Медицинская микробиология и вирусология ч1 (1). Т. П. Гажеева, Т. Х. Гордеева, Е. И. Хорошавина Медицинская микробиология и вирусология Часть 1
 Скачать 5.4 Mb.
|
ЗАНЯТИЕ 9. Методы идентификации микроорганизмов. Ферменты бактерий.Цель занятия: Ознакомиться с биохимическими свойствами микроорганизмов, изучить методы идентификации бактерий по их ферментативной активности. Материалы и оборудование: Посевы предыдущего занятия, набор красителей для окраски по Граму, среда Эндо, среда Гисса, МПБ, предметные стекла, фильтровальная бумага, бактериальные петли, спиртовки, спички. Демонстрационный материал: Рост кишечной палочки на среде Эндо, среде Левина, на среде Гисса, рост бактерий, разжижающих желатину, обнаружение сероводорода, индола на МПБ. План занятия Основные группы ферментов бактерий. Значение ферментов для жизнедеятельности бактерий и их идентификации. Идентификация бактериальной культуры по биохимическим признакам. Методы изучения ферментативной активности микроорганизмов: а) сахаролитические свойства; б) протеолитические свойства. Задание: Учесть результаты предыдущего занятия. Продолжить выделение чистой культуры аэробов (третий этап): сделать мазок из посева на скошенном агаре, окрасить по Граму, изучить под микроскопом, отметив однородность выделенной культуры; Изучить сахаролитические и протеолитические свойства полученной чистой культуры. Методические рекомендации к практическому занятию: Ферменты бактерий Все биохимические процессы в клетке микроорганизмов, связанные с метаболизмом, ростом и размножением, совершаются при участии ферментов (энзимов). Ферменты представляют собой белки с высокой молекулярной массой, специфически катализирующие химические реакции в клетке. Классификация ферментов основана на типах реакций, которые они катализируют. Все ферменты делятся на шесть классов: 1). Оксидоредуктазы - ферменты переноса электронов. Эти ферменты катализируют окислительно-восстановительные реакции. К ним относятся дегидрогеназы (НАД, НАДФ, ФАД), каталаза, цитохромы. 2). Трансферазы - ферменты переноса групп между молекулами от одних соединений к другим. К ним относятся ацетилтрансфераза, фосфотрансфераза, аминотрансфераза. 3). Гидролазы - ферменты переноса функциональных групп с участием воды. К этому классу ферментов относятся пептидгидролазы, глюкозидаза, амилазы, эстеразы, липаза, фосфатаза. 4). Лиазы - ферменты, отщепляющие или присоединяющие без участия воды различные соединения с двойной связью. К этим ферментам относятся пируватдекарбоксилаза, альдолаза. 5). Изомеразы - ферменты, переносящие группы внутри молекул с образованием изомерных форм. К этим ферментам относятся триизофосфатизомераза, глюкозофосфатизомераза. 6). Лигазы (синтетазы) - ферменты, объединяющие две молекулы с одновременным разрывом фосфатных связей с использованием энергии АТФ. К лигазам относятся ферменты, катализирующие синтез сложных органических веществ из простых соединений (аспарагинсинтетаза, кокарбоксилазы). Активность ферментов измеряют в международных единицах (ME). 1 ME соответствует количеству ферментов, превращающему один микромоль субстрата в 1 минуту в стандартных условиях. У бактерий различают эндоферменты и экзоферменты. Эндоферменты находятся внутри бактериальной клетки, катализируют внутриклеточные процессы обмена веществ. Экзоферменты выделяются во внешнюю среду и выполняют функцию расщепления сложных питательных веществ. Ферменты агрессии. У патогенных бактерий имеется особая группа экзоферментов, которые называются ферментами агрессии. Они выполняют функции проникновения и распространения бактерий в тканях организма хозяина и ослабления его защитных свойств. К ферментам агрессии относятся: гиалуронидаза, нейраминидаза, коллагеназа, протеазы, фибринолизин, гемолизин, лейкоцидин. Конститутивные и индуцибельные ферменты. Ферменты, которые синтезируются клеткой с постоянной скоростью, независимо от наличия субстрата в среде называются конститутивными. Индуцибельные (адаптивные) ферменты образуются только в присутствии соответствующего субстрата в среде. Например, фермент бета-галактозидаза начинает синтезироваться только при добавлении в питательную среду углевода лактозы, которую этот фермент расщепляет с образованием глюкозы и галактозы. |