Вирусология. вирус экзамен. Рекомбинация вирусов
 Скачать 0.68 Mb.
|
|
23. Цель и методы использования лаб. Жив. В вирусологии. Используют: 1)для обнаружения вируса в ПМ 2)первичного выделения вируса из ПМ 3)накопления вирусной массы 4)поддержания вируса в лаборатории в активном сост. 5)титровании вируса 6)в качестве тест-объекта в РН 6)получение гипериммунных сывороток. Используемые животные: белые мыши (бешенство, ящур), белые крысы (грипп свиней, б. Ауески), морские свинки (бешенство, ящур, чума плотоядных). Кролики (бешенство, миксомы кроликов). Требования к лабораторным животным - животное должно быть чувствительным к данному вирусу; возраст его имеет большое значение для культивирования многих вирусов. Большинство вирусов лучше размножается в организме молодых и даже новорожденных животных; стандартная чувствительность достигается подбором животных определенного возраста и одинаковых по массе. По чувствительности наибольшей стандартностью обладают так называемые линейные животные, полученные в результате близкородственного скрещивания в течении ряда поколений; лабораторные животные должны быть здоровы. Животные, поступающие в виварий вирусологической лаборатории, должны быть привезены из благополучного по инфекционным заболеваниям хозяйства. Их содержат на карантине и ведут клиническое наблюдение. При наличии заболевания их уничтожают. 24. Вирус везикулярной болезни свиней. Контагиозное остропротекающее вирусное заболевание. В естественных условиях ему подвержены только домашние и дикие свиньи. Болезнь регистрируют в любое время года. Возбудитель – РНК-содержащий вирус – относится к семейству пикорнавирусов, роду энтеровирусов. Вирионы шарообразной формы, размером 30-32 нм, с кубическим типом укладки капсомеров, количество которых пока не известно. Устойчивы к органическим растворителям и к колебаниям рН в широком диапозоне от 2 до 12,5. Антигенные вариабельность и активность вируса. Имеет 4 подтиповых варианта: Испания (1972), Англия (1972), Австралия (1973) и Польша (1973), между которыми существуют антигенные различия. В организме свиней вирус вызывает образование вируснейтрализующих, комплементсвязывающих и преципитирующих антител. Гемагглютинирующими свойствами не обладает. Патогенез. Источником инфекции являются больные животные, которые выделяют вирус с фекалиями, мочой. Заражение происходит при прямом контакте больных со здоровыми или через инфицированные корма и субпродукты. После местного проникновения в организм вирус размножается в клетках кожного покрова, затем он проникает в кровь, лимфу, вызывает состояние виремии. В этот период его обнаруживают в слизи ротовой полости, в легких, печени, сердечной мышце, лимфатических узлах, в головном и продолговатом мозге. В зависимости от формы течения болезни происходит образование пузырьков (везикулярная форма) или развитие нервных симптомов (нервная форма). При везикулярной форме болезни гибель животных достигает 10-60 %, при нервной форме – 60-90 %. При хроническом течении обеих форм болезни она сопровождается маловыраженными признаками без осложнений и летальность минимальная. Болезнь характеризуется острым течением, высокой температурой и образованием везикул на пятачке рыла, в области венчика, межкопытной щели и мякишей. В начале заболевания наблюдают лихорадку, угнетение, слюноотделение. Везикулы с серозным экссудатом лопаются, и кожа покрывается желтоватой фибринозной пленкой. При образовании везикул температура повышается до 42 0С. Больные животные отказываются от корма, хромают. Специфическая профилактика. После естественного переболевания свиньи приобретают иммунитет продолжительностью до двух лет. Поросята приобретают иммунитет через молозиво до 6 месяцев. Ветеринарно-санитарная оценка и мероприятия. Туши и органы, полученные от убоя больных, подозрительных по заболеванию и подозреваемых в заражении свиней, а также убитых по истечении 6 месяцев после снятия карантина, используют для приготовления вареных, варено-копченых и копчено-запеченных колбасных изделий и консервов по установленным режимам. 25. Принцип и практическое использование вв вирусологии РДП(реакция диффузной преципитации). Принцип реакции диффузной преципитации (РДП) в агаре заключается в том, что одноименные специфические антиген и антитело, помещенные на определенном расстоянии друг от друга в агаровом геле, диффундируют и образуют при встрече друг с другом преципитат в виде белых полос. В случае несоответствия антигена и антитела полосы преципитации не появляются. Для воспроизводства феномена диффузной преципитации всегда необходимы следующие ингредиенты: антигены, сыворотки, агаровый гель. Методика постановки РДП в геле состоит в том, что в слое агарового геля делают несколько углублений (лунок) и в них наливают антигены и сыворотки, так, чтобы разные компоненты были в соседних лунках. Из лунок антигены и антисыворотки начинают диффундировать в слой геля. Реакция может быть поставлена в чашках Петри или на предметных стеклах во влажной камере. Предварительный учет результатов РДП производят через 8-10ч., основной- через 24ч. И окончательный- через 48-72ч. Высушить и окрасить, что позволяет их сохранять неопределенно долго и улучшает возможность фотографировать полосы преципитации. Данная реакция характеризуется простой техникой постановки, быстрым получением ответа, нетребовательностью к чистоте компонентов и стерильной работе, минимальной потребностью в компонентах, пригодностью для работы с любыми растворимыми антигенами и возможностью документирования результата путем фотографирования. К недостаткам следует отнести ее низкую чувствительность. 26. Непрямой метод иммунофлуорисценции. В 21 вопросе 27. Вирус гепатита собак. Инфекционный гепатит собак (ИГС, болезнь Рубарта, вирусным гепатит) — высококонтагиозное заболевание, характеризующееся лихорадкой, конъюнктивитом, гастроэнтеритом, воспалительными процессами в печени и желчном пузыре; иногда наблюдаются признаки нарушения деятельности ЦНС. ИГС — одно из проявлений аденовирусной инфекции собак. Характеристика возбудителя. Вирус относится к семейству Adenoviridae, роду Mastadenovirus, виду аденовирус собак серотипа I (CAV-1). Вирионы CAV-1, как и все аденовирусы, представляют собой изометрические частицы кубического типа симметрии с диаметром вириона 70—90 нм. На вершинах икосаэдра имеются отростки (фиберы). Капсид вириона включает 252 капсомера без супаркапсидной оболочки. Капсид содержит 12 структурных белков. Имеется также белок сердцевины, связанный с вирионной ДНК. Нуклеиновая кислота вириона представлена двуспиральной линейной ДНК. Культивирование вируса. Вирус ИГС успешно культивируется и культуре клеток почки щенков собак, песцов, лисиц. (почка собаки) — цитопатогенное действие достигает максимума через 48 ч и характеризуется округлением клеток и образованием конгломератов, напоминающих гроздья винограда. В клетках обнаруживаются внутриядерные тельца-включения. Гемагглютинирующие свойства. Большинство эпизоотических штаммов вируса И ГС обладают гемагглютинирующей активностью в отношении эритроцитов морской свинки и человека. Клинические признаки. Инкубационный период болезни составляет 3—9 дней. Течение болезни может быть сверхострым, острым, хроническим и инапарантным (бессимптомным). Сверхострое течение. Наблюдают чаще у молодых собак. Смерть животных наступает без каких-либо клинических проявлений, за исключением иногда судорог перед гибелью. Острое течение. Начинается угнетением, снижением аппетита при нормальной температуре. Появляется конъюнктивит, слезоточение, светобоязнь. Признаками гепатита служит рвота с примесью желчи, жажда, болезненность при пальпации в области мечевидного отростка, кал беловатого цвета, понос, моча цвета темного пива. При желтушной форме болезни слизистые и кожные покровы имеют желтоватый оттенок. Дополнительный признак инфекционного гепатита — наличие кератита с помутнением роговицы («голубой глаз»). Появившись на второй-третий день болезни, этот признак через несколько дней исчезает. При осмотре зева видны ярко-красные увеличенные миндалины, которые мешают собаке глотать. В первые дни болезни температура тела обычно в норме, а затем повышается до 41— 41,7 °С и на таком уровне держится, как правило, до гибели животного. Болезнь длится 5—8 дней, иногда 2—3 нед и 40—50 % животных выздоравливает. Хроническое течение. Не имеет выраженных признаков болезни. Наблюдают временное снижение аппетита, исхудание, поносы, запоры, кратковременные подъемы температуры тела. Хронически больные самки часто абортируют. У взрослых животных клинические признаки имеют более стертый характер: рвота, чередование запоров и поносов, желтушность видимых слизистых оболочек, временами судороги отдельных мышц, конечностей и шеи. 28. Организм человека и животных обладает неспецифической и специфической защитой от вирусов, которая включает как гуморальные, так и клеточные факторы иммунитета. Отличие вирусов от клеточных форм патогенных микроорганизмов отразилось и на природе защитных реакций организма. Основные механизмы неспецифической и специфической защиты организма от вирусных инфекций направлены на ограничение и по давление вирусной репродукции в чувствительных к ним клетках, а не на разрушение возбудителя, как это имеет место при антибактериальном иммунитете и других его видах. Организм человека : обладает врожденной, или естественной, резистентностью ко многим вирусам — возбудителям заболеваний животных (чума собак, свиней и др.). В то же время животные невосприимчивы ко многим вирусам человека. Об этом свидетельствует и тот факт, что наряду с вирусами, вызывающими клинически выраженные формы заболеваний, существуют вирусы, которые являются возбудителями бессимптомных инфекций. Так, например, многие случаи полиомиелита, энцефалитов и Других вирусных инфекций протекают бессимптомно, что объясняется высоким уровнем естественной резистентности организма. Нарушение вирусами постоянства внутренней среды организма мобилизует прежде всего врожденные неспецифические факторы противовирусной защиты наряду с непрерывно возрастающей активностью специфического иммунитета. К неспецифическим факторам противовирусного иммунитета относятся клеточная ареактивность, сывороточные ингибиторы, лихорадочная реакция организма, фагоцитоз и интерферон. Тяжесть вирусной инфекции зависит от инфекционных свойств вируса, количества пораженных клеток, возраста и состояния макроорганизма, окружающей среды. Клеточная ареактивность объясняется отсутствием клеток, способных поддерживать репродукцию вирусов. Полагают, что это связано с подавлением первоначальных этапов взаимодействия вириона с клеткой хозяина (адсорбции или депротеинизации вириона). Термолабильные вируснейтрализующие Р- ингибиторы представляют собой липопротеиды сыворотки крови и других жидкостей организма, способные связывать вирус. Образующийся при этом комплекс вирус— (3 -ингибитор является непрочным. Он, распадается в течение 2 ч под действием трипсина. Однако в присутствии кофакторов образование данного комплекса сопровождается необратимой инактивацией вируса. Активность р-ингибиторов находится в обратной зависимости от инфекционных свойств вируса. Их содержание в крови людей непостоянно: оно колеблется в зависимости от возраста, состояния макроорганизма и т. д. Температура тела является одним из важных факторов регуляции репродукции вируса в чувствительных к нему клетках. Повышение температуры способствует задержке и подавлению репродукции вирионов, но в то же время стимулирует продукцию интерферона и специфический иммунный ответ. Вирусы вследствие своих структурных особенностей и химического состава слабо фагоцитируются макрофагами и не разрушаются их ферментами. Это указывает на соподчиненную роль макрофагов в непосредственном подавлении вирусной репродукции. Лейкоциты также не имеют существенного значения в защитных реакциях против вирусных инфекций. Однако макрофаги начинают довольно интенсивно фагоцитировать клетки, пораженные вирусами, по мере усиления их кооперации с Т-лимфоцитами. От фагоцитоза следует отличать пиноцитоз вирусов, который не носит защитного характера. Под интерференцией вирусов понимают способность одного вируса подавлять репродукцию другого вируса в клетке-хозяине. Так, описана интерференция между вирусом гриппа и вирусом энцефаломиелита лошадей, вирусом осповакцины и вирусом ящура и бешенства и т. д. Однако не всегда при смешанном заражении клетки двумя вирусами наблюдается интерференция. Некоторые вирусы могут репродуцироваться в одной клетке независимо друг от друга и даже один вирус (вирус-помощник) может стимулировать репродукцию другого. В механизме интерференции основную роль играет образование клетками интерферона — мощного ингибитора репродукции вирусов. Интерферон первоначально был получен Л. Айзексом и И. Линденманом в 1957 г. в виде экстракта из хорионаллантоисной ткани куриных эмбрионов, зараженных вирусом гриппа. Такие экстракты частично или полностью блокировали репродукцию вируса гриппа в курином эмбрионе. Интерферон является белком с молекулярной массой около 30 ООО. Он содержится в незначительном количестве в здоровом организме. Под влиянием вирусов количество интерферона резко увеличивается в различных клетках организма человека и животных. Наибольшая продукция интерферона обеспечивается лимфоцитами. Интерферон не является специфическим агентом, поскольку блокирует репродукцию разнообразных вирусов. Вместе с тем он обладает тканевой специфичностью, так как клетки разных тканей образуют неодинаковый интерферон. В естественных условиях при вирусных инфекциях образование интерферона индуцируется вирусной нуклеиновой кислотой. Искусственными индикаторами интерферона (интерфероногенами) могут быть не только вирусы, но и другие микробы, их токсины, синтетические полимеры и разные вещества. Механизм противовирусного действия интерферона заключается в нарушении трансляции вирусной иРНК рибосомами клетки хозяина и прекращении синтеза белка. Существует предположение, что репродукция вируса подавляется не самим интерфероном, а индуцируемым им клеточным белком. Интерферон препятствует также распространению вируса на соседние клетки, ограничивая тем самым вирусную инфекцию. Получают интерферон из лейкоцитов человека, клеток костного мозга. В настоящее время разрабатываются методы получения высокоактивного интерферона путем его очистки и концентрации. При помощи методов генной инженерии удалось пересадить гены интерферона из лейкоцитов в клетки культуры E.coli, в результате чего был получен штамм кишечной палочки, продуцирующей интерферон. На этой основе разрабатывается промышленное получение интерферона. Интерферон применяется для лечения и профилактики вирусных заболеваний, особенно гриппа. В конце 70-х годов было установлено, что интерферон обладает способностью ингибировать клеточную пролиферацию. Использование его для лечения некоторых злокачественных новообразований (лимфомы, остеосаркомы, острый лейкоз людей) дало обнадеживающие результаты. 29. Классификация ДНК-содержащих вирусов. ДНК-содержащие вирусы Наличие суперкапсида Размер вириона в нанометрах Типовые представители Аденовирусы Отсутствует 70-90 Аденовирусы человека 42 типов Гепаднавирусы Имеется 45-50 Вирус гепатита В Герпесвирусы Имеется 200 Вирусы простого герпеса, цитомегалии, Эпстайна-Барр Паповавирусы Отсутствует 45-55 Вирусы папилломы, полиомы Парвовирусы Отсутствует 18-26 Аденоассоциированный вирус Поксвирусы Имеется 130-240 Вирусы осповакцины 30. Вирусная диарея (ВД) крупного рогатого скота — контагиозная болезнь преимущественно молодых животных, характеризующаяся эрозивными и язвенными поражениями слизистых пищеварительного тракта, ринитом, увеличением лимфатических узлов, лейкопенией, постоянной или перемежающейся диареей. У коров возможны аборты. Впервые вирусную природу болезни установил в 1946 г. американский исследователь П. Олофсон. Болезнь широко распространена во многих странах мира, в том числе и в России. Восприимчив крупный рогатый скот, буйволы, олени, косули. Чаще заболевают животные в возрасте от 2 мес до 2 лет, иногда болеют коровы, особенно первого отела. У свиней описана бессимптомная естественная инфекция. Характеристика возбудителя. Вирус относится к семейству Flaviviridae, роду Pestivirus. Вирионы вируса представляют собой сферические частицы диаметром 40—60 нм, состоящие из нуклеокапсида кубической симметрии и наружной оболочки. Геном вируса содержит единую односпиральную линейную молекулу плюс-PHК. Устойчивость к физико-химическим воздействиям. Последовательное замораживание и оттаивание ведет к инактивации вируса. В культуральной жидкости при минус 15 °С он активен более года, в патологическом материале сохраняется более 6 мес. Быстро инактивируется при pH — 3,0, при 37 °С погибает за 5 дней, при 56 °С — за 1 ч. Вирус чувствителен к эфиру, хлороформу, трипсину. Антигенная структура. В состав вириона входит четыре структурных протеина: основной нуклеокапсидный протеин и три оболочечных гликопротеина. За индукцию вируснейтрализующих антител ответственны два гликопротеина оболочки вируса (Е0 и Е2). Антигенная вариабельность. Различные штаммы вируса различаются по вирулентности, тропизму и цитопатическому действию, но они идентичны в антигенном отношении. Обнаружена тесная антигенная связь вируса диареи с вирусом классической чумы свиней и вирусом пограничной болезни овец. Антигенная активность. В организме животных вирус индуцирует образование вируснейтрализующих, комплементсвязывающих и преципитирующих антител. Ракетным ИЭФ показано различие IgG в сыворотке плодов и телят, что указывает на то, что антитела плода не материнского, а фетального происхождения, индуцированные вирусным антигеном. Культивирование вирусов. Все штаммы вирусов по цитопатической активности подразделяют на две группы: цитопатогенные и нецитопатогенные. Вирусы диареи размножаются в первичных культурах клеток ПЭК, тестикул быка, макрофагах и лейкоцитах, а также в перевиваемых линиях клеток МДВК, ПСЭК. В последние годы для культивирования вируса чаще используют перевиваемую линию клеток эпителия коронарных сосудов теленка (КСТ). В этой культуре клеток вирус вызывает ЦПД через 48 ч и накапливается с высоким инфекционным титром (107,5—108,0 ТЦД50/мл). Нецитопатогенные вирусы в культуре клеток обнаруживают в РИФ. Некоторые штаммы вируса удалось адаптировать к КЭ после нескольких пассажей через желточный мешок. Гемагглютинирующие свойства. У вируса не установлены. Экспериментальная инфекция. Воспроизводится с характерной клинической картиной болезни на 2—6-месячных телятах при внутривенном, интраназальном, внутрибрюшинном и подкожном введении вируссодержащего материала. При заражении per os, внутривенно и подкожно коров в разные сроки стельности вирус проникает в плод, вызывая его гибель (мумификация), аборт или рождение телят с поражением глаз, нервной системы. Заражение на 40—120-й день стельности приводит к рождению инфицированных и иммунотолерантных телят, которые не продуцируют антител и длительно выделяют вирус во внешнюю среду. Нередко позднее (в 6—18-месячном возрасте) у них развивается ярко выраженная клиническая картина с гибелью животных через 1—3 нед. Имеются сообщения о возможности экспериментального заражения овец, коз, поросят и крольчат. Клинические признаки. На основании различий в клинических проявлениях вирусную диарею и болезнь слизистых оболочек крупного рогатого скота вначале рассматривали как разные болезни. Позднее была установлена идентичность возбудителей этих болезней, поэтому их считают одной инфекцией с разными клиническими проявлениями, с преимущественным развитием респираторного или диарейного синдрома. Клинические признаки болезни, тяжесть переболевания, широта распространения и летальность зависят от вирулентности вируса, чувствительности животных, наличия неблагоприятных факторов. Заболевание может протекать остро, подостро, хронически и латентно. При остром течении симптомы появляются внезапно. Наблюдаются высокая температура тела (до 42 °С), учащенное дыхание, кашель, гиперемия и отечность конъюнктивы, слизистых оболочек носа и рта. Отмечаются обильное слезотечение, слюноотделение и выделение из носа, лейкопения; через 1—5 дней после начала болезни появляется понос. Затем на слизистых оболочках, в том числе и во влагалище, появляются эрозии и язвы. Аналогичные изменения часто обнаруживают в области межкопытной щели. Животные быстро худеют. У коров снижается молочная продуктивность, отмечаются аборты. Телята от больных коров рождаются с признаками вирусной диареи: некроз легких, кожи, мозга, лихорадка, лейкопения, поражение ротовой и носовой полостей. Через 18—36 ч они гибнут при явлениях дегидратации. Хроническое течение чаще наблюдают после острой вспышки болезни. Оно характеризуется длительной диареей и кахексией, иногда абортами и появлением слабого потомства. При латентном течении симптомы болезни не выражены и о переболевании судят по наличию в организме специфических антител. Необходимо отметить, что вирус диареи оказывает сильное иммунодепрессивное действие, поражая иммунокомпетентные клетки, это резко снижает устойчивость телят и повышает тяжесть болезни, поэтому ВД часто осложняется бактериальными инфекциями. Патологоанатомические изменения. Характерные изменения обнаруживают на слизистых желудочно-кишечного тракта и верхних дыхательных путей. Эрозии и язвы находят на слизистых губ, щек, десен, на боковых поверхностях языка, на нёбе, у основания гортани, в сычуге и рубце. В тонком кишечнике отмечают изменения, характерные для катарального, фибринозно-некротического или геморрагического энтерита. У некоторых животных отмечают поражение глаз. Локализация вируса. Попав в организм, вирус диареи поступает в кровеносную и лимфатическую системы и размножается во многих органах. У больных естественно-восприимчивых животных вирусный антиген обнаруживали практически во всех органах, в клетках эпителия, моноцитов и макрофагов. Переболевшие животные длительное время остаются вирусоносителями (до 200 дней). Источники инфекции — больные и персистентно-инфицированные животные, которые выделяют вирус в окружающую среду с истечениями из носа, глаз и фекалиями, а также со слюной, мочой и спермой. У персистентно-инфицированных коров потомство всегда бывает инфицировано. Вирус обнаруживали в кишечнике новорожденных телят, которые могли заразиться внутриутробно и постнатально. Такое заражение клинически может не проявляться. Вирус выделяется со спермой как у персистентно, так и у клинически инфицированных быков. Наличие персистентно инфицированных животных поддерживает постоянные вспышки в стаде, где процент серопозитивных животных достигает более 80. Дикие животные, инфицированные вирусом, также могут быть резервуаром возбудителя. Заражение происходит воздушно-капельным, алиментарным, а также половым путем. От коров потомству возбудитель передается путем проникновения через плацентарный барьер. В результате возникает внутриутробная инфекция плода — это один из наиболее важных путей распространения ВД. Диагностика. Диагноз ставят, исходя из анализа эпизоотологических, клинических данных, патологоанатомических изменений и результатов лабораторных исследований. Решающее значение при этом имеют лабораторные исследования, так как сходную патологию могут вызвать вирусы парагриппа-3, инфекционного ринотрахеита, аденовирусной и респираторно-синтициальной инфекции, а также хламидии и другие агенты. Поэтому материал, поступивший в лабораторию, исследуют параллельно на все вышеуказанные инфекции, используя диагностические наборы, выпускаемые биологической промышленностью. Взятие и подготовка материала. В лабораторию отправляют патологический материал от больных животных, взятый в первые 2—3 дня болезни при выраженной клинической картине или от животных, убитых с диагностической целью в острой стадии заболевания. От больных животных берут смывы со слизистых оболочек носа, глаз и прямой кишки с помощью стерильного ватно-марлевого или поролонового тампона; соскобы с изъязвленных и эрозированных участков слизистых ротовой полости и носового зеркала; кровь в первые три дня заболевания (не менее чем от 10 животных) и через три недели от тех же животных (для получения парных сывороток). От животных, убитых с диагностической целью, берут кусочки легких, селезенки, слизистые носовой и ротовой полости, трахеи, кишечника, регионарные лимфатические узлы и пробы крови для вирусовыделения. Лабораторная диагностика. Индикацию вируса в патологическом материале проводят путем обнаружения вирусного антигена в мазках-отпечатках (органов и смывов). Для этой цели в РИФ используют флуоресцирующие антитела (из диагностических наборов) к вирусам: ПГ-3, ВД, ИРТ, PC, аденовирусам подгрупп 1 и 2. Иммунофлуоресценция биопсийного материала слизистых ротовой и носовой полостей пригодна для ранней прижизненной диагностики ВД. Для обнаружения вирусной нуклеиновой кислоты в смывах и фекалиях используют ДНК-зонд, ПЦР. Эти методы очень важны для выявления персистентной инфекции ВД у крупного рогатого скота. ПЦР успешно применяют для выявления вируса в пробах молока. Она оказалась в 14,6 раза чувствительнее других методов. Обнаружение вируса методом биопробы на естественно-восприимчивых животных проводят очень редко — в отдельных особенных случаях. Обычно используют проверенных на отсутствие антител к ВД телят 2—6-месячного или 4—6-дневного возраста из благополучных хозяйств. Изоляция вируса. Лабораторных животных и куриные эмбрионы для этой цели не используют. Выделяют вирус в первично- трипсинизированных культурах клеток эмбрионов крупного рогатого скота (почки, легкие, селезенка) и тестикул бычка, в которых вирус вызывает характерные цитопатические изменения: мелкозернистую инфильтрацию клеток, их округление и отторжение от стекла через 2—5 дней после заражения. Из перевиваемых культур клеток более эффективно использовать перевиваемую линию эпителия коронарных сосудов теленка (КСТ), в которой цитопатические изменения появляются почти одновременно во всех клетках монослоя. Изолят считается выделенным в том случае, если он вызывает стабильное, однотипное ЦПД не менее чем в трех последовательных пассажах. Для обнаружения не цитопатогенных штаммов ВД проводят четвертый пассаж на культуре клеток, выращенной на покровных стеклах, с последующей постановкой РИФ. Некоторые исследователи рекомендуют для выявления таких штаммов использовать феномен экзальтации вируса ньюкаслской болезни в присутствии вируса диареи крупного рогатого скота. Сущность метода сводится к появлению цитопатических изменений в культуре клеток крупного рогатого скота при совместном культивировании вирусов ньюкаслской болезни и диареи. В контрольных культурах, где культивируют только вирус ньюкаслской болезни, изменений нет. При наличии ЦПД в культурах клеток, зараженных смешанным изолятом, и положительной РИФ проводят окончательную идентификацию вируса. Идентификацию вируса проводят в серологических реакциях: РИФ, ИФА, РДП (менее чувствительна), PH. Кроме того, рекомендуют применять ПЦР. Новые изоляты возбудителя ВД, не обладающие цитопатогенной активностью, могут быть идентифицированы при помощи специфической сыворотки к вирусу диареи, используемой для индикации подобных штаммов, по подавлению феномена экзальтации вируса НБ. Ретроспективная диагностика. Проводят ее с целью обнаружения специфических антител в сыворотке крови переболевших ВД животных в РНГА, ИФА, PH, (РСК и РДП — не нашли широкого применения). При этом используют парные сыворотки крови, взятые в первые 2—3 сут болезни и через 3—4 нед. Диагностическое значение имеют обнаружение четырехкратного и большего нарастания титра антител во второй сыворотке переболевшего животного и увеличение количества серопозитивных проб. Исследуют сыворотки не менее чем от 10—15 животных. Дифференциальная диагностика. На основании эпизоотологических, клинических данных и патологоанатомических изменений точный диагноз поставить трудно из-за сходства вирусной диареи с парагриппом-3, аденовирусной инфекцией, инфекционным ринотрахеитом, респираторно-синтициальной инфекцией, хламидиозом, ящуром, паратуберкулезным энтеритом, злокачественной катаральной горячкой и другими заболеваниями, поражающими респираторно-кишечный тракт животных. Необходимо отметить, что ВД ассоциирует с другими инфекционными болезнями, такими как ПГ-3, аденоинфекция, хламидиоз, пастереллез и др. Иммунитет и специфическая профилактика. Вопросы иммунитета при ВД изучены недостаточно. Показано, что переболевшие животные сохраняют невосприимчивость к повторному заражению 2—3 года. Однако у них образуется нестерильный иммунитет. Такие животные длительное время являются вирусоносителями. Телята пассивный иммунитет к ВД приобретают через молозиво матери; продолжительность колострального иммунитета составляет 4—6 нед. Образование иммунитета сопровождается повышением уровня вируснейтрализующих и других антител. Вируснейтрализующие антитела образуются и у плода при заражении матери во второй половине стельности. В нашей стране применяют инактивированную и живую вакцины. Существуют различные рекомендации их применения. Сроки и кратность прививок определяют в зависимости от вакцин, направления хозяйства, возраста животных и других условий. Для первичной иммунизации стад, в которых вакцины раньше не применяли, желательно использовать инактивированные, безвредные для стельных коров и молодняка вакцины. В отношении живых вакцин имеются весьма разноречивые данные. Они обладают иммунодепрессивными свойствами, потенциально могут вызвать поствакцинальную болезнь, неблагоприятно воздействовать на плод. У коров, вакцинированных живой вакциной на ранней стадии беременности, могут родиться персистентно инфицированные телята. Все это создает опасность реверсии вируса и препятствует проведению диагностических мероприятий. Применение живых вакцин, видимо, целесообразно в крупных откормочных комплексах. Как живые, так и инактивированные вакцины для профилактики ВД постоянно совершенствуются. Большие перспективы представляют генно-инженерные субъединичные вакцины. В большинстве стран, в том числе и в России, вакцины против ВД используют в 2-, 3- и поливалентных сочетаниях с препаратами против ПГ-3, ИРТ, РЕО, адено — и PC-инфекции, хламидиоза, лептоспироза, пастереллеза. Профилактика инфекции заключается в индикации возбудителя болезни, удалении животных с персистирующей инфекцией и вакцинации иммунокомпетентного поголовья. |