В. Н. Сайтаниди Рецензент членкорреспондент расхн в. Ф. Красота Петухов В. Л. и др. П31 Ветеринарная генетика В. Л. Петухов, А. И. Жигачев, Г. А. Назарова. 2е изд., перераб и доп. М. Колос, 1996. 384 с ил. Учебники

• Название: В. Н. Сайтаниди Рецензент членкорреспондент расхн в. Ф. Красота Петухов В. Л. и др. П31 Ветеринарная генетика В. Л. Петухов, А. И. Жигачев, Г. А. Назарова. 2е изд., перераб и доп. М. Колос, 1996. 384 с ил. Учебники
• Анкор: petuhov_vet_genetika.doc
• Дата: 17.05.2017
• Размер: 5.3 Mb.
• Имя файла: petuhov_vet_genetika.doc
• Тип: Учебники; #7754
• страница: 18 из 45

Глава 11 ГЕНЕТИЧЕСКИЕ ОСНОВЫ ОНТОГЕНЕЗА

Онтогенез — непрерывный процесс количественных и качествен­ных изменений, происходящих в организме в течение всей жизни при постоянном взаимодействии генотипа и условий среды.

Термины «онтогенез» и «филогенез» ввел в биологию немец­кий зоолог Е. Геккель. Он же сформулировал и обосновал (1866) биогенетический закон. Термин «онтогенез* означает процесс индивидуального развития особи, «филогенез* — история разви­тия вида. Согласно биогенетическому закону индивидуальное развитие особи (онтогенез) является как бы кратким повторени­ем (рекапитуляцией) филогенеза. А. Н. Северцов считает, что под филогенезом следует понимать ряд исторически отобранных онтогенезов. Филогенез реализуется в онтогенезе через наследст­венность, составляет основу онтогенеза и направляет онтогенез по пути, пройденному предками. В зиготе (оплодотворенной яйцеклетке) содержится записанная в структуре молекул ДНК генетическая информация о развитии будущего организма. В процессе онтогенеза происходит реализация генетической ин­формации в определенных условиях среды.

Онтогенез животных включает два основных взаимосвязанных процесса — рост и развитие. Под ростом понимают процесс увели­чения размеров организма, его массы, происходящий за счет на­копления в нем активных, главным образом белковых, веществ. В основе роста лежит увеличение числа и размеров клеток и некле­точных образований. Под развитием понимают качественные из­менения — процессы усложнения структуры организма, специали­зацию, дифференциацию и интеграцию его органов и тканей.

Одна из основных проблем биологии — выяснение вопроса: каким образом из одной-единственной клетки возникает множе­ство разнообразных типов клеток, значительно различающихся между собой строением, функцией, и как в процессе онтогенеза идет становление признаков и свойств организма? Проблема изучения механизма генетического контроля онтогенеза имеет не только теоретическое, но и практическое значение для успешно­го решения таких вопросов, как селекция животных и растений, профилактика и лечение генетически обусловленных болезней у животных и человека.

178

РАСКРЫТИЕ СЛОЖНОЙ СТРУКТУРЫ ГЕНА

В соответствии с представлениями классической генетики долгое время считалось, что ген — неделимая единица функции, рекомбинации и мутирования. Гены представлялись как бусин­ки, механически соединенные каким-то материалом в хромосо­ме. Вопрос о пересмотре представлений о гене как неделимой единице впервые был поставлен в 1929—1930 гг. А. С. Серебров-ским с сотр. Они изучили мутации гена scute (скьют), влияюще­го на развитие щетинок на теле дрозофилы, и обнаружили явле­ние ступенчатого аллелизма. Было выявлено 14 мутаций гена scute: SCi, SC2, SC3 и т. д. Мутации отличались друг от друга редукцией щетинок на определенных участках тела: в одном случае не было щетинок на голове и предгруди, в другом — на предгруди и груди и т. д. Мы уже знаем, что при скрещивании особей с разными аллельными генами у потомков имеет место доминирование одного из них. В случае же серии аллелей гена scute у гетерозиготных особей был обнаружен частичный возврат к норме. У гетерозиготных потомков не развивались только те щетинки, которых не было у обоих родителей. Щетинки разви­вались нормально, если изменение наблюдалось только в одном из аллельных генов. Если, например, мутация SQ вызывала редукцию щетинок ABC, а мутация SC2 — редукцию щетинок BCD, то у гетерозиготы отсутствовали щетинки В и С и развива­лись нормально А и D. При графическом изображении взаимо­действия несколько пар аллеломорфов получается как бы лест­ница, ступенями которой служат отдельные аллели гена scute (скьют): SCi — ABC; SC2 — BCD; SC₃ — CDE.

Это явление получило название ступенчатого аллеломорфизма. Было показано, что ген не является единицей мутации, он дро­бим и имеет сложную структуру.

На основании проведенных исследований была сформулиро­вана центровая теория гена. Согласно ей ген состоит из отдельных функциональных участков — центров, которые могут независимо изменяться при мутациях.

Глубокие исследования тонкой структуры генов фага Т4, по­ражающего кишечную палочку, были проведены американским генетиком С. Бензером. Дикий тип фага Т4 лизирует разные штаммы кишечной палочки, в том числе штаммы В и К. При этом в бактериальных культурах наблюдается появление мелких стерильных пятен. При посеве фага на штамм В были обнаруже­ны и отобраны мутанты фага, названные rll (г — от англ. rapid, lysis — быстрый лизис), образующие крупные стерильные пятна (по сравнению с фагом дикого типа) и не способные размно­жаться на штамме К (не образуют стерильных пятен). Для ана­лиза выявленных мутантов С. Бензер разработал тест на компле-ментарность, который заключается в следующем: если бактерии

179

штамма К заразить смесью двух разных мутантов rll и это не приведет к лизису клеток штамма К, значит,- мутации у обоих фагов затрагивают одну и ту же функцию и произошли в одном и том же гене. Если же при совместном заражении восстанавли­вается дикий тип, т. е. произойдет лизис клеток штамма К, значит, мутации комплементарны и произошли в разных генах. С. Бензер исследовал попарно очень большое число мутантов rll и установил, что они принадлежат к двум функциональным группам: А и В. Любой из мутантов группы А комплементарен любому из мутантов группы В, в то же время два мутанта, относящиеся к одной и той же группе А или В, некомплементар­ны, они затрагивают одну и ту же функциональную единицу, и в этом случае сохраняется мутантный фенотип. Наличие двух классов мутантов привело к выводу о существовании двух функ­циональных единиц в пределах rll генома фага Тф Каждая из этих единиц связана, очевидно, с синтезом специфического полипЙЬтида, необходимого для роста на штамме К. Генетичес­кая единица функции, выявленная с помощью теста на компле-ментарность, была С. Бензером названа цистроном. В настоящее время термин «цистрон» используется как синоним гена.

Геном называется участок молекулы ДНК (у некоторых вирусов РНК), кодирующий первичную структуру полипептида, молекулы транспортной или рибосомной РНК или взаимодействующий с регу-ляторным белком.

Структурной единицей мутации и рекомбинации гена являет­ся одна пара нуклеотидов (или один нуклеотид в случае геномов, состоящих из одноцепочных ДНК или РНК). Для обозначения локализации мутаций в пределах гена применяется термин «сайт». Сайт может включать одну пару нуклеотидов, а в неко­торых случаях, возможно, и больше. Размер генов в разных организмах различен, однако в среднем ген включает 1500 пар нуклеотидов. Самые короткие — гены, кодирующие тРНК. Они включают приблизительно 190 пар нуклеотидов. Но имеются и очень длинные гены. Например, ген фиброина шелка тутового шелкопряда включает 16 тыс. пар нуклеотидов. Таким образом, ген — очень сложная структура.

Установлено, что молекулярное строение генов эукариот отличается от генов прокариот. У последних гены представляют собой непрерывную последовательность триплетов, обеспечи­вающих кодирование колинеарной последовательности ами­нокислот в определенной полипептидной цепи. У эукариот многие гены имеют мозаичную структуру. Оказалось, что они составлены из кодирующих участков — экзонов, разде­ленных некодирующими участками — интронами. Например, в генах тяжелой цепи иммуноглобулинов не менее пяти экзонов и четырех интронов, в гене овальбумина (яичного белка) восемь экзонов и семь интронов.

180

В последние годы у прокариот обнаружены перекрываю­щиеся гены. Так, у некоторых РНК-содержащих бактериофа­гов Е. coli (R17 и др.) считались установленными три гена — репликазы, белка оболочки и созревания вирусной частицы. Од­нако был обнаружен четвертый ген, кодирующий белок L, вклю­чающий 75 аминокислотных остатков и блокирующий лизис за­раженной клетки. Места для этого гена на РНК не было. Слева у гена обнаружили кодон-инициатор (АУГ), а справа — термина­тор (УАА). Между ними расположено 75 триплетов. Оказалось, что ген локализован частично в гене белка оболочки (47 нуклео­тидов), 36 нуклеотидов — в межгенном интервале и 142 нуклео-тида расположены в гене РНК — репликазы. Перекрывающиеся гены обнаружены также в некоторых одноцепочных ДНК фагов Е. coli и в ДНК вируса млекопитающих SV 40. Таким образом, используются одни и те же последовательности нуклеотидов для кодирования разных белков.

В конце 40-х годов XX в. Б. Мак-Клинток на основе генети­ческих экспериментов на кукурузе предсказала наличие в геноме организмов подвижных элементов — «прыгающих» генов. В конце 60-х годов у бактерий обнаружено два основных класса мобильных («прыгающих») генов, которые различались по длине и сложности организации: 1-й — инсерционные после­довательности, или lS-элементы. Длина их около 1000 пар нук­леотидов. Они содержат только один ген, ответственный за их перемещение; 2-й — транспозоны с длиной 3000—20 000 пар нук­леотидов. Транспозоны кроме системы транспозиции содержат дополнительные гены, определяющие устойчивость к антибиоти­кам, различным токсическим соединениям. В 70-х годах изучены мобильные гены у дрозофилы, затем было выявлено, что у эу­кариот они составляют не менее 5—10 % их генетического мате­риала. Мобильные гены вносят в геном факторы нестабильности и изменчивости, что может играть, по-видимому, существенную роль в эволюции.

ВЛИЯНИЕ ГЕНОВ НА РАЗВИТИЕ ПРИЗНАКОВ

Проявление действия генов на биохимическом уровне начали изучать в 1935 г. Билл и Эфрусси с исследований двух рецессив­ных мутаций окраски глаз у дрозофилы по генам vermilion (яркие глаза) и cinnabar (киноварные глаза). У особей, гомози­готных по этим генам, не образуется пигмент, определяющий нормальную окраску глаз. В результате глаза отличаются от осо­бей дикого типа. Сложные глаза дрозофилы развиваются из за­чатка или диска, образование которого происходит на стадии личинки. Глазной имагинальный диск можно пересадить в по­лость тела другой личинки, где он продолжит свое развитие. Билл и Эфрусси произвели имплантацию эмбриональной ткани

181

дисков глаз из личинок мух с мутантными генами vermilion и cinnabar в личинки нормальных мух-дрозофил и установили, что после метаморфозы этих личинок в зрелых мух имплантирован­ная ткань глаза развилась в дополнительные глаза нормальной окраски. Отсюда был сделан вывод, что в тканях мутантных мух не хватало какого-то вещества для синтеза нормальной окраски глаз.

На основании опытов Билл и Эфрусси пришли к выводу, что образование пигмента идет по пути: предшественник — вещество I— вещество II—пигмент. У мутанта по гену vermilion блокиро­вана реакция, в результате которой предшественник преобразует­ся в вещество I, а у мух с мутацией cinnabar блокирована реак­ция, в результате которой вещество I преобразуется в вещество И. В последующие годы было установлено, что вещество I (V⁺) является кинуренином и мутация V блокирует его образование из триптофана. Вещество II (Сп⁺) оказалось хромогеном — про­дуктом *февращения кинуренина. Мутация Сп блокировала ста­дию образования кинуренина хромогена — предшественника пигмента дикого типа. Исследования показали, что мутации в' генах, кодирующих определенные ферменты, ведут к блокирова­нию биохимических реакций, нарушая превращение определен­ных веществ, что влияет на образование признака — окраски глаз.

В 1940 г. Бидл и Татум избрали для своих исследований новый объект — гриб хлебной плесени нейроспору. У нейроспо-ры в результате последовательной цепи реакций из фенилалани-на синтезируется никотиновая кислота. Было обнаружено шесть мутаций, нарушающих нормальный ход ее синтеза. При помощи культивирования на минимальной среде и добавлении веществ, синтез которых был прерван мутацией, были установлены про­межуточные продукты и порядок их образования при синтезе никотиновой кислоты:

фенилаланин 1+ антраниловая кислота 2+ индол (+ серин) i>

триптофан 1+ кинуренин Д. оксиантраниловая кислота \ никоти­новая кислота.

Генетическое блокирование может происходить на любом из шести этапов, для каждого из которых нужен определенный фермент. Если у штамма нейроспоры произошла мутация на второй стадии, то процесс синтеза заканчивался на образовании антраниловой кислоты и шел дальше, если в среду вводили индол, синтез которого был прерван мутацией. Если мутация произошла на пятой стадии, то синтез обрывался на образовании кинуренина и продолжался только при добавлении в среду окси-антраниловой кислоты.

На основании полученных фактов Бидл и Татум предложили теорию: один ген — один фермент — один признак. По этой теории

182

каждый ген имеет только одну первичную функцию — опреде­лять синтез только одного фермента. Изменение в структуре гена, кодирующего определенный фермент, ведет к его выключе­нию. Если этот фермент не участвует в последовательной цепи реакции, то синтез определенного вещества в организме приос­танавливается на стадии, для которой этот фермент был необхо­дим. При этом возникает новый признак.

Впервые связь между генами и ферментами у человека обна­ружил Гаррод в 1902 г. При анализе родословных больных аль-каптонурией он пришел к заключению, что эта болезнь связана с обменом веществ и передается по наследству. Однако открытие Гаррода было оценено только через много лет, когда было уста­новлено, что целый ряд болезней у человека обусловлен наслед­ственными пороками метаболизма. При изучении фенилаланин-тирозинового обмена у человека было выявлено несколько забо­леваний, связанных с нарушением превращения фенилаланина до конечных веществ биосинтеза (рис. 38). Нарушения связаны с мутацией генов, кодирующих ферменты, принимающие участие на разных этапах метаболизма. Фенилкетонурия возникает в том случае, когда блокируется превращение фенилаланина в тирозин. Это ведет к увеличению фенилаланина в плазме крови, спинно­мозговой жидкости и в моче. Исследования показали, что у

ТИРОКСИН

ПРОМЕЖУТОЧ­НЫЕ ПРОДУК­ТЫ ОБМЕНА

ФЕНИЛ• АЛАНИН

ФЕНИЛПИРО-ВИНОГРАД-НАЯ КИСЛОТА

МЕЛАНИН

АДРЕНАЛИН И НОРАД-РЕНАЛИН

ТИРОЗИН	2	1.3.4-ДИОК-СИФЕНИЛ-АЛАНИН
t
ОКСИФЕНИЛПИ-РОВИНОГРАД-НАЯ КИСЛОТА
t3
2, 5-ДИОКСИ-ФЕНИЛПИРО-ВИНОГРАД-НАЯ КИСЛОТА

ГОМОГЕНТИ-

ЗИНОВАЯ

КИСЛОТА

со₂ + н₂о

Рис. 38. Схема фенилаланинтирозинового обмена у человека:

/ — фенилкетонурня (избыток фенилаланина). 2 — альбинизм: 3— тирокетотрия; 4— аль-каптонурия (черный пигмент в моче)

183

большинства больных детей умственное развитие отстает на 70 % и более. При альбинизме потеряна способность к образованию меланина. Кретинизм возникает при нарушении в превращениях тирозина. Заболевание сопровождается задержкой развития и ум­ственной отсталостью.

Заболевание тирозинозом связано с мутацией гена, кодирую­щего фермент, катализирующий образование гомогентизиновой кислоты. При заболевании алькаптонурией наблюдается наруше­ние синтеза фермента оксидазы, что ведет к накоплению гомо­гентизиновой кислоты. Моча больных алькаптонурией на возду­хе приобретает темную, почти черную окраску. На примере фе-нилаланинтирозинового обмена мы видим, как одно и то же исходное вещество (фенилаланин) под влиянием ферментов — продуктов разных генов, претерпевает превращения в разных направлениях, определяя в конечном итоге разные биохимичес­кие признаки. У низших организмов путь от гена до признака сравнительно короткий. У них наследственные признаки опреде­ляются "&нами, которые сосредоточены в одной клетке, и актив­ность генов регулируется продуктами метаболизма этой же клет­ки. У подавляющего большинства многоклеточных организмов путь от гена до признака значительно сложнее и менее изучен. Целый ряд исследований показывает, что характер индивидуаль­ного развития высших организмов определяется взаимодействи­ем многих генов, сложным взаимодействием ядра и цитоплазмы, взаимодействиями различных клеточных систем, обладающих ак­тивностью разных генов.

ДИФФЕРЕНЦИАЛЬНАЯ АКТИВНОСТЬ ГЕНОВ НА РАЗНЫХ ЭТАПАХ ОНТОГЕНЕЗА

Дифференцировка клеток — процесс, при котором во время дроб­ления оплодотворенного яйца клетки постепенно начинают отли­чаться одна от другой, что приводит в конечном итоге к формиро­ванию зародыша со многими специализированными тканями. Клет­ки разных тканей одного и того же организма отличаются друг от друга формой, размерами и строением. В то же время клетки одинаковых тканей даже у животных разных видов имеют сход­ство. Это связано с тем, что каждый из типов клеток специали­зирован для выполнения только им свойственных функции. На­пример, нервные клетки приобретают способность передать нервные импульсы, железистые клетки — способность к секре­ции соответствующих веществ и т. д.

Выяснение механизмов дифференцировки клеток — одна из главных задач современной биологии. Поскольку дифференци­ровка необратима, некоторые ученые в конце прошлого века считали, что в ее основе лежит неравное распределение генов в те или иные дифференцирующиеся клетки в ходе последователь-

184

ных клеточных делений. Это предположение было опровергнуто. В начале нашего века было показано, что каждая соматическая клетка имеет такой же набор хромосом, как и исходная оплодо­творенная яйцеклетка. Доказательством являются специальные опыты по пересадке ядер. Дж. Гёрдон (1962) разрушал ядра яйцеклеток лягушки ультрафиолетовыми лучами и инъецировал в энуклеированные яйцеклетки ядра дифференцированных кле­ток кишечного эпителия плавающего головастика. Небольшой процент таких ядер обеспечивал развитие головастиков и нор­мальных лягушек. Опытами было показано, что ядра кишечных клеток содержат все гены, необходимые для дифференцировки всех типов клеток.

В последующей работе по пересадке ядер Дж Гёрдон показал, что в течение первых десяти клеточных делений при развитии эмбриона лягушки в ядрах не наблюдается синтеза РНК. Клетки в этот период быстро делятся, реплицируют ДНК. Однако в клетках идет синтез белка. Дело в том, что у животных в период роста и созревания яйцеклетки в цитоплазме накапливается большое количество молекул РНК, которые, соединившись с белками-гистонами, образуют гранулы — информосомы.

Информосомы до оплодотворения яйцеклетки находятся в неактивном состоянии. Сразу же после оплодотворения мРНК освобождается от белков-гистонов, поступает в рибосомы цито­плазмы яйцеклетки и начинается синтез определенных белков по программе материнской ДНК. Поэтому начальный период разви­тия зиготы осуществляется под контролем генов материнского организма. С начала стадии гаструляции и в дальнейшем синтез белка осуществляется под влиянием мРНК, образующейся в ядрах клеток эмбриона, т. е. под контролем генов обеих роди­тельских особей. На первых этапах исследований основными экспериментальными объектами были иглокожие (морские ежи) и земноводные (лягушки, саламандры), потому что у них легко получать и оплодотворять яйцеклетки и следить за ходом эмбри­онального развития. Лишь в последние годы разработаны при­емы, при помощи которых появилась возможность изучать ран­ние стадии эмбриогенеза у мышей. На рисунке 39 приведена схема изменения активности генов в раннем эмбриогенезе ля­гушки и мыши.

Одним из примеров дифференциальной активности генов в период органогенеза может служить процесс формирования пуф-фов в гигантских хромосомах дрозофилы. Гигантские хромосомы слюнных желез являются политенными и включают до 1000 нитей. Они имеют по длине определенный рисунок. На хромосо­мах видны диски, которые представляют собой соединение гомо­логичных генов. Было установлено, что на определенных стадиях отдельные диски деспирализуются и принимают форму вздутий, получивших название пуффов. При помощи использования ра-

185






IO<

On

_ИИ

il

Ш 00

s

25

<sub>Us

I</sub>

UlX

S3 xm ш ш

II

JiiJU

ISES

_III

			t
<	IACT		II
2—	О		H*
	t-		ill

диоактивного уридина было установлено, что в пуффах происхо­дит интенсивный синтез молекул иРНК. Разные стадии развития личинок сопровождаются активностью определенных пуффов. Это говорит о том, что на разных этапах развития вступают в действие разные гены.

О неодновременной активности различных генов может сви­детельствовать изменение состава белков организма в связи с возрастом. На стадиях раннего эмбрионального развития у чело­века идет образование гемоглобина F, который состоит из двух цепей полипептидов — а и у. Приблизительно с 13 нед эмбрио­нального развития начинается синтез гемоглобина А, характер­ного для взрослого человека. У гемоглобина А цепь полипептида у заменена на цепь р несколько иного строения. Цепь а у обоих гемоглобинов одинакова, и ее синтез контролируется одним и тем же геном. У новорожденного гемоглобин F составляет 70— 80 % общего количества. И только к году происходит полная замена гемоглобина F гемоглобином А. По данным В. В. Пиль-ко, Е. К. Меркурьевой и С. Мигле, полная замена гемоглобина F гемоглобином А у телят происходит к ПО—120-дневному воз­расту.

Обнаружены существенные возрастные изменения в количе­стве и составе белков сыворотки крови у телят в эмбриональный период. По данным В. М. Холода, первый период эмбриональ­ного развития характеризуется низким содержанием сывороточ­ных белков (2,62 г%), затем количество их постепенно с возрас­том плода увеличивается и к 9 мес достигает 4,44 г%. Отноше­ние альбуминов к глобулинам возрастает с 0,40 у 2-месячного плода до 1,21 к моменту рождения. В постэмбриональный пери­од также наблюдаются изменения белкового спектра сыворотки крови. По данным А. С. Гурьяновой, у телок бурой латвийской породы содержание общего белка сыворотки крови с 3- до 18-месячного возраста увеличилось с 6,12 до 7,54 %, в том числе глобулинов с 3,03 до 4,24 %.

Некоторые органы и ткани специализируются на синтезе каких-то определенных белков, и количество РНК в них в от­дельные периоды возрастает или снижается. И. Я. Шихов изучал содержание ДНК и РНК в вымени телок, нетелей и коров. Он обнаружил, что отношение количества РНК к количеству ДНК составляет в среднем у половозрелых телок 0,48, у нетелей и коров в конце стельности 1,0, у коров в начале лактации 2,34 (с большими колебаниями), в конце лактации 1,72. Наблюдалась высокая степень связи (г = 0,71) между содержанием РНК в вымени и удоем коров. Это показывает, что образование РНК усиливается, когда в вымени коров синтезируется много белка при высоких удоях, и снижается при уменьшении удоев.

187

ВЗАИМОДЕЙСТВИЕ ЯДРА И ЦИТОПЛАЗМЫ В РАЗВИТИИ

Б. Л. Астауров в экспериментах по межвидовому андрогенезу с тутовым шелкопрядом убедительно показал главенствующую роль ядра в процессе индивидуального развития. Он получил межвидовые гибриды путем осеменения яиц дикого шелкопряда спермой домашнего шелкопряда и наоборот. Женские ядра инактивировались с помощью теплового шока (путем прогрева­ния). В этом случае в оплодотворении яйцеклетки участвовали ядра двух сперматозоидов. Ядерно-цитоплазматические гибриды получали цитоплазму от одного вида, а ядра — от другого. Раз­вившиеся особи всегда были мужского пола и по всем изучен­ным признакам похожи на вид, от которого они получали ядра.

Однако цитоплазма играет очень важную роль в реализации наследственной информации и формировании некоторых при­знаков организма. Известно, что основная часть цитоплазмы поступает в зиготу с яйцеклеткой. Цитоплазма яйцеклетки отли­чается dr цитоплазмы соматических клеток большим разнообра­зием белков, РНК и других видов молекул, синтезированных в оогенезе. Бовери, Конклин, Дриш и др. уже давно указывали на то, что определенные участки цитоплазмы яйцеклетки могут со­держать факторы, определяющие судьбу тех или иных дифферен­цирующихся клеток. В результате неодинакового пространствен­ного распределения веществ в цитоплазме яйцеклетки при дроб­лении зиготы идет неравнозначное распределение веществ (РНК, белков и др.) в бластомеры. На этом основании предполагалось, что активность генов зависит от цитоплазмы, и это нашло свое подтверждение в работах на молекулярном уровне за последние 10—15 лет. Дж. Гёрдон наглядно показал роль цитоплазмы в регуляции активности генов. Он вводил ядра дифференцирован­ных клеток в энуклеированные яйцеклетки амфибий. Функцио­нальное состояние ядра оценивал по синтезу ДНК и РНК, что определялось с помощью меченых предшественников. Обнару­жено, что в ядре нейрона взрослой лягушки, введенном в акти­вированную неоплодотворенную яйцеклетку, начинается синтез ДНК, а синтез РНК прекращается. Отсюда следует, что в цито­плазме яйцеклетки имеется активатор синтеза ДНК и репрессор синтеза РНК, которые действуют независимо друг от друга. Если ядра из клеток мозга взрослой лягушки пересадить в зрелый ооцит, то в них синтезируется РНК и не синтезируется ДНК. Если эти ядра пересадить в ооцит, находящийся на стадии деле­ний созревания, то в них не происходит синтеза ни ДНК, ни РНК. Харрис с помощью методов авторадиографии показал, что ядро эритроцита курицы, введенное в клетку тканевой культуры человека или мыши, реагирует на сигнал «чужой» цитоплазмы и начинает синтез ДНК и РНК. Некоторые органоиды цитоплаз­мы, имеющие свою систему белкового синтеза (митохондрии,

188

пластиды), могут влиять на развитие определенных признаков. Наследование признаков через цитоплазму получило название цитоплазматической или внеядерной наследственности. Так, у рас­тений наследование пестролистности идет по материнской линии и связано с передачей дочерним клеткам при делении разных типов пластид: зеленых, способных синтезировать хлоро­филл, и белых, не способных к его образованию.

Большое практическое значение имеет открытие цитоплазма­тической мужской стерильности у кукурузы М. И. Хаджиновым и М. Роде. Она обусловливается цитоплазматическим фактором щл⁵. Но имеет место и контролирующая роль ядра. Стериль­ность пыльцы наблюдается только при наличии в ядре гена if в гомозиготном состоянии (rfif). При наличии доминантного гена Rfb генотипе (RfRfvum Bfif) стерильность пыльцы не развивает­ся. К настоящему времени цитоплазматическая мужская стериль­ность обнаружена у ряда сельскохозяйственных культур (пшени­цы, сорго, лука, огурцов и др.). Таким образом, в процессе развития имеет место сложное взаимодействие ядра и цитоплаз­мы. В целом же у растений и особенно животных главная роль в формировании признаков организма принадлежит ядру.

РЕГУЛЯЦИЯ СИНТЕЗА иРНК И БЕЛКА

Все клетки организма, как бы они ни были дифференцирова­ны, как правило, тождественны по генотипу. В каждой клетке имеются все хромосомы и весь набор свойственных данному организму генов. Однако клетки разных тканей любого организ­ма отличаются по качественному и количественному составу белков. Различия наблюдаются даже в одной клетке в разное время. Это говорит о том, что в клетке транскрибируются не все гены сразу, а только те, которые кодируют белки и ферменты, необходимые клетке в данный момент для выполнения ее функ­ций. Отсюда следует, что в клетке должен существовать меха­низм, регулирующий активность генов и обеспечивающий в нужное время синтез необходимых ей белков в достаточном количестве. На основании изучения синтеза ферментов у кишеч­ной палочки французские генетики Ф. Жакоб и Ж. Моно пред­ложили теорию индукции (возбуждения) и репрессии (подавления) белкового синтеза.

По теории Ф. Жакоба и Ж. Моно, гены, влияющие на синтез какого-то фермента или белка, расположены в молекуле ДНК последовательно друг за другом в порядке их влияния на ход реакции синтеза. Такие гены были названы структурными. Перед группой структурных генов расположен общий для них ген-оператор, а перед ним — промотор. В целом эта функцио­нальная группа называется опероном. На структурных генах опе-рона образуется одна общая молекула иРНК (полицистронная

189

иРНК), так как структурные гены находятся одновременно в активном или неактивном состоянии. В той же молекуле ДНК на некотором расстоянии расположен ген-регулятор, под контро­лем которого вырабатывается белок, называемый репрессором. Молекула репрессора имеет два специфических участка — один для присоединения к оператору, другой для связывания индукто­ра. Присоединяясь к оператору, репрессор блокирует транскрип­цию. Когда ферменты на данном опероне не синтезируются, репрессор соединен с геном-оператором. Синтез фермента начи­нается под влиянием индуктора. Индуктором является опреде­ленное химическое соединение, которое служит материалом для данного фермента, или сходное с ним вещество. Индуктор со­единяется с репрессором и инактивирует его. Оператор освобож­дается, начинается синтез иРНК на структурных генах и соответ­ственно синтез фермента.

Рассмотрим принципы функционирования оперона на приме­ре регулйЬии синтеза ферментов, участвующих в усвоении лакто­зы кишечной палочкой (рис. 40). В лактозном опероне три структурных гена (гень генг, генз). Они занимают участок, включающий около 6000 нуклеотидных пар. Первым идет ген, определяющий структуру молекулы (J-галактозидазы, вторым — ген, кодирующий галактозидпермеазу, и третьим — ген, коди­рующий галактозидтрансацетилазу. Все три гена транскрибиру-

ДНК

ОПЕРОН

Рис. 40. Регуляция транскрипции (по Э. Гюнтеру)

Пример: область лактозного оперона у Е. coli:

А — в присутствии лактозы; Б — без лактозы; Яр—промотор; О—оператор; / — регулятор-ный ген; структурные гены — геш, генг, генэ; Р— репрессор; Л — молекула лактозы; волнис­тая линия — иРНК

190

ются вместе. РНК-полимераза присоединяется к промотору и продвигается вдоль оперона, транскрибируя его.

Активность структурных генов регулируется белком-репрессо-ром, который кодируется геном-регулятором. Репрессор выраба­тывается в небольшом количестве непрерывно и, если нет в питательной среде лактозы, прикрепляется к оператору, препят­ствуя продвижению РНК-полимеразы от промотора к структур­ным генам. Гены оказываются репрессированными, и синтез трех кодируемых ими ферментов не осуществляется. При по­ступлении в клетку лактозы она быстро связывается с молекула­ми репрессора, освобождая ген-оператор. Это ведет к тому, что РНК. полимеразы присоединяется к промотору и продвигается вдоль оперона, поочередно транскрибируя все три гена. В ре­зультате синтезируются ферменты, расщепляющие лактозу. Ин­дукция вызывается тем, что белок-репрессор не прикрепляется к оператору. После полной утилизации лактозы белок-репрессор освобождается и вновь связывается с геном-оператором, и про­цесс синтеза уже ненужных ферментов прекращается.

Опероны анаболических ферментов, аминокислот и азотистых оснований функционируют по принципу обратной связи. В этом случае синтез ферментов идет только до тех пор, пока конечного продукта в клетке недостаточно. Избыток продукта репрессирует синтез ферментов, участвующих в его образовании.

Механизмы регуляции у эукариот значительно сложнее и менее изучены. Это связано со сложной дифференцировкой кле­ток разных органов и тканей. У эукариот выявлены гены, прояв­ляющие активность во всех клетках организма. Они ответствен­ны за образование структур, общих для всех клеток. Имеются гены, действие которых проявляется только в специализирован­ных тканях. Кроме того, есть гены, ответственные за выполне­ние ограниченных функций — синтез гемоглобина, кератина волос и т. д. Это говорит о том, что и у эукариот должны быть механизмы регуляции генов. Возможно, эукариоты используют такой же механизм регуляции синтеза белков, как и прокариоты, но, кроме того, у них имеются и другие процессы регуляции, характерные для этих организмов.

У эукариот возможно одновременное групповое подавление ак­тивности генов: во всем ядре, в целой хромосоме или в большом ее участке. Предполагается, что такая репрессия генов осуществля­ется в значительной мере гистонами — основными белками, ко­торые входят в состав хромосом эукариот. Примером групповой регуляции активности генов является полное прекращение транскрипции всех генов при спермиогенезе у животных. Счита­ют, что такое выключение всех генов при образовании спермиев и постепенная их дерепрессия при эмбриогенезе связаны с изме­нениями белковых компонентов хромосом. Групповое выключе­ние активности генов в одной из Х-хромосом наблюдается в

191

онтогенезе у самок млекопитающих, обладающих двумя Х-хро-мосомами. В этих хромосомах находятся гены, детерминирую­щие дифференцировку пола на ранних стадиях онтогенеза. Затем одна из Х-хромосом инактивируется, превращаясь в так называе­мое тельце Барра. Этим достигается сбалансированность эффек­та генов из Х-хромосом у самок и самцов.

Имеется много примеров, указывающих на большую роль гормонов в регуляции активности генов. Мы уже разбирали во­прос о том, что в гигантских хромосомах двукрылых можно обнаружить активно транскрибирующиеся участки, которые ста­новятся разрыхленными и наблюдаются в виде пуффов. Пуффы появляются на разных стадиях развития в разных участках хро­мосом. Если вводить гормон экдизон особям, у которых выделе­ние гормона еще не начиналось, то можно добиться появления пуффов, как при естественной секреции гормона. Вначале на­блюдается появление «ранних» пуффов, а через 3—10 ч имеется уже около 100 «поздних» пуффов.

Гормон щитовидной железы, очевидно, влияет на проявление активности генов, обусловливающих процессы метаморфоза. При добавлении этого гормона в среду совершается быстрое превращение головастиков в лягушек. Известно, что гормон под­желудочной железы инсулин нормализует содержание глюкозы в крови. Вебер установил, что инсулин активирует три гена, кото­рые кодируют ферменты, использующие глюкозу (гликолиз и синтез гликогена), и в то же время он является репрессором для четырех генов, которые кодируют ферменты, влияющие на гли-конеогенез (синтез глюкозы из неуглеводистых веществ).

В последние годы исследуется роль пистонов и негистоновых хромосомных белков в регуляции действия генов. Исследования показывают, что гистоны, по-видимому, тормозяще действуют на синтез РНК. Например, у бобовых белок глобулин in vivo обра­зуется только в семядолях. Однако если удалить из хроматина других частей растения гистоновые компоненты, то и в них in vitro будет синтезироваться тот же глобулин. Это говорит о том, что гистоны, по-видимому, блокируют гены. Негистоновые хро­мосомные белки представлены большим многообразием, обнару­жено разное их содержание в хроматине различных тканей на разных стадиях развития. Предполагается, что они также участ­вуют в регуляции синтеза белка — снимают блокирующее дейст­вие гистонов. Однако регуляторная функция гистонов и негисто­новых белков пока точно не выяснена. К механизмам регуляции синтеза белка относится синтез дополнительной ДНК, которая затем поступает в цитоплазму. В цитоплазме на ДНК синтезиру­ется иРНК, а на ней белки, необходимые для клетки. В яйце­клетках амфибий и цитоплазме рыб в период роста и созревания ооцитов было обнаружено большое количество активной ДНК. Таким образом, ДНК ядра может образовывать фракции,

192

переходящие в цитоплазму, и синтез белка может регулироваться не только подавлением, но и усилением действия генов. Пробле­ма регуляции действия генов у высших организмов имеет боль­шое практическое значение в животноводстве и медицине. Структура ДНК определяет химическое строение и функции бел­ков, т. е. их качественный состав. Но в процессах развития и жизни организма очень важное значение имеет и количество синтезируемого белка, а это связано с регуляцией активности генов. Установление факторов, регулирующих синтез белка, рас­крыло бы широкие возможности управления онтогенезом, созда­ния животных с более высоким уровнем продуктивности и луч­шей устойчивостью к разного рода болезням.

ВЛИЯНИЕ СРЕДЫ НА РАЗВИТИЕ ПРИЗНАКОВ

Фенотип каждого организма формируется под влиянием гено­типа и условий среды. Генотип определяет норму реакции организ-. ма — границы изменчивости выражения признака под влиянием из­меняющихся условий окружающей среды. Те различия, которые зависят только от условий среды, называются модификациями. Роль генотипа и определенных факторов среды в образовании разных признаков организма может быть очень различной. Есть такие признаки, которые в основном обусловлены генотипом. К ним относятся качественные признаки, такие как группы крови, форма ушей у свиней, окраска тела и др. В то же время на формирование целого ряда признаков, особенно хозяйственно полезных (удой, содержание жира и белка в молоке, живая масса и др.), во многом влияют условия внешней среды.

Иногда под воздействием определенных факторов могут изме­няться и устойчивые признаки. Так, у кроликов, гомозиготных по рецессивному гену горностаевой окраски, имеющих белую окраску туловища и черные уши, хвост, конец морды и концы лапок, рисунок окраски можно изменить под влиянием темпера­туры. Н. А. Ильин выбривал у горностаевых кроликов участки белых и черных волос и создавал условия пониженной или по­вышенной температуры. В зависимости от температуры на вы­бритых участках тела отрастали белые или черные волосы. Для каждой части тела был установлен порог раздражения — темпера­тура, выше которой развивалась белая шерсть, а ниже — черная. Так, на боку кролика при температуре ниже 2 °С вырастала черная шерсть, на ухе при температуре выше 30 "С — белая шерсть и т. д. Таким образом, наследуется не рисунок кролика, а способность или неспособность в зависимости от температуры образовывать пигмент в волосе. При изменении условий среды иногда признак изменяется так же, как и под влиянием действия генов, но возникшие особенности не являются наследственны­ми. Такие изменения называют фенокопиями. Например, у кур

193

врожденный дефект бесхвостости наследуется, но в некоторых случаях обусловливается влиянием внешней среды в период на­сиживания.

Среда особенно влияет на развитие хозяйственно полезных признаков сельскохозяйственных животных. Неблагоприятные условия кормления и содержания в первую очередь влияют на высокопродуктивных животных.

В таблице 27 приведены данные по удою дочерей и внучек трех быков-производителей симментальской породы.

27. Продуктивность коров — дочерей и внучек разных быков-производителей в зависимости от условий кормления и выращивания

(по О. А. Ивановой)

Быки-произво­дители— отцы и деды коров

Удой коров за 300 дней лактации, кг

выращенных в посредственных условиях и датировавших при кормлении

обильном

выращенных и лактировавших при обильном кормлении

умеренном

Цезарь **	2882	4394	4941
Наследник 1	2899	4843	5201
Бис	2860	4898	5663

Как видим, у коров, выращенных в посредственных условиях и лактировавших при умеренном кормлении, между потомками разных быков имеются незначительные различия. При обильном кормлении у потомков Цезаря удой оказался меньше по сравне­нию с потомками Наследника на 449 кг и по сравнению с по­томками Биса на 504 кг. Еще значительнее была разница в удое потомков, выращенных и лактировавших при обильном кормле­нии. В этом случае потомки Биса превзошли по удою дочерей Цезаря на 722 кг и дочерей Наследника на 462 кг. При улучше­нии кормления потомство Цезаря повысило удой на 2059 кг, Наследника — на 2302, а Биса — на 2803 кг. Это показывает, что реакция на улучшение условий среды у потомства разных быков была различной. Из приведенного примера видно, что среда может сгладить наследственные различия между животными, в результате чего лучшие и худшие по генотипу особи по продук­тивности оказываются одинаковыми. Правильно отобрать наибо­лее ценных по генотипу животных можно только при оптималь­ных условиях среды.

Имеются наблюдения эмбриологов, говорящие о том, что рез­кое изменение среды в определенные периоды эмбрионального развития организма может привести к гибели плода. Такие пе­риоды называют критическими. Критические периоды обнаруже­ны в онтогенезе рыб, птиц, млекопитающих и человека. Они выявляются после поздней бластулы и предшествуют основным процессам морфогенеза. У человека первый критический период

194

относится к 1-й — началу 2-й недели после зачатия, второй — к 3—5-й недели развития, когда происходит закладка отдельных органов эмбриона человека. Третий критический период наблю­дается между 8-й и 11-й неделями, когда формируется плацента. В критические периоды наблюдается чувствительность эмбриона к недостаточному снабжению кислородом и питательными веще­ствами, ионизирующей радиации, перегреванию, охлаждению, лекарственным и ядовитым веществам, попадающим в кровь плода через плаценту. Указанные факторы могут вызвать замед­ление и остановку развития, появление уродств, высокую смерт­ность зародышей.

У кур критические периоды приходятся на 2—3-й день инку­бации, когда начинает формироваться система кровообращения; на 8—9-й день развития, когда начинается резко выраженная дифференцировка характерных для птиц органов и тканей; на 19-й день инкубации, когда снова усиливаются процессы диффе-ренцировки и начинает изменяться тип дыхания. В критический период эмбрионы птиц особенно чувствительны к изменению режима инкубации: температуры и влажности воздуха, а также аэрации яиц.

Предполагают, что у крупного рогатого скота также существу­ют критические периоды и первый период приходится на первые три дня развития зиготы. В критические периоды происходит, очевидно, смена матриц белкового синтеза и в связи с этим ослабление физиологических процессов.

При изучении соотношения среды и наследственности боль­шой интерес представляют особи человека и животных, совер­шенно идентичные по генотипу, — однояйцовые близнецы. У них генотипы тождественны, и они принадлежат к одному полу. Близнецов широко используют для выяснения вопроса о влия­нии различных факторов среды и наследственности на формиро­вание признаков организма. Изучая близнецов, можно получить данные о том, в какой степени среда может модифицировать проявление патологических симптомов определенной болезни.

Контрольные вопросы. 1. В чем заключается центровая теория гена? 2. Что такое ген, что вы знаете о строении гена? 3. Как проявляется влияние генов на развитие признаков? 4. Что понимается под дифференциальной активностью генов на разных этапах онтогенеза? 5. Что вы знаете о взаимодействии ядра и цитоплазмы в развитии? 6. Как происходит регуляция синтеза иРНК и белка в клетке? 7. Как влияет среда на развитие признаков? 8. Что вы знаете о критичес­ких периодах в развитии?