. Выделение сахара с мочой (глюкозурия) в количестве, превышающем норму, обусловлено повышением либо его содержания в крови (внепочечная глюкозурия), либо пропускной способностью почек (почечная глукозурия). Наиболее часто появление глюкозы в моче отмечается при сахарном диабете, реже при действии глюкокортикоидов (стероидный диабет). Для обнаружения сахара в моче пользуются пробами Троммера (см. л/р №4), Фелинга.
Принцип метода. Реакция основана на способности глюкозы при нагревании восстанавливать Cu2+ в щелочной среде. При этом выпадает желтый осадок гидрата закиси меди или красный осадок закиси меди. Исследуемый материал и реактивы 1. Патологическая моча. 2. Реактив Фелинга. Ход работы К 5 каплям реактива Фелинга добавляют 5 капель исследуемой мочи. Жидкость перемешивают и нагревают до начала кипения. Следует отметить, что в моче содержится много органических веществ (мочевая кислота, креатинин и др.), которые при длительном кипячении могут восстанавливать тяжелые металлы. В противоположность этому восстановление металлов в присутствии глюкозы происходит до кипения. Качественные реакции на кровяные пигменты в мочеК числу патологических составных частей мочи относятся также кровь (точнее форменные элементы) и кровяные пигменты (гемоглобин и метгемоглобин). Появление крови в моче называется гематурия, а при наличие кровяных пигментов говорят о гемоглобинурии. Гемоглобинурия наблюдается в основном при отравлении гемолитическими ядами и при ряде заболеваний, связанных с гемолизом (распадом) эритроцитов. Гематурия имеет место при кровотечениях из почек или мочевыводящих путей. При наличии крови моча принимает красноватый оттенок, интенсивность которого зависит от количества примешанной крови. При гематурии моча бывает мутной от взвешенных форменных элементов крови, которые в моче не гемолизируются, так как она является по отношению к крови гипертоническим раствором. Окраска мочи при этом может быть разных оттенков: от ярко-красного – при переходе гемоглобина в оксигемоглобин, до вишневого – при наличии восстановленного гемоглобина. Если гемоглобин находится в виде метгемоглобина, моча принимает буроватый цвет (цвет мясных помоев). В случаях гематурии и гемоглобинурии в моче определяется белок.
Принцип метода. Проба основана на окислении бензидина атомарным кислородом, который образуется при разложении пероксида водорода кровяным пигментом – гемоглобином, оказывающим пероксидазное действие. Исследуемый материал и реактивы 1. Нормальная и патологическая моча. 2. Раствор бензидина (1% в 32% растворе уксусной кислоты). 3. Раствор пероксида водорода (3%). Ход работы В одну пробирку вносят 5 капель нормальной мочи, а в другую – патологической и добавляют по 3 капли 1% раствора бензидина в 32% уксусной кислоте и 3% раствора пероксида водорода. При наличии кровяных пигментов моча окрашивается в синий или сине-зеленый цвет.
Принцип метода. При кипячении со щелочью фосфаты, содержащиеся в моче, выпадают в осадок и увлекают за собой кровяные пигменты. В присутствии кровяного пигмента отстоявшийся осадок темнее мочи, в отсутствие пигмента осадок фосфатов будет более светлым, чем моча. Исследуемый материал и реактивы 1. Нормальная и патологическая моча. 2. Раствор гидроксида натрия (10%). Ход работы К 3-4 мл нефильтрованной мочи прибавляют 5-7 капель 10%-ного раствора гидроксида натрия и кипятят. Дают полностью остыть и отстояться осадку фосфатов и сравнивают окраску осадка с окраской исследуемой мочи. В присутствии кровяного пигмента осадок будет темнее мочи. В моче, не содержащей крови, осадок будет светлее, чем раствор. Качественная реакция на желчные пигменты в мочеВажнейшим желчным пигментом является билирубин. Нормальная моча содержит лишь небольшие количества билирубина, которые обычными реакциями не обнаруживаются. При различного рода желтухах билирубин появляется в моче (билирубинурия). Моча, содержащая билирубин, имеет желтовато-коричневый цвет и при взбалтывании легко образует пену, которая долго не исчезает (вследствие понижения поверхностного натяжения под влиянием попадающих одновременно в мочу желчных кислот).
Принцип метода. Метод основан на окислении билирубина в биливердин (зеленое окрашивание) под действием йода. Исследуемый материал и реактивы 1. Нормальная и патологическая моча. 2. Раствор йода спиртовой (1%). Ход работы В одну пробирку вносят 5 мл нормальной, а в другую – патологической мочи и осторожно наслаивают 1% спиртовой раствор йода. Если в моче присутствует билирубин, то на границе двух жидкостей появляется зеленой кольцо. |