Лаб. практикум. Практикум по биологической химии методические указания к проведению лабораторных работ по биологической химии для студентов второго курса
 Скачать 1.02 Mb.
|
Биохимия кровиКровь – жидкая ткань, состоящая из клеток (форменных элементов крови) и внеклеточной жидкой среды – плазмы, и выполняющая следующие функции: транспортную, осморегуляторную, буферную, обезвреживающую, защитную, регуляторную и гомеостатическую. Состав крови отражает нормальные и патологические процессы, происходящие в организме человека. На долю крови приходится 7% от веса тела. Жидкая часть – плазма составляет 55-60%, форменные элементы (эритроциты, лейкоциты, тромбоциты, лимфоциты) – 40-45%. Удельный вес крови 1,055-1,065. Осмотическое давление крови 7,7- 8,1 атм. Вязкость крови в 5 раз больше вязкости воды. В крови 77-82% воды, сухой остаток составляет 18- 23%. Лабораторная работа №31Определение общего белка в сыворотке крови биуретовым методом (набором реагентов)При удалении форменных элементов из крови остается плазма, а при извлечении из нее фибриногена – сыворотка крови. Общее количество белков в плазме составляет 70-85 г/л. С возрастом количество белков в плазме крови уменьшается до 65-67 г/л. Нормальное содержание общего белка в сыворотке крови у взрослых 65-85 г/л, у детей до 6 лет – 56-86 г/л. Основными группами белков плазмы являются альбумины (54-65 г/л), глобулины (34-46 г/л) и фибрин (2-4 г/л). С помощью электрофореза можно разделить их на несколько фракций: преальбумины, альбумины (от3 до 5 фракций), глобулины (от 5 и более фракций). Глобулины составляют в среднем 36,8 % общего количества белков сыворотки крови, в том числе: α1-глобул 2-5%, α2-глобулины – 7-13%, β-глобулинов – 8-15%, γ-глобулинов – 12-22%. Большинство белков находится в плазме в виде комплексов (липопротеины, гликопротеины и др.). Белки крови выполняют разнообразные функции: дыхательная, транспортная, поддерживают осмотическое и онкотическое, обладают антигенной активностью. Принцип метода: пептидные связи белков образуют в щелочной среде с ионами двухвалентной меди комплекс сине-фиолетового цвета, интенсивность окраски которого пропорциональна концентрации белка и измеряется фотометрически. Исследуемый материал и реактивы 1. Сыворотка крови. 2. Биуретовый реактив. 3. Стандартный раствор белка. () Тимоловый реактив. 4. Раствор хлорида натрия (0,9%). Ход работы Внести в пробирки реагенты в соответствии со схемой:
Содержимое пробирок перемешать, избегая образования пены. Инкубировать 30 минут при комнатной температуре (18-250С). После инкубации измерить экстинкцию опытных проб против контрольной пробы в кювете с длиной оптического пути 10мм при длине волны 540 нм (500-560 нм). Концентрацию общего белка рассчитывают по формуле:  где С – концентрация общего белка, г/л; ЕО – экстинкция опытной пробы; ЕСТ – экстинкция стандартного раствора белка; А – концентрация белка в стандарте, г/л. или определяют по калибровочному графику. Построение калибровочного графика. Из стандартного раствора белка готовят калибровочные растворы в соответствии с таблицей:
Примечание. А – концентрация белка в стандарте, г/л. 0,5 мл каждого калибровочного раствора вносят в пробирки с 0,45 мл 0,9% раствора NaCl, добавляют по 0,2 мл биуретового реактива. Перемешивают и через 30 минут фотометрируют против контрольной пробы (см. ход определения). По полученным данным строят калибровочный график или рассчитывают фактор пересчета. Указания к оформлению лабораторной работы В таблицу показателей норм основных клинико-биохимических исследований впишите нормальные значения концентрации общего белка в сыворотке крови. В тетради для лабораторных работ запишите ход работы, полученные результаты (концентрацию общего белка в сыворотке крови) и сделайте выводы причинах возможного отклонения полученных результатов от нормы. Контрольные вопросы
|