Вирусология. вирус экзамен. Рекомбинация вирусов

• Название: Рекомбинация вирусов
• Анкор: Вирусология
• Дата: 21.10.2022
• Размер: 0.68 Mb.
• Имя файла: вирус экзамен.pdf
• Тип: Документы; #746310
• страница: 12 из 12

83. Интерференция вирусов и интерферон. Практическое применение интерферона.
Интерференция вирусов – процесс, где развитие одной вирусной инфекции в результате действия интерферона препятствует развитию другой инфекции.

ИНТЕРФЕРЕНЦИЯ ВИРУСОВ (лат. приставка inter- между; гибель, уничтожение + ferens, ferentis несущий, переносящий; вирусы)
— антагонистическое, или ингибиторное, действие одного вируса или его компонентов на репродукцию другого вируса и течение инфекционного процесса, вызываемого последним. Первый вирус, обусловливающий феномен, называют интерферирующим, а второй — претендующим или интерферируемым. При одновременном введении вирусов возможна двусторонняя интерференция.
Интерференция может возникнуть между штаммами одного и того же вируса (гомологичная интерференция), а также между вирусами, различными в иммунол. отношении (гетерологичная интерференция); могут интерферировать вирусы, сходные по морфол, и биохим, структуре, механизму и месту репродукции и биол, свойствам, а также вирусы, отличающиеся друг от друга по всем этим признакам. Интерферирующей активностью, а также чувствительностью к интерферирующему действию обладают практически все инфекционные вирусы. Кроме того, инфекционные вирусы могут интерферировать с онковирусами и с нек-рыми внутриклеточными микроорганизмами (напр., с возбудителями трахомы, с нек-рыми риккетсиями), причем эта интерференция может быть взаимной.
Онковирусы также способны интерферировать между собой, и эта интерференция выражается не только в ингибиции вирусной репродукции, но также в уменьшении трансформации и онкогенности.
Интерфероны— гликопротеины, вырабатываемые клетками в ответ на вирусную инфекцию и другие стимулы. Бло­кируют репродукцию вируса в других клетках и участвуют во взаимодействии клеток иммунной системы.
Интерфероны применяются для профи­лактики и лечения ряда вирусных инфекций. Их эффект определяется до­зой препарата, однако высокие дозы интерферона оказывают токсическое действие. Интерфероны широко применяются при гриппе и других острых респираторных заболеваниях. Препарат эффективен на ранних стадиях за­болевания, применяется местно. Интерфероны оказывают терапевтическое действие при гепатите В, герпесе, а также при злокачественных ново­образованиях.
Применение интерферона. Действие интерферона тем эффективнее, чем раньше он начинает синтезироваться или пос­тупать в организм извне. Поэтому его использу­ют с профилактической целью при многих ви­русных инфекциях, например гриппе, а также с лечебной целью при хронических вирусных инфекциях, таких как парентеральные гепати­ты (В, С, D), герпес, рассеянный склероз и др. Интерферон дает положительные результаты при лечении злокачественных опухолей и забо­леваний, связанных с иммунодефицитами.
Интерфероны обладают видоспецифичностью, т. е. интерферон человека менее эффек­тивен для животных и наоборот. Однако эта видоспецифичность относительна.
Получение интерферона. Получают интерферон двумя способами: а) путем инфи­цирования лейкоцитов или лимфоцитов кро­ви человека безопасным вирусом, в результате чего инфицированные клетки синтезируют интерферон, который затем выделяют и конс­труируют из него препараты интерферона; б) генно-инженерным способом — путем выра­щивания в производственных условиях рекомбинантных штаммов бактерий, способных продуцировать интерферон. Обычно используют рекомбинантные штаммы псевдомонад, кишечной палочки со встроенными в их ДНК генами интерферона. Интерферон, получен­ный генно- инженерным способом, носит на­звание рекомбинантного. В нашей стране рекомбинантный интерферон получил офици­альное название «Реаферон». Производство этого препарата во многом эффективнее и дешевле, чем лейкоцитарного.
Рекомбинантный интерферон нашел ши­рокое применение в медицине как профилак­тическое и лечебное средство при вирусных инфекциях, новообразованиях и при иммунодефицитах.
84. Принцип лабораторной диагностики вирусных инфекций.
С целью диагностики вирусных инфекций применяются следующие методы:
Ø Вирусоскопический – обнаружение в исследуемом материале вирусов с помощью световой (крупные вирусы, внутриклеточные включения вирусов), люминесцентной и электронной микроскопии;
Ø Вирусологический – выделение вирусов из исследуемого материала с последующей их идентификацией (установление вида и типа вируса посредством серологических реакций);
Ø Серологический – обнаружение в исследуемом материале антигенов вирусов или вирусоспецифических антител;
Ø Биологический – заражение вируссодержащим материалом лабораторных животных;
Ø Молекулярно-биологический – выявление в исследуемом материале нуклеиновых кислот вирусов (ПЦР, ДНК-зонды);
Ø Экспресс-методы – выявление антигенов вирусов в короткие сроки (РИФ);
Этапы вирусологического метода исследования:
1. Взятие материала (выбор материала определяется клиническими признаками заболевания, местом размножения вируса в организме и путями его выделения), транспортировка в лабораторию и подготовка к исследованию (для подавления сопутствующей бактериальной флоры обрабатывают антибиотиками).
2. Заражение исследуемым материалом чувствительной модели. Вирусы в отличии от бактерий не растут на питательных средах, т.к. являются абсолютными (облигатными) паразитами, поэтому для их культивирования применяются особые модели:
Ø в организме восприимчивых животных;
Ø в куриных эмбрионах (овокультуры);
Ø в культуре клеток.
3. Культивирование вируса в зараженной модели при стандартных условиях (оптимальная температура, продолжительность культивирования).
4. Индикация (обнаружение) вируса в зараженной модели.
5. Идентификация выделенного вируса в серологических реакциях.
Достоинство вирусологического метода – 100% достоверность.
Культивирование вирусов в организме чувствительных животных – на первом этапе развития вирусологии был единственным методом, доказывающим наличие фильтрующихся агентов в исследуемом материале.
Требования, предъявляемые к лабораторным животным:
Ø животное должно быть чувствительным к данному вирусу;
Ø использование новорожденных/молодых особей;
Ø использование инбридных (беспородных) животных/гнотобионтов (выращены в безмикробной среде);
Ø использование здоровых животных одной линии (одного пола, возраста, веса, содержащихся в одинаковых условиях).
Способ заражения животных определяется тропизмом вируса (способностью репродуцироваться в определенных типах клеток):
Ø нейротропен (например, вирус бешенства) – вводится интрацеребрально;
Ø пневмотропен (например, РС-вирусы) – интраназально;
Ø дерматропен (например, вирус натуральной оспы) – внутрикожно;
Ø пантропен – внутривенно/внутрибрюшинно.

Методы индикации вируса в организме лабораторного животного:
1) клинические симптомы заболевания;
2) гибель животного;
3) патоморфологические изменения органов при вскрытии.
Достоинства – выделение тех вирусов, которые не культивируются в куриных эмбрионах и культурах клеток.
Недостатки – контаминация животных посторонними микроорганизмами.
Культивирование вирусов методом овокультур – заражение вирусами куриных эмбрионов.
Требования, предъявляемые к куриным эмбрионам:
Ø должны быть из эпидемиологически благополучных хозяйств;
Ø скорлупа должна быть чистой, непигментированной, без механических повреждений;
Ø возраст – 5-12 дней (недостаточно противовирусных ингибиторов).
Способы заражения куриных эмбрионов:
Ø закрытый (прокол иглой под контролем овоскопа);
Ø открытый (с удалением части скорлупы).
Исследуемый материал вводят в аллантоисную и амниотические полости, хорион-аллантоисную оболочку и желточный мешок.
Перед заражением скорлупу над воздушной камерой обрабатывают 70% этиловым спиртом и фломбируют (обжигают на пламени).
После заражения отверстие в скорлупе заливают расплавленным парафином. Инкубируют при 35-370С ≈ 48 часов.
Методы индикации вируса в куриных эмбрионах:
1) результаты овоскопии – отсутствие подвижности эмбриона, слабая инъецированность сосудов кровью и отсутствие их пульсации;
2) паталогоанатомические изменения на хорион-аллантоисной оболочке – отечность, кровоизлияния, наличие оспинок (узелков);
3) отставание эмбриона в росте и развитии, пороки развития, гибель;
4) положительная реакция гемагглютинации (РГА) – через 5-10 минут при смешивании аллантоисной жидкости и суспензии эритроцитов (кур, гусей, уток, морских свинок и других животных) на дне лунки полистеролового планшета образуется осадок в виде «перевернутого зонтика» вследствие склеивания эритроцитов под действием вируса (отрицательная РГА – эритроциты не склеиваются и выпадают в осадок в виде «пуговки»).
Достоинства – высокая чувствительность к большому спектру вирусов.
Недостатки – обнаружение вируса только после вскрытия эмбриона.