технология лек 2. Учебник соответствует учебной программе и предназначен для студентов фармацевтических высших учебных заведений и факультетов
 Скачать 5.32 Mb.
|
|
Дексаметазон (Dexamethasonum). Характерной особенностью химического строения дексаметазона является наличие в его молекуле атома фтора. По действию на организм близок к другим глюкокортикостероидам, но более активен, оказывает сильное противовоспалительное и антиаллергическое действие. По эффективности 0,5 мг дексаметазона соответствуют примерно 3,5 мг преднизолона или 17,5 мг кортизона, таким образом, он в 7 раз активнее преднизолона и в 35 раз активнее кортизона. Показания к применению в основном такие же, как и для других аналогичных препаратов: ревматоидный артрит, дерматозы, лимфогранулематоз, нефротический синдром. Суточная доза для взрослых равна 0,002—0,003 г. Выпускают в таблетках по 0,0005 г. Хранят в сухом, защищенном от света месте. Список Б. Для применения в офтальмологической практике за рубежом выпускаются глазные капли: дексаметазона 0,1% глазная суспензия (во флаконах по 10 мл); офтан-дексаметазон, содержащий в 1 мл 1 мг (0,1%) дексаметазона 21-фосфата. Эти капли применяются при кератитах, иритах, а также для уменьшения воспалительных явлений после глазных операций, травм. Глазные-ушные капли «Дексона» («Dexona») содержат 0,1% раствор дексаметазона натрия фосфата и 0,5% раствор неомицина сульфата. Выпускаются во флаконах-капельницах по 5 мл. Приме- няют при кератитах, блефаритах, воспалении среднего уха и др. Синафлан (Synaflanum). Белый с кремовым оттенком кристаллический порошок, практически нерастворим в воде, растворим в спирте. Близок по строению к преднизолону, декса- метазону, но содержит в молекуле два атома фтора — в положении С 6 и С 9 . Является действующим началом мази синафлана, аналогичной по действующему началу и лечебному эффекту мази «Синалар». Мазь синафлана 0,025% (Unguentum Synaflani 0,025%). Мазь светло-желтого цвета. Применяют при местных воспалительных заболеваниях кожи и слизистых оболочек, экземе, ограниченном псориазе и др. Выпускается в алюминиевых тубах по 10 мл или 15 г. Хранят в сухом, прохладном месте. Список Б. 259 Глава 12. ПРЕПАРАТЫ ФЕРМЕНТОВ Ферменты входят в состав всех клеток и тканей живых организмов и регулируют течение процессов, лежащих в основе жизнедеятельности организма. Разнообразие этих процессов свидетельствует о существовании большого количества ферментов. В настоящее время известно около 2000 ферментов, около 100 из них получены в кристаллическом состоянии. Как и все белки, ферменты являются высокомолекулярными соединениями от 10 000 до 1 000 000. Они обладают несложной структурой, весьма чувствительны к изменениям рН среды и температуры. Для каждого фермента существует оптимум значения рН, при котором скорость катализируемой реакции максимальна. Так, активность трипсина имеет оптимум при значении рН 7,8, панкреатической амилазы — при 6,7—7,2. Отклонения рН в ту или другую сторону ведет к снижению скорости ферментативной реакции. Ферменты, оптимальное действие которых находится в нейтральной или щелочной среде, полностью инактивируются кислым содержанием желудка. Оптимальное значение температуры для большинства ферментов — 20—40 °С. Повышенная температура до 40—50 °С, как правило, приводит к падению ферментативной активности, а иногда и к полной денатурации белков. В соответствии с современной классификацией все ферменты де- лят на шесть основных классов по типу катализируемой ими реакции. 1. Оксидоредуктазы. 2. Трансферазы. 3. Гидролазы. 4. Лиазы. 5. Изомеразы. 6. Лигазы (синтетазы). Большая часть выпускаемых промышленностью ферментов, в том числе и для здравоохранения, относится к классу гидролаз. Различают ферменты: — простые белки, которые при гидролизе дают только аминокислоты; — ферменты-протеины, используемые в качестве лекарственного и диагностического сырья (пепсин, трипсин, папаин, уреаза и др.). Сложные ферменты, как правило, имеют простетическую группу (кофермент) небелковой природы, связанную с белком различной степенью прочности. Роль коферментов в общем меха- низме биокатализа настолько важна, что их следует рассматривать как отдельную группу БАВ с разными механизмами действия. Поскольку очень трудно получить ферменты в гомогенном состоянии, а существующие препараты содержат, кроме основной, 260 и сопутствующие энзиматические активности, сложилась практика классифицировать промышленные ферменты по основному, преобладающему компоненту: — амилотические; — липолитические; — целлюлозолитические; — протеолитические и др. Наиболее развита ферментативная промышленность в США, Японии, Великобритании, Германии, Дании, Нидерландах и Франции. Ежегодный прирост объемов производства ферментов за последние 25 лет составлял от 5 до 15%. В отечественной биотехнологической практике существует определенная система названия ферментативных препаратов, отражающая основной фермент, источник его получения и степень очистки. Наименование конкретного препарата состоит из сокращенного названия микроорганизма-продуцента и окончания -ин. Например, амилолитические ферментативные препараты, получаемые из культур микроорганизмов Aspergiillus oryzae и Bacillus subtillis, называют соответственно: амилориз-ин (амилоризин) и амил-о-субтил-ин (амилосубтилин). Далее следует индекс, обозначающий способ выращивания микроорганизма и степень очистки ферментов от сопутствующих веществ. При по- верхностном способе культивирования за названием ставят — П, а при глубинном — Г. Для промышленного производства лекарственных препаратов представляют интерес сырьевые источники, которые доступны и содержат ферменты в количествах, обеспечивающих получение высокой активности и выхода препарата. В основном получают ферменты из сырья животного и растительного происхождения, а также с помощью микроорганизмов. 12.1. Производство ферментов из сырья животного происхождения Органы и ткани животного происхождения до настоящего времени являются важным источником сырья для производства ферментов. При этом используются отходы мясоперерабатыва- ющей промышленности (поджелудочная железа, слизистые оболочки кишечника свиней, сычуги крупного рогатого скота, молочных телят, семенники половозрелых животных). Накоплен значительный опыт по их переработке, разработаны рациональные технологические схемы получения нескольких препаратов из одного сырьевого источника. Однако использование сырья животного происхождения сопряжено с рядом трудностей, обус- ловленных переработкой больших количеств тканевых материалов убойного скота для получения необходимого количества ферментов, создание специальных условий для его хранения. 261 12.1.1. Препараты ферментов слизистой оболочки желудка Пепсин (Pepsinum) — препарат, содержащий протеолитический фермент. Сырьем для получения пепсина служит слизистая оболочка желудка свиней, где он образуется в виде профермента — пепсиногена. Пепсиноген активируется кислотой хлороводородной и аутокаталитически, т. е. с помощью образовавшихся молекул пепсина. При этом от пепсиногена (м.м. 40 000) сначала отщепляется остаточный полипептид, а затем ингибитор пепсина. Образуется активный пепсин (м.м. 34 000). Пепсин относится к карбопротеиназам, содержащих остатки дикарбоновых аминокис- лот в активном центре, с оптимумом значения рН 1,5—2,5. При выделении протеолитического фермента основной задачей является получение его в активной форме. Поэтому экстракцию сочетают с автолизом. Измельченные ткани заливают водой, подкисленной кислотой хлористоводородной до значения рН 1,9—2,3. Соотношение сырья и экстрагента 10:1. Настаивание проводят при температуре около 40 °С, перемешивая на протяжении 8 ч и повторно — 24 ч. Лизаты сливают, отделяют от верхнего слоя жира, объединяют, процеживают. Ферментную массу выделяют высаливанием, для чего к лизату (значение рН 1,9—2,3) при непрерывном перемешивании добавляют 20—25% раствор натрия хлорида. Пепсин, выделившийся из раствора, всплывает на поверхность. Его отделяют, сушат в вакуум-сушильном шкафу при температуре 35—40 °С, измельчают в фарфоровой шаровой мельнице и просеивают. Стандартизуют препарат по протеолитической активности (переваривание белка куриного яйца): 10 г протертого белка в присутствии 0,1 г препарата в стандартных условиях должны полностью растворяться через 3— 4 ч, образуя опалесцирующий раствор. После определения биологической активности препарат смешивают с сахарной пудрой. Он представляет собой слегка желтоватый порошок, сладкий на вкус, со слабым своеобразным запахом. Применяют при расстройствах пищеварения (гипо- и анацид- ный гастрит, диспепсия). Назначают внутрь в виде раствора в комбинации с ацидином (бетаина гидрохлорид). Хранят в хорошо укупоренных банках в прохладном (2—15 °С), защищенном от света месте. Ацидин-пепсин (Acidin-pepsinum). Выпускают в таблетках по 0,5 и 0,25 г, содержащих одну часть пепсина и 4 части бетаина гидрохлорида. При введении в желудок бетаина гидрохлорид легко гидролизуется с выделением свободной кислоты хлороводородной. Абомин (Abominum). Препарат, содержащий сумму протеолитических ферментов, получают из слизистой оболочки желудка телят и ягнят молочного возраста. Он представляет собой аморфный порошок со специфическим запахом, соленый на вкус (содержит примесь натрия хлорида). 262 Выпускают в форме таблеток по 0,2 г, с содержанием в одной таблетке 50 000 ЕД. Сок желудочный натуральный (Succus gastricus naturalis). Получают по методу, предложенному И. П. Павловым, через фистулу желудка при мнимом кормлении собак или других животных (лошадей). Препарат представляет собой бесцветную прозрачную жидкость кислого вкуса, консервированную кислотой салициловой (0,03—0,04%). Он содержит все ферменты желудочного сока, 0,45—0,51% свободной кислоты хлороводород- ной, значение рН 0,8—1,2. Применяют при недостаточной функции желез желудка. Выпускают во флаконах по 100 мл. Хранят в защищенном от света месте, при температуре от 2 до 10 °С. 12.1.2. Препараты ферментов поджелудочной железы Панкреатин (Pancreatinum). Препарат содержит ферменты поджелудочной железы, главным образом трипсин и амилазу, и в незначительном количестве липазу. Сырьем для получения пан- креатина служит поджелудочная железа свиней или рогатого скота. В поджелудочной железе протеолитические ферменты образуются в виде проферментов: трипсиногена, химотрипсиноге- на. Активирование этих ферментов происходит гидролизом того фрагмента их полипептидной цепи, который маскирует активный центр протеиназ. При получении панкреатина активирование проферментов поджелудочной железы осуществляют в экстракте в щелочной среде, в присутствии ионов кальция и с затравкой (панкреатин). Ткани поджелудочной железы убойных животных измельчают на волчках и заливают водой, подкисленной кислотой уксусной ледяной 5 мл на 1 л воды. Настаивание проводят в реакторе с мешалкой 4 ч при температуре 10 °С. Экстракт отделяют центрифугированием или процеживанием с последующим прессованием остатка. Для активирования проферментов в экстракте создают среду со значением рН 8,1; добавляют кальция хлорид, чтобы приготовить 0,05 М раствор, и затравку — панкре- атин. Настаивают 24 ч при температуре 5 °С. Затем экстракт подкисляют до значения рН 6,0 и в изоэлектрической точке осаждают сопутствующие вещества. Осадок отделяют, обезжири- вают ацетоном и высушивают в вакуум-сушильном шкафу при температуре не выше 40 °С. Измельчают в шаровой мельнице. Стандартизуют панкреатин по протеолитической активности — способности переваривать белок казеин в слабощелочной среде. Панкреатин должен содержать в 1 г 25—33 ЕД. Применяют при хронических панкреатитах с недостаточной функцией поджелудочной железы. 263 Препарат выпускают в порошке и в таблетках, покрытых оболочками, растворимыми в кишечнике. Хранят в хорошо укупоренных банках, в сухом, прохладном месте. 12.1.3. Препараты ферментов поджелудочной железы крупного рогатого скота К препаратам ферментов поджелудочной железы крупного рогатого скота относятся: — дезоксирибонуклеазы (ДНКазы); — рибонуклеазы (РНКазы); — трипсин; — химотрипсин; — ингибитор нуклеаз — пантрипсина и инсулина. Технология получения этих препаратов разработана лабораторией органопрепаратов Всесоюзного научно-исследова- тельского института мясной промышленности. Принцип производства заключается в том, что измельченную поджелудочную железу подвергают автолизу, для чего смешивают ее с половинным количеством воды и оставляют на 18 ч при температуре 12 °С. Затем в реакторе с мешалкой проводят экстракцию методом бисмацерации водой, подкисленной кислотой орто- фосфорной до значения рН 2,0—2,5, при температуре не выше 5 °С. Первая мацерация проводится с двойным количеством воды в течение 16 ч, вторая — с однократным, 1 ч. Экстракты отделяют от жмыха центрифугированием и объединяют. Жмых используют для получения инсулина, а из экстракта высаливают ферменты различными концентрациями аммония сульфата (ДНКазу и РНКазу), добавляя кристаллический аммония сульфат до определения степени насыщения при перемешивании и охлаждении. Фильтрат используют для получения химотрипсина, трипсина и пантрипина. Высол растворяют в воде и в водном растворе осаждают сопутствующие вещества добавлением аммония сульфата. Осадок отбрасывают, а к фильтрату добавляют 5 н растров натрия гидроксида до значения рН 4,5 и высаливают ДНКазу, медленно добавляя насыщенный раствор аммония сульфата до степени насыщения 0,4. Осадок ДНКазы отделяют и подвергают даль- нейшей очистке. Из фильтрата осаждают РНКазу высаливанием аммония сульфатом до степени насыщения 0,8. Высол, содержащий аморфную РНКазу, отстаивают при 4—5 °С в течение 40—48 ч, жидкость сифонируют, а осадок отделяют на нутч- фильтре или центрифугированием. Полученную РНКазу очищают. Из фильтрата, содержащего комплекс ферментов, аммония сульфатом при степени насыщения 0,7 высаливают химотрипсин, трипсин и пантрипсин. Из смеси ферментов получают неактивный химотрипсиноген. Для этого осадок растворяют в воде, подкисленной кислотой серной 264 до значения рН 3,0, при температуре не выше 5 °С и медленно добавляют при перемешивании раствор аммония сульфата. Затем раствор подщелачивают 5 н раствором натрия гидроксида до значения рН 5,0 и выдерживают при комнатной температуре до полного осаждения кристаллического химотрипсиногена. Из фильтрата и промывных вод, полученных после отделения химотрипсиногена, выделяют трипсиноген высаливанием аммония сульфатом при подкислении 5 н серной кислотой до значения рН 3,0. Фильтрат, оставшийся после выделения трипсина, подкисляют кислотой хлороводородной до значения рН 2,5 при температуре 5 °С. Из подкисленного фильтрата добавлением кристаллического магния сульфата высаливают пантрипин совместно с балластными белками. Последние удаляют коагуляцией при нагревании раствора до температуры 90 °С в течение 1 мин и быстром охлаждении до температуры 20—25 °С. Осадок балластных веществ отделяют фильтрованием. К фильтрату, объединенному с промывными водами, медленно при перемешивании добавляют кристаллический аммония сульфат и отстаивают в течение 12 ч при комнатной температуре. В результате образуются два осадка: аморфный и кристаллический. Темный аморфный осадок пантри- пина отделяют от белого кристаллического осадка сопутствующих веществ. Осадок пантрипина растворяют в воде и диализируют. По окончании диализа раствор фильтруют, стандартизуют по сухому остатку и силе ингибирующего действия пантрипина. Проводят стерилизующую фильтрацию, разливают во флаконы и подвергают сублимационной сушке. Очистка индивидуальных ферментов продолжается несколько дней и состоит из ряда многократно повторяющихся операций. Проводят трехкратное высаливание ферментов аммония сульфатом до различной степени насыщения, изменения значения рН. Каждый раз из фильтрата предварительно удаляют сопутству- ющие вещества аммония сульфатом меньшей концентрации, чем применяется при высаливании ферментов, затем осуществляют пятикратную перекристаллизацию ферментов. Химотрипсиноген и трипсиноген активируют до образования химотрипсина и трипсина в соответствующих буферных растворах при пониженной температуре и при добавлении кристаллика трипсина. Обессоливают ферменты диализом через целлофановую пленку. Сульфат-ионы осаждают бария хлоридом, а избыток иона бария удаляют на катионах КУ-2. В обессоленных растворах ферментов устанавливают необходимое значение рН, определяют концентра- цию сухого вещества и разбавляют водой очищенной в соответствии с конечным содержанием сухого препарата во флаконах. Разбавленные растворы фильтруют через стерилизую- щие фильтры, разливают во флаконы и подвергают сублима- ционной сушке. 265 Дезоксирибонуклеаза (Desoxyribonucleasa). Представляет собой лиофилизированный белый порошок, легко растворимый в воде; значение рН 0,1% водного раствора составляет 3,5—5,5. В водных растворах фермент нестоек (срок годности 12 ч), термо- лабилен, инактивируется при температуре 55 °С. Активность определяют по образованию кислоторастворимых продуктов, освобождаемых препаратом из ДНК в определенных условиях и выражают в единицах активности ЕА. В 1 мг препарата должно содержаться не менее 1700 ЕА. Применяется как средство, вызывающее деполимеризацию и разжижение гноя и задерживающее развитие вирусов, содержащих ДНК (герпеса, аденовирусов и др.). Назначают в виде аэрозолей для ингаляций. Выпускают в герметически укупоренных флаконах по 5, 10, 25 и 50 мг. Хранят в сухом, защищенном от света месте, при температуре не выше 20 °С. Рибонуклеаза аморфная (Ribonucleasum amorphum). Лиофилизированный порошок белого цвета, легко растворимый в воде. Активность определяют биологическим методом по количеству кислоторастворимых веществ, освобождаемых препаратом в результате гидролиза кислоты рибонуклеиновой в определенных условиях. 1 ЕА соответствует 1 мг препарата. Применяется местно в виде аэрозолей для ингаляций, внутри- плеврально, внутримышечно при заболеваниях, сопровожда- ющихся гнойно-некротическими процессами. |